2010年至2014年新余市無償獻(xiàn)血者血液檢測(cè)結(jié)果分析

彭小華 ，李麗平 ，歐陽剛 ，何敏 ，吳青蓮

(1、新余市中心血站；2、新余市渝水區(qū)珠珊鎮(zhèn)衛(wèi)生院，江西 新余 338000)

預(yù)防和控制經(jīng)輸血傳播疾病的發(fā)生是保障血液及血液制品安全的重要內(nèi)容，為了解分析新余地區(qū)無償獻(xiàn)血者血液感染指標(biāo)的檢測(cè)情況，提高無償獻(xiàn)血者血液篩查效率，調(diào)整新形勢(shì)下血液安全策略，有效阻斷輸血后相關(guān)傳染病的發(fā)生，保證血液安全，筆者對(duì)2010年1月1日至2014年12月31日新余市無償獻(xiàn)血者血液檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行回顧調(diào)查統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2010年1月1日至2014年12月31日初篩合格的獻(xiàn)血者共45078例，初次獻(xiàn)血者4329例，固定獻(xiàn)血者2256例。符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》，由采血人員完成每名獻(xiàn)血者2管標(biāo)本的留取，其中一管（帶分離膠EDTA-K2抗凝）用于核酸檢測(cè)（自2012年3月1日起開展NAT篩查），另一管（EDTA-K2抗凝）用于血清學(xué)檢測(cè)。所留標(biāo)本均在＜4 h離心，置2～8℃冰箱保存。

1.2 儀器與試劑 ALT檢測(cè)試劑（浙江艾康，深圳邁瑞，長春匯力）；ELISA檢測(cè)試劑（浙江艾康，廈門新創(chuàng)，北京萬泰），核酸檢測(cè)試劑（上海浩源生物科技有限公司）。檢測(cè)儀器：C-100干式生化分析儀（艾康生物技術(shù)有限公司）；BS-220S全自動(dòng)生化分析儀 （深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；U-ranus-AE-100全自動(dòng)酶免分析儀(深圳愛康電子公司)；血液核酸篩查平臺(tái)（上海浩源）：Hamilton STAR全自動(dòng)混樣儀 (瑞士哈美頓博納圖斯股份公司)、Ezbead System-32提取儀 (美國Texas BioGene公司)、7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀(美國ABI公司)。

1.3 方法

1.3.1 初篩檢測(cè) 硫酸銅比重法篩查血紅蛋白，金標(biāo)試紙法快速篩查HBsAg以及干式法篩查ALT（2011年1月起開展）。

1.3.2 常規(guī)檢測(cè) HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP檢測(cè)均采用ELISA法，ALT檢測(cè)采用速率法，均使用兩種試劑作同步檢測(cè)。ELISA檢測(cè)每批實(shí)驗(yàn)均設(shè)有室內(nèi)質(zhì)控對(duì)照、陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：ELISA 檢測(cè)：S/CO≥1為陽性，0.8≤S/CO＜1為灰區(qū)，S/CO＜0.8為陰性；ALT 檢測(cè)：ALT＞40U/L 者判定為不合格。

1.3.3 NAT篩查 采用實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法，由上海浩源生物科技有限公司提供三合一血液篩查試劑，在1個(gè)反應(yīng)管中同時(shí)檢測(cè)HBV-DNA、HCV-RNA以及HIV-1 RNA 3種病毒，并可直接區(qū)分病毒種類（CT值＞45為陰性，CT值≤45為陽性）。NAT篩查先用全自動(dòng)混樣儀匯集標(biāo)本，實(shí)行8人份(pool)混合檢測(cè)，再在提取儀中采用磁珠法提取核酸，然后在擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，利用軟件自動(dòng)判讀結(jié)果。每個(gè)pool均設(shè)內(nèi)對(duì)照，NAT篩查每批實(shí)驗(yàn)均設(shè)外部對(duì)照。混合檢測(cè)陰性判定為陰性，混合檢測(cè)陽性進(jìn)行拆分檢測(cè)，拆分檢測(cè)陰性判定為陰性，拆分檢測(cè)陽性再用血漿標(biāo)本復(fù)測(cè)，檢測(cè)結(jié)果陽性判定為陽性，為不合格；檢測(cè)結(jié)果陰性判定為陰性，將核酸檢測(cè)陽性標(biāo)本及血漿袋送至衛(wèi)生部臨檢中心確證。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05或P＜0.01表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2010年1月1日至2014年12月31日血液常規(guī)檢測(cè)情況 按不同文化程度、不同性別及不同年齡的無償獻(xiàn)血者血液常規(guī)檢測(cè)情況如表1~表4所示。

