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    咪唑基離子液體的結(jié)構(gòu)光譜性能分析及蛋白質(zhì)傳感

    2015-06-08 07:35陳旭偉等
    分析化學(xué) 2015年4期
    關(guān)鍵詞:傳感蛋白質(zhì)

    陳旭偉等

    摘 要 考察了對稱型鹵代咪唑基離子液體咪唑環(huán)上的烷基鏈長度和不同鹵素陰離子(Cl對其光譜性能的影響。實驗結(jié)果表明, 隨離子液體咪唑環(huán)中烷基鏈長度增加,離子液體的熒光強度增大; 隨離子液體中鹵素陰離子的電負性降低,其熒光強度減弱。加入血紅蛋白可導(dǎo)致咪唑型離子液體的熒光強度增強,且在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)濃度成正比,據(jù)此可對血紅蛋白進行定量檢測,線性范圍為0.03~1.0 μmol/L,檢出限為8 nmol/L。另外,根據(jù)不同蛋白質(zhì)對咪唑基離子液體熒光性能的影響,建立了陣列傳感系統(tǒng)用于8種蛋白質(zhì)的區(qū)分與識別,在蛋白質(zhì)濃度高于500 nmol/L時,識別正確率達到90%以上。

    關(guān)鍵詞 咪唑基離子液體; 熒光性能; 烷基; 鹵素陰離子; 蛋白質(zhì); 傳感

    1 引 言

    離子液體(Ionic liquids, ILs)是由有機陽離子和無機/有機陰離子構(gòu)成、在室溫或室溫附近呈液體狀態(tài)的鹽類。20世紀80年代,Wilkes等發(fā)現(xiàn)1,3二烷基咪唑氯鋁酸鹽比N烷基吡啶鹽具有更負的電化學(xué)還原電位,并在此基礎(chǔ)上合成了1,3二烷基咪唑類離子液體[1]。1992年,該課題組合成了第一個對水和空氣均穩(wěn)定的咪唑基離子液體1乙基3甲基咪唑四氟硼酸鹽EMimBF4[2]。自此,基于咪唑陽離子的新型離子液體相繼被合成,在催化[3]、分離分析[4,5]、電化學(xué)[6~8]和有機合成[9]等領(lǐng)域獲得了廣泛應(yīng)用。

    隨著對離子液體的性質(zhì)及其應(yīng)用研究的深入,人們也開始逐漸從分子水平上對離子液體的本質(zhì)和性質(zhì)進行研究,主要研究方法包括廣延X射線吸收、X射線衍射、中子衍射、光譜學(xué)分析等。早期的研究結(jié)果認為,離子液體在近紫外可見光區(qū)基本不產(chǎn)生光吸收,但Paul等發(fā)現(xiàn)咪唑基離子液體EMimBF4、1丁基3甲基咪唑四氟硼酸鹽BMimBF4和1丁基3甲基咪唑六氟硼酸鹽BMimPF6由于其結(jié)構(gòu)中咪唑環(huán)的存在,使得其在整個紫外可見區(qū)都表現(xiàn)出明顯的吸收[10],但其吸收光譜受雜質(zhì)(如水、無機陰離子、有色物質(zhì)等)的影響較大[11]。

    咪唑基離子液體EMimBF4、BMimBF4和BMimPF6在受紫外光激發(fā)后能發(fā)射出熒光,由于離子液體結(jié)構(gòu)內(nèi)存在不同的締合形式,其熒光強度與激發(fā)波長之間存在較強的依賴關(guān)系[12],但這些咪唑基離子液體共軛性較弱,熒光效率較低,其量子產(chǎn)率多在0.005~0.02之間。本課題組在前期研究中以N丁基咪唑和氯代正丁烷為原料制備了一種結(jié)構(gòu)對稱的咪唑基離子液體1,3二丁基咪唑氯代鹽BBimCl,在咪唑環(huán)上引入了對稱的丁基基團。離子液體的對稱結(jié)構(gòu)使其ππ*共軛性能極大增強,因此其熒光量子產(chǎn)率顯著提高,達到0.523[13]。這種結(jié)構(gòu)對稱型離子液體的優(yōu)良親水性及強熒光性能使其有望成為高靈敏、高選擇性傳感檢測生物大分子的新型熒光探針。

    本研究在前期工作的基礎(chǔ)上,進一步考察了對稱型鹵代咪唑基離子液體分子中咪唑環(huán)上取代烷基碳鏈長度(n=2, 4, 6, 8)和不同鹵素陰離子(Cl Br )

    對其光譜性能的影響,通過光譜表征的方法確定離子液體的結(jié)構(gòu)及其內(nèi)部的相互作用,并探討了該類咪唑基離子液體在蛋白質(zhì)分析檢測中的性能。

    2 實驗部分

    2.1 儀器與試劑

    F7000熒光分光光度計,U3900型紫外可見分光光度計(日本日立公司)。

    咪唑基離子液體1,3二丁基咪唑鹵代鹽(X=Cl、I)和溴代咪唑離子液體1,3二乙基咪唑溴代鹽EEimBr、1,3二丁基咪唑溴代鹽BBimBr、1,3二己基咪唑溴代鹽HHimBr和1,3二辛基咪唑溴代鹽OOimBr均購于上海成捷化學(xué)有限公司;血紅蛋白(Hb)、細胞色素C(Cytc)、溶菌酶(Lys)、肌紅蛋白(Mb)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(Trf)、卵清蛋白(OVA)、辣根過氧化酶(HRP)和牛血清白蛋白(BSA)購自美國Sigma公司,硫酸奎寧等購自國藥集團;所用試劑(除特別聲明外)為分析純,實驗用水為二次去離子水(18 MΩ cm)。

    2.2 實驗方法

    2.2.1 紫外可見吸收光譜測定

    配制0.001 mol/L 離子液體溶液,移取2 mL于光程為10 mm的石英比色皿中,在200~500 nm波長范圍內(nèi)掃描其吸收光譜。

    2.2.2 熒光光譜測定

    配制0.01 mol/L 離子液體溶液,移取500 μL于10 mm石英比色皿中測定其熒光光譜。電壓600 V,掃描速度1200 nm/min,激發(fā)/發(fā)射狹縫均為5 nm。

    4 結(jié) 論

    離子液體的結(jié)構(gòu)可以進行人為的設(shè)計和改造,賦予離子液體一些獨特的性質(zhì),具有廣闊的應(yīng)用前景。通過研究離子液體本身結(jié)構(gòu)與其光譜性能之間的構(gòu)效關(guān)系,深入了解有關(guān)離子液體結(jié)構(gòu)和其它分子間相互作用方面的信息,可為離子液體的功能化設(shè)計和制備以及實際應(yīng)用提供理論依據(jù)和指導(dǎo),以進一步拓展離子液體的應(yīng)用范圍。離子液體與蛋白質(zhì)之間的相互作用及其對離子液體的光譜性能影響為其在蛋白質(zhì)分析中的應(yīng)用提供了基礎(chǔ),如離子液體能進入蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域III中[24],但其詳細作用機理仍需進一步深入探討?;陔x子液體構(gòu)建的熒光陣列傳感器對多組份蛋白質(zhì)樣品具有一定識別能力,但其識別能力受熒光量子產(chǎn)率的限制,因此可考慮設(shè)計多種功能化離子液體及其復(fù)合物,增強或改善離子液體與生物大分子之間的相互作用,拓展其在生命分析中的應(yīng)用范疇。

    References

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