原子吸收分光光度法測(cè)定多烯磷脂酰膽堿中砷鹽含量

丘文嘉，張玉英

(廣東省廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510160)

磷脂酰膽堿(PC)是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)，多烯磷脂酰膽堿可作為藥物制劑的輔料，又能治療肝炎、脂肪肝、高血壓等疾病，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥行業(yè)。我國(guó)生產(chǎn)的多烯磷脂酰膽堿注射劑的原料長(zhǎng)期依賴進(jìn)口，除企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)外，目前暫無相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。砷作為一種有毒元素[1]，在藥品、食品、化妝品標(biāo)準(zhǔn)中均有限量規(guī)定。由于多烯磷脂酰膽堿在生產(chǎn)工藝中可能引入砷鹽[2]，筆者參考2010年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄中的砷鹽檢查法，對(duì)該品種的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行復(fù)核，發(fā)現(xiàn)相關(guān)方法干擾性強(qiáng)[3－7]，不適用于本品的砷鹽測(cè)定，故創(chuàng)新性地增加了原子吸收分光光度法進(jìn)行試驗(yàn)[8]，旨在為該品種國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制訂和完善提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Thermo－3500型原子吸收分光光度計(jì)(熱電公司);WHG－102A2型流動(dòng)注射氫化物發(fā)生器(北京瀚時(shí)制作所);砷空心陰極燈(北京曙光明電子光源儀器有限公司);電子天平(梅特勒公司)。As國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000 μg/mL，國(guó)家鋼鐵材料測(cè)試中心鋼鐵研究總院，GSBG62028－90，批號(hào)為13070982);樣品3批(某公司委托檢驗(yàn)樣品，批號(hào)分別為2120001，2120002，2120003);水為去離子水，其余試劑均為分析純。16%碘化鉀(KI)－10%抗壞血酸溶液(稱取碘化鉀16 g，抗壞血酸10 g，溶于100 mL水)，1%硼氫化鈉－0.3%氫氧化鈉溶液(將1 g氫氧化鈉用0.3%氫氧化鈉溶液溶解，混勻即得)，臨用前配制。

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器最佳工作條件

載氣:氬氣;載氣壓力:0.25 MPa;載氣流速:200 mL/min;測(cè)量時(shí)間:20 s;加熱電壓:140 V;載液:1%鹽酸溶液。在此條件下，原子分光光度吸收?qǐng)D譜見圖1。

圖1 原子分光光度吸收?qǐng)D譜

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液:精密量取砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(As 1 000 μg/mL)1 mL，置100 mL容量瓶中，加1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，加1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得砷標(biāo)準(zhǔn)貯備液(100 ng/mL)。精密量取砷標(biāo)準(zhǔn)貯備液 0，1.0，2.0，5.0，7.0，10.0 mL，分別置 50 mL 容量瓶中，加入16%KI－10%抗壞血酸溶液5 mL，用1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度(標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液質(zhì)量濃度為 0，2.0，4.0，10.0，14.0，20.0 ng/mL)，搖勻，放置 2 h，測(cè)定。供試品溶液:取本品約 0.5 g，精密稱定，置100 mL碘瓶中，加硝酸10 mL、硫酸2 mL，靜置過夜;加入2～3粒碎磁片(已經(jīng)硝酸浸泡并清洗干凈)，于瓶口加小漏斗，置電爐上加熱至出現(xiàn)黑色時(shí)，滴加高氯酸至溶液變清(約加6～8 mL)，放冷至室溫;用1 mol/L鹽酸溶液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加16%KI－10%抗壞血酸溶液2.0 mL，用1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，混勻，放置2 h，測(cè)定。同法制備空白溶液，進(jìn)樣測(cè)定。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:以1%硼氫化鈉－0.3%氫氧化鈉為還原劑，1%鹽酸溶液為載液，吸取對(duì)照品溶液進(jìn)入氫化物發(fā)生器，在193.7 nm波長(zhǎng)處進(jìn)樣測(cè)定，記錄吸光度值。以峰高(Y)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=0.031 67 X+0.038 0，r=0.999 4。結(jié)果表明，As的質(zhì)量濃度在2.0～20.0 ng/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

檢出限測(cè)定:按2.2項(xiàng)下方法，取標(biāo)準(zhǔn)空白溶液重復(fù)進(jìn)樣11次，測(cè)定，由公式 DL=3 Sb/K計(jì)算檢出限，其中 K為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，Sb為11次空白標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定偏差。該方法的檢出限為0.226 ng/mL。

精密度試驗(yàn):取標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的砷(20 ng/mL)對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣7次，測(cè)定吸光度。結(jié)果平均吸光度值為0.641 2，RSD為0.56%(n=7)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)為2120001)，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果As平均含量為0.12 mg/kg，RSD 為 1.54%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取質(zhì)量濃度為20 ng/mL的對(duì)照品溶液，分別于0，2，4，12 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定吸光度。結(jié)果的 RSD 為 0.71%(n=4)，均未超過5.00%，可見對(duì)照品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):本研究中進(jìn)行了高、中、低3種質(zhì)量濃度的加樣回收試驗(yàn)，結(jié)果見表1。

表1 砷的加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

稱取一定量樣品，按2.2項(xiàng)下方法消解后進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為2120001，2120002，2120003的樣品中砷的含量分別為0.12，0.11，0.10 mg/kg。

3 討論

本研究中采用硝酸鎂法、過氧化氫法、直接炭化法按2010年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄ⅧJ第二法對(duì)樣品進(jìn)行砷鹽檢查，結(jié)果經(jīng)硝酸鎂法處理后的供試品溶液加標(biāo)準(zhǔn)品溶液的監(jiān)控管顏色淺于標(biāo)準(zhǔn)管顏色;經(jīng)氧化氫法處理后標(biāo)準(zhǔn)品溶液管顏色淺于供試品溶液管顏色;直接炭化法中，供試品溶液管顏色淺于標(biāo)準(zhǔn)品溶液管顏色，且標(biāo)準(zhǔn)品溶液管顏色淺于供試品溶液加標(biāo)準(zhǔn)品溶液管，但供試品溶液消化不完全。因此，本品不宜采用2010年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄中砷鹽檢查法檢查。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，原子吸收分光光度法測(cè)定多烯磷脂酰膽堿中砷鹽的含量，其檢出限、精密度、加標(biāo)回收率、穩(wěn)定性等指標(biāo)均較好，且試驗(yàn)過程簡(jiǎn)便，測(cè)試專屬性強(qiáng)，適用于多烯磷脂酰膽堿中砷的控制。

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