2.2 2012年3月1日至2014年12月31日血液NAT篩查情況 共檢測(cè)酶免陰性和單試劑陽性及灰區(qū)標(biāo)本25727例，檢出40例HBV-DNA陽性獻(xiàn)血者，HBV-DNA 陽性率為 0.16%（40/25727），未發(fā)現(xiàn)HCV-RNA及HIV-1RNA陽性獻(xiàn)血者。40例中16例為第1次獻(xiàn)血(5例為灰區(qū)標(biāo)本)，占40%，其余24例皆為＞2 次獻(xiàn)血，占 60%；男性占 80%（32/40），女性占 20%（8/40）；大中專以上占 60%（24/40），高中及高中以下占 40%（16/40）；18～25 歲占 5%（2/40），26～35 歲 占 22.5%（9/40），36～45 歲 占 52.5%（21/40），46～55 歲占 20%（8/40）。 HBV-DNA 陽性標(biāo)本自2012年5月份開始送衛(wèi)生部臨檢中心檢測(cè)，共送檢30人份，二對(duì)半檢測(cè)結(jié)果分類比較見表5。

3 討論

表1結(jié)果顯示新余市中心血站2010年1月1日至2014年12月31日無償獻(xiàn)血者血液的常規(guī)檢測(cè)總不合格率為3.78%，各年不合格率比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=63.68，P＜0.01)，不合格率由高到低依

次為：ALT（1.81%）＞HBsAg（1.24%）＞抗-TP（0.40%）＞抗-HCV（0.21%）＞抗-HIV（0.12%），ALT 不合格率與萍鄉(xiāng)地區(qū)的1.8%接近[1]，低于撫州地區(qū)的2.36%[2]，是血液報(bào)廢的首要因素，造成這種情況的原因有多種，但其中的兩方面原因可能比較重要：一是ALT初篩與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)所用儀器及試劑的原理與方法學(xué)不相同，導(dǎo)致兩者所得結(jié)果的相關(guān)性不佳；二是獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本在采集后未能及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，在放置較長時(shí)間后紅細(xì)胞破裂而使胞內(nèi)ALT釋放到血漿中，從而引起接近篩查閾值（40U/L）標(biāo)本出現(xiàn)ALT異常。ALT是肝炎病毒感染的非特異性指標(biāo)。ALT升高受多種因素影響，但在淘汰不合格血液，控制輸血后肝炎的發(fā)生還是起到了重要作用。除了病理因素外，一些非病理因素也會(huì)引起ALT升高，如飲酒、高脂飲食、睡眠不足、劇烈運(yùn)動(dòng)、服藥等均可造成ALT升高，因此必須重視體檢及ALT初篩環(huán)節(jié)，加強(qiáng)獻(xiàn)血前注意事項(xiàng)的宣傳工作。應(yīng)不斷強(qiáng)化ALT的初篩和復(fù)檢之間的比對(duì)和校準(zhǔn)，建立本站實(shí)驗(yàn)室的干化學(xué)法和速率法之間ALT值的關(guān)系，與此同時(shí)嚴(yán)格要求工作人員標(biāo)準(zhǔn)化操作。ALT不同年度呈明顯差異，可能是由于自2011年開展對(duì)街頭獻(xiàn)血和團(tuán)體獻(xiàn)血均實(shí)行ALT初篩檢測(cè)，使ALT的不合格率顯著下降有關(guān)，有效的減少了血液報(bào)廢?？?HIV不同年度呈明顯差異，可能與城市人口流動(dòng)性相對(duì)不高、人們的思想意識(shí)提高、低危固定無償獻(xiàn)血者增多、萬泰試劑更換為抗原抗體檢測(cè)模式有關(guān)。經(jīng)新余市疾病預(yù)防控制中心WB法確認(rèn)陽性3例，不確定5例，確認(rèn)陰性38例。酶免篩查陽性、確認(rèn)陽性和不確定主要集中在18~25歲年齡段，各職業(yè)均有初篩陽性出現(xiàn)，但主要集中在學(xué)生中（50%）。

