HPLC法測(cè)定蘋(píng)果酸阿莫曲坦含量的研究

周唯蘭等

摘要：[目的]建立一種高效液相色譜法，測(cè)定蘋(píng)果酸阿莫曲坦片的含量。[方法]采用高效液相色譜法（HPLC），色譜柱為Agilent Zobax SB C8 column （250×4.6 mm，5 μm ）；以緩沖液（取0.5 g辛烷磺酸鈉與5 ml磷酸溶液，加水至1 000 ml，用5 mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至3.0）-乙腈作為流動(dòng)相，等度洗脫，流速1.0 ml/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，進(jìn)樣量10 μl。[結(jié)果]蘋(píng)果酸阿莫曲坦的濃度在17.49～209.88 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（Y=27.534X+9.693，r=0.999 9），高、中、低 3 種濃度的平均回收率（n=3）為99.23% （RSD=0.95%）；中間精密度RSD=0.98%（n=6），重復(fù)性和耐用性良好。[結(jié)論]該方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，可作為蘋(píng)果酸阿莫曲坦片含量的檢驗(yàn)方法。

關(guān)鍵詞： 蘋(píng)果酸阿莫曲坦；含量測(cè)定；HPLC

中圖分類號(hào)：S854.5+3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）08-007-02

蘋(píng)果酸阿莫曲坦片由西班牙Almirall Prodesfarma公司原研，Almirall與Johnson & Johnson和Abbott等公司合作開(kāi)發(fā)，于2000年9月首次在西班牙上市，2001年在美國(guó)、丹麥、芬蘭、德國(guó)、新西蘭等國(guó)家上市。適應(yīng)癥為有偏頭痛病史的患者有或無(wú)先兆的偏頭痛發(fā)作的急性治療，耐受性好，不良反應(yīng)輕微且短暫。該藥物有望成為曲坦類藥物的后起之秀，有著較廣闊的市場(chǎng)前景[1]。為了臨床安全和合理用藥，筆者建立了HPLC法測(cè)定蘋(píng)果酸阿莫曲坦含量，對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行控制，方法可靠，結(jié)果準(zhǔn)確。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 1100高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫，VWD紫外檢測(cè)器）；BP61型Sartorius電子分析天平（上海精科儀器廠）；蘋(píng)果酸阿莫曲坦對(duì)照品（批號(hào)：FOJ054，USP）；蘋(píng)果酸阿莫曲坦片（自制：14110101，14110601，14110901）；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

1.2 色譜條件 色譜柱：Agilent Zobax SB C8色譜柱（250×4.6 mm，5 μm ）；流速1.0 ml/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μl。以緩沖液（取0.5 g辛烷磺酸鈉與5 ml磷酸溶液，加水至1 000 ml，用5 mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至3.0）-乙腈（70∶30）作為流動(dòng)相，按等度進(jìn)行洗脫。

1.3 測(cè)定方法 取本品適量（約相當(dāng)于蘋(píng)果酸阿莫曲坦17.5 mg），精密稱定，置50 ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相溶液溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 ml，置10 ml棕色量瓶中，用流動(dòng)相溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取蘋(píng)果酸阿莫曲坦對(duì)照品，精密稱定，加流動(dòng)相溶液溶解，并定量稀釋制成約含蘋(píng)果酸阿莫曲坦70 μg/ml的溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2 結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取本品粉末，精密稱定，加流動(dòng)相溶液溶解，并定量稀釋制成約含蘋(píng)果酸阿莫曲坦70 μg/ml的溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。精密量取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液10 μl，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，峰面積和保留時(shí)間的RSD應(yīng)小于2.0%，結(jié)果表明本品色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣重復(fù)性良好。

2.2 空白干擾專屬性試驗(yàn) 取混合均勻的空白輔料適量（約相當(dāng)于蘋(píng)果酸阿莫曲坦17.5 mg），精密稱定，置250 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶液適量，超聲使主藥溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為空白輔料溶液。精密量取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，輔料在與供試品主峰保留時(shí)間相同處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，不干擾本品的含量的測(cè)定。

2.3 線性與范圍 取蘋(píng)果酸阿莫曲坦對(duì)照品約17.5 mg，精密稱定，置50 ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液；精密量取貯備液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 ml，分別置于10 ml棕色量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取上述溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，

回歸方程為Y=27.534X+9.693（r=0.999 9）。蘋(píng)果酸阿莫曲坦?jié)舛仍?7.49～209.88 μg/ml范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取蘋(píng)果酸阿莫曲坦樣品，精密稱定，加流動(dòng)相溶液溶解，并且定量稀釋制成約含蘋(píng)果酸阿莫曲坦70 μg/ml的溶液，平行配制6份樣品進(jìn)行含量測(cè)定，考察該方法的重復(fù)性。研究表明，平行試驗(yàn)6份樣品的含量測(cè)定結(jié)果RSD小于2%，方法重復(fù)性良好，適合含量測(cè)定。

2.5 中間精密度試驗(yàn) 取本品，按上述方法，分別于不同時(shí)間、不同實(shí)驗(yàn)員、不同儀器試驗(yàn)按照上述測(cè)定方法測(cè)定，平行配制6份樣品進(jìn)行含量測(cè)定，將6次的測(cè)定結(jié)果與重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果做統(tǒng)計(jì)分析。由表1可知，2次測(cè)定結(jié)果基本一致，無(wú)明顯不同，表明方法的精密度良好。

2.6 回收率試驗(yàn) 取蘋(píng)果酸阿莫曲坦對(duì)照品約17.5 mg，精密稱定，置50 ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相溶液溶解，并且稀釋至刻度，搖勻；精密量取2 ml，置10 ml棕色量瓶中，用流動(dòng)相溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。分別稱取蘋(píng)果酸阿莫曲坦原料約280、350、420 mg，各3份，按20片處方配比，分別加適量輔料壓片，各取1片按照含量測(cè)定項(xiàng)下檢查法制備供試品溶液。精密量取上述溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。由表2可知，回收率良好。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，于棕色量瓶中室溫放置10 h，分別在0、1、2、4、6、8和10 h精密量取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察含量的變化。研究表明，含量測(cè)定溶液于棕色量瓶中室溫放置10 h，峰面積無(wú)明顯變化，可知該溶液穩(wěn)定良好。

2.8 耐用性試驗(yàn) 通過(guò)將色譜條件的流動(dòng)相初始比例、pH、流速、柱溫及色譜柱更換進(jìn)行微小的變動(dòng)，考察該色譜條件的耐用性。由表3可知，對(duì)色譜條件進(jìn)行微小變動(dòng)，各變異條件下對(duì)本品含量檢測(cè)無(wú)明顯影響，可知該方法耐用性良好。

2.9 樣品測(cè)定 按照“1.3”項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定蘋(píng)果酸阿莫曲坦片14110101、14110601、14110901批的含量結(jié)果分別為99.23%、99.96%、100.23%。

3 討論

目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)蘋(píng)果酸阿莫曲坦含量測(cè)定的相關(guān)報(bào)道，筆者建立了一種采用HPLC法測(cè)定蘋(píng)果酸阿莫曲坦含量的方法，其準(zhǔn)備度高，方便快捷，能有效控制蘋(píng)果酸阿莫曲坦的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] 王鵬，高永鑫，廖福廣.抗偏頭痛新藥阿莫曲坦[J].中國(guó)新藥雜志，2006（2）：152-154.