磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體與鼻咽癌患者預(yù)后關(guān)系的研究*

吳偉

鼻咽癌是我國(guó)南方常見的惡性腫瘤，放化療是其最主要治療方法，近年來，隨著腫瘤基礎(chǔ)研究的不斷深入，分子靶向治療越來越廣泛地應(yīng)用于鼻咽癌的個(gè)體化治療體系當(dāng)中。頭頸部惡性腫瘤存在表皮生長(zhǎng)因子 受 體（epidermal growth factor receptor，EGFR）超表達(dá)現(xiàn)象，鼻咽癌也不例外，很多研究表明，表皮生長(zhǎng)因子高表達(dá)與鼻咽癌預(yù)后有關(guān)，磷酸化EGFR（phosphorylated EGFR，pEGFR）是EGFR的活性形式，有學(xué)者認(rèn)為，EGFR在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中的作用并非受體高表達(dá)，而活性受體才是癌細(xì)胞增殖的關(guān)鍵因素。本研究對(duì)2012年1月-2013年6月在本院治療的107例鼻咽癌患者的病理標(biāo)本行pEGFR檢測(cè)，觀察pEGFR不同表達(dá)患者的生存情況是否有差異，現(xiàn)具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月-2013年6月在本院經(jīng)病理和影像學(xué)資料證實(shí)為鼻咽癌，病理類型為鼻咽未分化型非角性癌患者107例作為研究對(duì)象，其中男77例，女30例，年齡18~77歲，中位年齡50歲。根據(jù)pEGFR檢測(cè)結(jié)果分為兩組，陰性組47例，陽性組60例。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

表1 兩組患者臨床特征比較

1.2. 方法

1.2.1 放化療 陰性組有41例患者行誘導(dǎo)化療，陽性組有50例患者行誘導(dǎo)化療，誘導(dǎo)化療采用“順鉑+5-氟尿嘧啶”或“多西他賽+順鉑+5-氟尿嘧啶”方案，其中多西他賽60 mg/m2d1；順鉑30 mg/m2d1~5；5-氟尿嘧啶500 mg/m2d1~5。所有患者均接受根治性三維適形放射治療，采用直線加速器面頸聯(lián)合野照射，50 GY以后采用面頸分野放射，放療總劑量：鼻咽68~74 GY/34~37次，頸部（N1~3）66~70 GY/33~35次，頸部（N0）50~54 GY/25~27次，放療期間均配合化療藥物增敏，化療藥物采用單藥“DDP”方案，1次/周，30 mg/（m2·次）。

1.2.2 pEGFR檢測(cè)

1.2.2.1 試劑 鼠抗人pEGFR單克隆抗體購買自美國(guó)Abcam公司，二抗及DAB顯色液來自購買自福州邁新公司的Elivision Super DAB檢測(cè)試劑盒。

1.2.2.2 免疫組化檢測(cè)方法 免疫組織化學(xué)染色采用SP二步法。所有標(biāo)本組織均采用4%中性甲醛液固定，常規(guī)包埋、4 μm切片、脫蠟水化，進(jìn)行高溫高壓抗原修復(fù)，加3%過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，依次滴加一抗、二抗，DAB顯色、蘇木素復(fù)染。操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，用乳腺癌標(biāo)本作為陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.2.3 結(jié)果判斷 由兩位高年資病理醫(yī)生獨(dú)立閱片。pEGFR染色主要定位于細(xì)胞漿，染色強(qiáng)度計(jì)分：0分（無染色）、1分（淡黃色），2分（棕黃色）、3分（棕褐色）；染色范圍計(jì)分：0分（無陽性細(xì)胞）、1分（陽性細(xì)胞1%~25%），2分（陽性細(xì)胞26%~50%）、3分（陽性細(xì)胞51%~75%）、4分（陽性細(xì)胞76%~100%）。兩者相加得分0~7分，以大于等于3分為陽性，3分以下為陰性。

1.3 觀察指標(biāo) 所有患者均進(jìn)行隨訪，觀察兩組患者的總生存率、無進(jìn)展生存率和無局部區(qū)域復(fù)發(fā)生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 18.0軟件包對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用 字2檢驗(yàn)，用Kaplan-Meier法計(jì)算生存率及比較生存情況，進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組總生存率比較 隨訪截止時(shí)間2015年5月，隨訪率96.3%，中位隨訪時(shí)間31個(gè)月（23~40個(gè)月）。陰性組3年總生存率為77.6%，陽性組3年總生存率為69.4%，兩組3年總生存率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=2.431，P=0.119），見圖 1。