表1 各年份無償獻(xiàn)血者血液常規(guī)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)不合格率比較[n（%）]

表2 不同文化程度獻(xiàn)血者常規(guī)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)不合格率比較[n（%）]

表3 不同性別獻(xiàn)血者常規(guī)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)不合格率比較[n（%）]

表4 不同年齡段獻(xiàn)血者常規(guī)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)不合格率比較[n（%）]

表5 電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）二對(duì)半檢測(cè)結(jié)果分類

HBsAg陽性是血液不合格的第二大指標(biāo)，占總不合格率的32.7%（818/1706）。對(duì)獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血前用金標(biāo)試紙法初篩，能有效篩選出大部分HBsAg陽性，但在實(shí)驗(yàn)室用ELISA方法檢測(cè)還有陽性檢出，表明金標(biāo)試紙法仍有漏檢現(xiàn)象[3]。因?yàn)槭懿裳嚿蠝貪穸?、反?yīng)觀察時(shí)間等條件影響，還是有一部分標(biāo)本會(huì)被實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)為陽性，所以在控制好采血車上環(huán)境的條件下盡量選擇靈敏度高、特異性好的試劑條，可以有效的降低HBsAg陽性率。本站對(duì)街頭獻(xiàn)血和團(tuán)體獻(xiàn)血每位獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前都實(shí)行初篩，同時(shí)實(shí)行采血前微機(jī)結(jié)果查詢，使既往獻(xiàn)血HBsAg陽性者和試紙初篩陽性者得以淘汰，減少了給后期運(yùn)輸、檢測(cè)等各環(huán)節(jié)帶來的污染風(fēng)險(xiǎn)。

表2結(jié)果顯示不同文化程度獻(xiàn)血者常規(guī)檢測(cè)總不合格率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=40.71，P＜0.01)，大中專組人數(shù)最多，不合格率最低，與其他組兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （與本科以上組、高中組、 初中以下組比較，χ2分別為 26.94、14.09、24.31，P值都＜0.01），我市是民辦高校示范基地和新興工業(yè)城市，學(xué)生和工人是我市獻(xiàn)血的主力軍，具有較高文化程度，具備一定的日常生活醫(yī)學(xué)常識(shí)，自我保護(hù)意識(shí)較強(qiáng)，同時(shí)在獻(xiàn)血前具有較強(qiáng)的自我排除能力。因此，大力做好宣傳，鼓勵(lì)更多的學(xué)生和工人積極參與無償獻(xiàn)血活動(dòng)，并使其成為固定獻(xiàn)血者。

表3結(jié)果顯示男性獻(xiàn)血者的總不合格率、ALT、HBsAg、抗-TP不合格率高于女性獻(xiàn)血者，這可能與男性在工作、飲食、作息、吸煙、社會(huì)活動(dòng)等方面與女性獻(xiàn)血者有區(qū)別所致。

表4顯示不同年齡段獻(xiàn)血者常規(guī)篩查各項(xiàng)指標(biāo)總不合格率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=65.03，P＜0.01)， 呈現(xiàn)波峰圖形，18～25 歲年齡組和 46～55歲年齡組不合格率最低，該群主要以學(xué)生和中老年固定獻(xiàn)血者為主，有著良好的身體機(jī)能及生活習(xí)慣，屬于傳播的低危人群；而26～35歲年齡組和36～45歲年齡組獻(xiàn)血者的不合格率較高，可能與該年齡段具有較好的社會(huì)地位和經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)等有關(guān)，交際廣泛，感染的機(jī)會(huì)也就相應(yīng)增加。

