白介素—33、白介素—37在鼻息肉組織中的表達(dá)及意義

薛軍芳++++++柴向斌

[摘要] 目的 探討白介素-33（IL-33）、白介素-37（IL-37）在鼻息肉中的表達(dá)及其在鼻息肉中發(fā)揮的作用。 方法40例鼻息肉患者的鼻息肉組織及18例鼻中隔偏曲患者的正常鼻黏膜組織為本次研究對象，用免疫組織化學(xué)方法分別檢測其中IL-33及IL-37的表達(dá)情況。 結(jié)果 鼻息肉組IL-33陽性率為65.0%，IL-37陽性率為20.0%。正常鼻黏膜組中IL-33陽性率為33.3%，IL-37陽性率為77.8%。 結(jié)論 IL-33、IL37與鼻息肉發(fā)病密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 鼻息肉；白介素-33；白介素-37；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號] R765.25 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2015）12-0009-03

Expression of IL-33，IL-37 in human nasal polyps and clinical significance

XUE Junfang CHAI Xiangbin

Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery，F(xiàn)irst Clinical Medical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of IL-33，IL-37 in nasal polyps tissue，and their relevance to the pathogenesis of human nasal polyps. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of IL-33，IL-37， in excisional nasal polyps tissue from 40 patients with nasal polyps. In addition，the expression of IL-33，IL-37 was also detected in normal nasal mucosa from 18 patients with the nasal septum deviation. Results In the nasal polyps tissues，IL-33 positive rate was 65.0%，IL-37 positive rate was 20.0%.In the normal nasal mucosa， IL-33 positive rate was 33.3%，IL-37 positive rate was 77.8%. Conclusion IL-33 and IL-37 play an important role in the pathogenesis of nasal polyps.

[Key words] Nasal polyps； IL-33； IL-37； Immunohistochemical

鼻息肉為鼻科常見病，發(fā)病率較高，為感染、非感染性炎癥，解剖異常、免疫異常、遺傳因素等多致病因素導(dǎo)致的疾病實(shí)體，其發(fā)病機(jī)制尚不明確。近來研究表明，許多細(xì)胞因子在鼻息肉的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。IL-33、IL-37為新近發(fā)現(xiàn)的隸屬于IL-1家族的新型細(xì)胞因子，與許多炎癥性疾病及免疫性疾病密切相關(guān)。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測鼻息肉組織及正常鼻黏膜組織中IL-33、IL-37的表達(dá)情況，探討此兩種細(xì)胞因子在鼻息肉發(fā)生中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料來源

所取標(biāo)本均來自2013年10月～ 2014年9月我院住院鼻息肉患者手術(shù)標(biāo)本及鼻中隔偏曲患者正常鼻黏膜標(biāo)本。所有患者取材前1周內(nèi)均未使用過任何激素類藥物。所有鼻息肉患者術(shù)前均已經(jīng)過鼻竇CT、鼻內(nèi)窺鏡的確認(rèn)，術(shù)后所有鼻息肉組織均經(jīng)病理證實(shí)。其中男20例，女20例；年齡15～67歲。另取18例鼻中隔偏曲患者手術(shù)時(shí)的中鼻甲頭端距上緣3～5 mm 處、2 mm×2 mm大小的黏膜組織作為對照組，其中男 12例，女6例，年齡18～49歲，各組患者均無過敏性鼻炎及其他疾病史。鼻息肉組和正常黏膜組性別、年齡比較均無明顯差異（P>0.05），具有可比性。

1.2試劑與檢測方法

兩組標(biāo)本以10%的福爾馬林固定 24～48 h，常規(guī)石蠟包埋。4 μm 厚切片，兔抗人白介素-33抗體（博奧森，北京）工作濃度為 1∶100，兔抗人白介素-37抗體（博奧森，北京）工作濃度為 1∶200。免疫組化染色試劑盒（博奧森，北京）包括：3%H2O2去離子水、封閉用正常山羊血清工作液、生物素二抗工作液、辣根酶標(biāo)記鏈霉鏈霉卵白素工作液。DAB顯色，蘇木素襯染，封片，顯微鏡觀察。

1.3結(jié)果判斷

IL-33主要表達(dá)于上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞核[1]，胞漿也有少量表達(dá)，IL-37主要表達(dá)于炎癥細(xì)胞、上皮細(xì)胞的胞漿[2]，胞核也有少量表達(dá)，以上兩種因子均以胞核及胞漿中出現(xiàn)棕黃色至深棕黃色顆粒為陽性，分析5 個(gè)不同視野染色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)并計(jì)算，陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)在0～25%為“+”，26%～50%為“++”，≥51%為“+++”。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用 SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

IL-33主要表達(dá)于細(xì)胞核中，在細(xì)胞漿中也有少量表達(dá)，呈棕黃色和深棕黃色（圖 1、2）。18 例正常鼻黏膜組 6例為陽性（+），陽性表達(dá)率為 33.3%，其中5 例為弱陽性（+），1 例為中度陽性（++）。40 例鼻息肉組26 例陽性，陽性表達(dá)率為65%，其中 9 例為弱陽性（+），9 例為中度陽性（++），8例為強(qiáng)陽性（+++）。兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表 1。

IL-37主要表達(dá)于細(xì)胞漿中，呈棕黃色和深棕黃色（圖3、4）。18 例正常鼻黏膜組14例為陽性（+），陽性表達(dá)率為 77.8%，其中8例弱陽性（+），5 例為中度陽性（++），1例強(qiáng)陽性（+++）。40 例鼻息肉組8例陽性，陽性表達(dá)率為20.0%，其中 5 例弱陽性（+），2 例中度陽性（++），1例強(qiáng)陽性（+++）。兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