2.2 兩組無進(jìn)展生存率比較 陰性組3年無進(jìn)展生存率為70.5%，陽性組3年無進(jìn)展生存率為62.9%，兩組3年無進(jìn)展生存率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=2.065，P=0.151），見圖 2。

2.3 兩組無局部區(qū)域復(fù)發(fā)生存率比較 陰性組3年無局部區(qū)域復(fù)發(fā)生存率為86.0%，陽性組3年無局部區(qū)域復(fù)發(fā)生存率為65.7%，陰性組3年無局部區(qū)域復(fù)發(fā)生存率高于陽性組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=4.303，P=0.038），見圖 3。

圖1 兩組總生存率比較

圖2 兩組無進(jìn)展生存率比較

圖3 兩組無局部區(qū)域復(fù)發(fā)生存率比較

3 討論

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是發(fā)生在鼻咽部的一種惡性腫瘤，是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，惡性程度較高，其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確[1-2]。近年來對(duì)于影響研究鼻咽癌的預(yù)后因素的研究越來越多。其中，pEGFR的研究更為研究者所關(guān)注。

EGFR為酪氨酸激酶受體，屬于Ⅰ型受體酪氨酸激酶超家族，在體內(nèi)通過多種信號(hào)途徑在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[3]。EGFR在哺乳動(dòng)物組織中，尤其是在其上皮、間質(zhì)、神經(jīng)源性器官中廣泛表達(dá)，在頭頸腫瘤中表達(dá)較為常見，87.5%（35/40）的口腔鱗癌，89%（48/54）的鼻咽癌，93.3%（42/45）的喉癌組織均有EGFR 的過表達(dá)[4-6]。EGFR是涉及細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的極為重要的受體信號(hào)系統(tǒng)，和腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、惡性程度及預(yù)后密切相關(guān)。有成熟的研究也顯示了EGFR控制了癌癥的表型，有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖以及轉(zhuǎn)移的作用，同時(shí)可以促進(jìn)血管的生成和抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡等作用。自身磷酸化是EGFR的活性主要調(diào)節(jié)方式，EGFR通過磷酸化的酪氨酸殘基與下游底物酶反應(yīng)而傳遞信號(hào)。其下游主要的信號(hào)通路包括Ras-Raf-MEK-erk/MAPK信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路和JAK/STAT信號(hào)通路等。

張小鵬等[7]的研究認(rèn)為COX-2和EGFR在鼻咽癌患者的組織和血清中都有較高的濃度，同時(shí)其濃度的高低和鼻咽癌患者的分期有相關(guān)性，故可以成為鼻咽癌患者的診斷和預(yù)后的參考指標(biāo)。EGFR過表達(dá)與鼻咽癌進(jìn)程、放療抗拒性和預(yù)后差有關(guān)[8-11]。pEGFR是EGFR的活性形式。EGFR與細(xì)胞內(nèi)其他的細(xì)胞因子，例如EGF、TGF-α相結(jié)合以后，使EGFR本身磷酸化而使其活化，進(jìn)一步開啟了MAPK通路，MAPK通路的作用可以使細(xì)胞外的信號(hào)調(diào)節(jié)激酶發(fā)生了核轉(zhuǎn)位進(jìn)而活化，最后促使靶基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。并且，在臨床上的相關(guān)實(shí)驗(yàn)也證明了干擾EGFR進(jìn)行磷酸化可以抑制其下游通路的發(fā)生，進(jìn)而使細(xì)胞周期發(fā)生阻滯和延遲腫瘤的生長(zhǎng)速度。有研究已經(jīng)證實(shí)了在非小細(xì)胞肺癌患者中，pEGFR的高表達(dá)和臨床預(yù)后差有明顯的關(guān)系[12]。也有研究表明pEGFR低表達(dá)鼻咽癌患者無轉(zhuǎn)移生存明顯優(yōu)于高表達(dá)患者，故pEGFR可能在鼻咽癌的轉(zhuǎn)移中起著重要作用[13]。袁太澤等[14]的研究顯示pEGFR高表達(dá)患者5年無轉(zhuǎn)移生存率顯著低于pEGFR低表達(dá)者（P=0.012）。也有學(xué)者認(rèn)為EGFR表達(dá)與患者生存無關(guān)[15]。