我站血液篩查核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室于2012年通過江西省衛(wèi)生廳驗(yàn)收并獲得合格證書，成為江西省采供血機(jī)構(gòu)繼江西省血液中心、南昌市血站的第三家核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室[4]。本研究結(jié)果顯示，酶免陰性和單試劑陽性及灰區(qū)標(biāo)本共25727例中經(jīng)NAT檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)HCV-RNA和HIV-1 RNA陽性，發(fā)現(xiàn)40例HBV-DNA陽性，陽性率為0.16%，高于合肥地區(qū)的0.13%[5]及沈陽地區(qū)的0.014%[6]（上述兩個(gè)地區(qū)均使用上海浩源生物科技有限公司的核酸篩查試劑），與南昌市血站的0.18%接近（采用羅氏診斷COBAS S-201血液核酸篩查平臺(tái)）[7]。這說明目前新余市的臨床用血經(jīng)常規(guī)篩查后經(jīng)輸血傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)主要為HBV感染，與我國乙肝高發(fā)的國情相符。據(jù)2006年全國肝炎流行病學(xué)調(diào)查，我國一般人群HB-sAg攜帶率為7.18%[8]。HBV進(jìn)行ELISA檢測(cè)漏檢的原因主要包括“窗口期”感染、病毒突變以及隱匿性 HBV 感染（OBI）[9]，其中以 OBI最為棘手，對(duì)臨床輸血危害也最大。表5結(jié)果顯示了乙肝隱匿性感染和慢性乙肝攜帶者二對(duì)半檢測(cè)結(jié)果不同的比例。目前，我國采供血機(jī)構(gòu)對(duì)獻(xiàn)血者HBsAg進(jìn)行篩查所用國產(chǎn)試劑的靈敏度約為0.5ng/ml，進(jìn)口試劑的靈敏度約為0.1～0.2ng/ml，而一般認(rèn)為0.1ng/ml HBsAg即具有傳染性[10]。若只對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行常規(guī)ELISA檢測(cè)，就有可能引起HBV漏檢而引發(fā)輸血感染，而NAT檢測(cè)的靈敏度高，可有效彌補(bǔ)常規(guī)ELISA方法檢測(cè)HBsAg的不足，最大限度避免OBI引起輸血感染，起到降低輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)，提高輸血安全的作用。目前，輸血安全面臨的主要風(fēng)險(xiǎn)之一就是被篩查病毒的“窗口期”。免疫學(xué)檢測(cè)3種病毒的平均窗口期分別為：HBV：45d，HCV：72d，HIV：22d。而應(yīng)用NAT技術(shù)篩查獻(xiàn)血者，相應(yīng)的可將獻(xiàn)血員傳播以上病毒性疾病的概率分別降低20%、82%和50%，HBV、HCV、HIV病毒的窗口期較抗體檢測(cè)分別提前：9d、59d、11d[11]。 因此，作為常規(guī) ELISA 篩查方法的有效補(bǔ)充，開展高靈敏度和高特異性的NAT篩查可有效降低經(jīng)輸血感染傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)于安全輸血具有十分重要的意義。

綜上所述，為確保血液質(zhì)量，保證血液安全，從自愿無償獻(xiàn)血的低危人群和固定獻(xiàn)血者中采集血液是血液安全的重要前提。為保證輸血安全，我站相應(yīng)地制定了以下相關(guān)措施：⑴加強(qiáng)血站員工培訓(xùn)，建立和完善以質(zhì)量、安全為核心的系統(tǒng)規(guī)范化培訓(xùn)和考核制度，不斷提高員工業(yè)務(wù)素質(zhì)，強(qiáng)化質(zhì)量、安全和服務(wù)意識(shí)；⑵嚴(yán)格把關(guān)獻(xiàn)血員體檢初篩環(huán)節(jié)，嚴(yán)格按照獻(xiàn)血者健康檢查要求進(jìn)行體檢，詳細(xì)詢問既往病史及現(xiàn)在健康狀況，對(duì)獻(xiàn)血員獻(xiàn)血前的飲食和休息狀況要特別注意詢問，確保低危獻(xiàn)血者獻(xiàn)血；⑶穩(wěn)定并壯大固定獻(xiàn)血者隊(duì)伍，提高固定獻(xiàn)血人員比例，推行預(yù)約獻(xiàn)血，以便獻(xiàn)血員合理安排休息和飲食從而更有利于血液質(zhì)量的提高?！皥F(tuán)體預(yù)約獻(xiàn)血”模式是目前我市緩解血源緊張、減少血液報(bào)廢的有效管理模式；⑷采用高靈敏度和高特異性的方法和試劑進(jìn)行檢測(cè)，杜絕血液漏檢和減少血液報(bào)廢；⑸做好儀器、設(shè)備投入維護(hù)校準(zhǔn)工作；⑹加強(qiáng)質(zhì)量管理，強(qiáng)化監(jiān)督管理機(jī)制，實(shí)施持續(xù)改進(jìn)措施，以最大能力遏制輸血傳染病的傳播，有效保證血液質(zhì)量安全，促進(jìn)無償獻(xiàn)血事業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。

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