3 討論

鼻息肉作為一種多因素致病的炎癥性疾病，其發(fā)病機(jī)制一直沒有統(tǒng)一的認(rèn)識。目前發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞因子對鼻息肉的發(fā)生有一定作用[3]。近些年來的研究顯示，在鼻腔外側(cè)壁有一個(gè)不穩(wěn)定的組織微環(huán)境，在某些誘導(dǎo)因子的作用下，能產(chǎn)生、分泌許多不同類型的細(xì)胞因子。這些細(xì)胞因子不僅可以使血管內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞增殖，而且可以激活某些細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)，引起嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞釋放大量炎性介質(zhì)，導(dǎo)致局部病理改變，最終形成息肉。此次研究表明鼻息肉組織較正常鼻腔黏膜組織中的IL-33表達(dá)增高，IL-37表達(dá)降低，提示這些因素參與了鼻息肉的發(fā)病過程。

白介素-33（IL-33）是2005年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)多功能、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎因子，屬于IL-1家族新成員[4]，它的分子量約18kD，含有270個(gè)氨基酸[5]。IL-33常表達(dá)于屏障組織細(xì)胞，如皮膚、腸、肺等，當(dāng)這些細(xì)胞發(fā)生損傷時(shí)，全長IL-331-270在胞外可經(jīng)中性粒細(xì)胞絲氨酸蛋白酶、組織蛋白酶G和彈性蛋白酶酶切，產(chǎn)生3種活性形式，分別是IL-3395-270、IL-3399-270和IL-33109-270[6]。由于IL-33的特殊結(jié)構(gòu)，它具有核因子和細(xì)胞因子兩個(gè)功能，能激活肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞產(chǎn)生Th2類細(xì)胞因子，在炎癥、感染、自身免疫性疾病中發(fā)揮著十分重要的作用。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，IL-33具有核因子和細(xì)胞因子的雙重功能[7]，作為細(xì)胞因子它可以參與調(diào)節(jié)Th2免疫反應(yīng)，作為核因子可以定位于細(xì)胞核內(nèi)起轉(zhuǎn)錄抑制作用[8]。IL-33作為一種細(xì)胞因子，是在細(xì)胞發(fā)生損傷時(shí)分泌，其促進(jìn)炎癥發(fā)生的生物學(xué)活性是由細(xì)胞壞死引起的[9]。它可以作為一種危險(xiǎn)信號從細(xì)胞中釋放，激活肥大細(xì)胞和嗜酸或嗜堿性粒細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)，并促進(jìn)幼稚T細(xì)胞向Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)化，趨化Th2細(xì)胞達(dá)到病灶，發(fā)揮促炎作用[10]。IL-33的信號傳導(dǎo)通路與典型的Th2類細(xì)胞因子的傳導(dǎo)通路不同，IL-33是通過與細(xì)胞胞膜上的IL-1受體相關(guān)蛋白ST2及IL-1受體輔助蛋白組成的異二聚體將信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi)，募集下游的信號分子，來調(diào)節(jié) IL-4、IL-5、IL-13等Th2型細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄和隨后的生物學(xué)活性[11]，并且具有前炎癥因子的作用[12]。在對哮喘的研究中發(fā)現(xiàn)，在急性本實(shí)驗(yàn)中研究發(fā)現(xiàn)鼻息肉組織中白介素-33的表達(dá)較正常鼻黏膜高，IL-33可能在鼻息肉的發(fā)病過程中發(fā)揮促進(jìn)作用。

IL-37是Kumar等[13]在2000年發(fā)現(xiàn)的一種白介素-1家族新成員。人類IL-37基因存在于2號染色體上，結(jié)構(gòu)與IL-1家族相似，可分為5個(gè)亞型IL-37a-e，分子量是17-24kD[14-17]。它與其他IL-1家族成員不同，它是一種天然的免疫應(yīng)答抑制物，并且可以抑制促炎癥因子的產(chǎn)生[2]，在炎癥性疾病中發(fā)揮抑制作用[18]。已經(jīng)有研究證實(shí)，IL-37可以與IL-18Rα鏈非競爭性的形成復(fù)合體，從而抑制了NF-κB 和 MAPK 等途徑，使得IFN-γ的合成下調(diào)，對TLR 后信號傳導(dǎo)和 DC 細(xì)胞活性產(chǎn)生抑制作用，但對IL-18本身的活性卻無影響[15]，并且成熟的 IL-37 還可以進(jìn)入細(xì)胞核與 Smad3 結(jié)合，形成復(fù)合體，通過調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄來抑制促炎因子的產(chǎn)生[2]。在本實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)鼻息肉組織中IL-37的表達(dá)水平較正常鼻黏膜中的低，表明IL-37可能在鼻息肉的發(fā)病過程中起抑制作用。

綜上所述，此次試驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)在細(xì)胞學(xué)的水平上依次對IL-33及IL-37在鼻息肉及正常鼻黏膜中的表達(dá)進(jìn)行了定性研究。結(jié)果顯示，IL-33在鼻息肉組織中的陽性表達(dá)明顯高于正常鼻黏膜，IL-37在鼻息肉組織中的陽性表達(dá)明顯低于正常鼻黏膜，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明鼻息肉的發(fā)病過程可能與IL-33、IL-37密切相關(guān)，IL-33可能在鼻息肉的發(fā)病中發(fā)揮促進(jìn)作用，而IL-37則可能發(fā)揮抑制作用。因此，本實(shí)驗(yàn)為臨床靶向治療鼻息肉提供用藥指導(dǎo)，為預(yù)防鼻息肉的復(fù)發(fā)提供新理論依據(jù)。

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（收稿日期：2015-02-27）