本研究的結(jié)果顯示，兩組3年總生存率與無進(jìn)展生存率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），陰性組3年無局部復(fù)發(fā)生存率高于陽性組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.038）。pEGFR與患者的預(yù)后差相關(guān)聯(lián)，本驗(yàn)的研究結(jié)果在臨床方面進(jìn)一步證實(shí)了pEGFR的過表達(dá)與鼻咽癌患者的局部控制差相關(guān)。這一研究結(jié)論在臨床有一定的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，可作為鼻咽癌患者預(yù)后的一個(gè)推測(cè)指標(biāo)。但有關(guān)pEGFR導(dǎo)致鼻咽癌患者預(yù)后差的分子機(jī)制，本試驗(yàn)未做相關(guān)研究，可在以后的研究中進(jìn)一步探索。

[1]Lu J J，Cooper J S，Lee A W M.Nasopharyngeal cancer：multidisciplinary management[M].Germany：Springer Verlag，Heidelberg，2010：1-7.

[2]趙平.中國(guó)腫瘤臨床年鑒[M].北京：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2010：2.

[3]Heuckmann J M，Rauh D，Thomas R K.Epidermal growth factor receptor（EGFR）signaling and covalent EGFR inhibition in lung cancer[J].Clin Oncol，2012，30（27）∶ 3417-3420.

[4]Sarkis S A，Abdullah B H，Majeed B A，et al.Immunohistochemical expression of epidermal growth factor receptor （EGFR）in oral squamous cell carcinoma in relation to proliferation，apoptosis，angiogenesis and lymphangiogenesis[J].Head Neck Oncol，2010，2（13）：1-8.

[5]Chua D T，Nicholls J M，Sham J S，et al.Prognostic value of epidermal growth factor receptor expression in patients with advanced stage nasopharyngeal carcinoma treated with induction chemotherapy and radiotherapy[J].Int J Radiation Oncology Biol Phys，2004，59（1）：11-20.

[6]Starska K，Glowacka E，Lewy-Trenda I，et al.EGFR immunoexpression and peripheral blood cytokine secretion as potential biomarkers of tumor behavior in laryngeal squamous cell carcinoma[J].Med Sci Monit，2009，15（10）：518-527.

[7]張小鵬，邊楓，王麗新.環(huán)氧合酶-2及表皮生長(zhǎng)因子受體在鼻咽癌中的表達(dá)及相關(guān)性[J].山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報(bào)，2014，28（3）：23-27.

[8]Wissing J，Jansch L，Nimtz M，et al.Proteomics analysis of protein kinases by target class-selective prefractionation and tandem mass spectrometry[J].Mol Cell Proteomics，2007，6（3）：537-547.

[9]Knight Z A，Schilling B，Row R H，et al.Phosphospecific proteolysis for mapping sites of protein phosphorylation[J].Nat Biotechnol，2003，21（9）：1047-1054.

[10]McLachlin D T，Chait B T.Improved beta-elimination-based affinity purification strategy for enrichment of phosphopeptides[J].Anal Chem，2003，75（24）：6826-6836.

[11]Tseng H C，Ovaa H，Wei N J，et al.Phosphoproteornic analysis with a solid-phase capture-release-tag approach[J].Chem Biol，2005，12（7）：769-777.

[12]Sonnweber B，Dlaska M，Skvortsov S，et al.Highpredictive value of epidermal growth factor receptor phosphorylation but not of EGFR vmutationin resected stage non-smallcell lung cancer（NSCLC）[J].J Clin Pathol，2006，59（3）：255-259.

[13]Ma B B，Poon T C，To K F，et al.Prognostic significance of tumor angiogenesis，Ki67，p53 oncoprotein，epidermal growth factor receptor and HER2 receptor protein expression in undifferentiated nasopharyngeal lcarcinoma-a prospective study[J].Head Neck，2003，25（10）：864-872.

[14]袁太澤，李曉霞，曹云.表皮生長(zhǎng)因子受體活化與鼻咽癌患者無轉(zhuǎn)移生存的關(guān)系[J].癌癥，2008，27（5）：449-454.

[15]Leong J L，Loh K S，Putti T C，et al.Epidermal growth factor receptor in undifferentiated carcinoma of the nasopharynx[J].Laryngoscope，2004，114（1）：153-157.