高效液相色譜法測定鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α－萘酚雜質(zhì)含量

周宏艷 ，羅 斌 ，王 菁

（1.浙江眾益制藥股份有限公司，浙江 麗水 323000； 2.溫州醫(yī)科大學(xué)，浙江 溫州 325000；3.山東省臨沂市平邑縣食品藥品監(jiān)督管理局，山東 臨沂 273300）

鹽酸度洛西汀（duloxetine hydrochloride）是美國Eli Lilly公司研究開發(fā)的新型口服抗抑郁癥藥[1－2]，具有獨特的作用機(jī)制和藥理特性，對5－羥色胺（5－HT）和去甲腎上腺素（NE）具有雙重再攝取抑制作用[3]，在發(fā)揮抗抑郁作用的同時，還能改善抑郁癥繼發(fā)的軀體癥狀，減輕軀體疼痛癥狀[4－5]。該藥對抑郁癥、糖尿病周圍神經(jīng)病變所致的疼痛以及壓力性尿失禁[6]等均有一定的療效。但鹽酸度洛西汀中所含雜質(zhì)α－萘酚具有生理毒性，吞咽或經(jīng)皮吸收都能引起中毒，對腎臟可引起出血性腎炎，誤服后可出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、腹痛、痙攣、貧血、虛脫等癥狀。因此，有必要對鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中所含特定雜質(zhì)α－萘酚進(jìn)行限度控制。本試驗中建立了高效液相色譜(HPLC)法測定鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α－萘酚雜質(zhì)的含量，該方法專屬性強(qiáng)、耐用、準(zhǔn)確，能有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，包括VWD檢測器、G1311C自動調(diào)配泵、G1329B標(biāo)準(zhǔn)自動進(jìn)樣器、G1316A可調(diào)柱溫恒溫箱、Agilent色譜化學(xué)工作站等；BT25S型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；KQ－500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。鹽酸度洛西汀對照品（批號為Y0001453），鹽酸度洛西汀系統(tǒng)適用性對照品（批號為Y0001454），均來自歐洲藥品質(zhì)量管理局；α－萘酚對照品（批號為 43.04.09.01，英國政府化學(xué)實驗室標(biāo)準(zhǔn)集團(tuán)）；鹽酸度洛西汀腸溶膠囊（批號為 120801～120803，A公司市售品）；鹽酸度洛西汀腸溶膠囊對照品（商品名欣百達(dá)，批號為 A858915D，美國 Eli Lilly公司）；乙腈（色譜級，美國Tedia有限公司），正丙醇（色譜級，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Agilent C8柱(150 mm × 4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈－正丙醇－緩沖液（配制2.9 g/L磷酸溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH至2.5，取該溶液1L，加入 10.3 g一水己烷磺酸鈉，搖勻，使完全溶解，13 ∶17 ∶70）；流速：1.0 mL /min，檢測波長：230 nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10 μL。在擬訂色譜條件下，度洛西汀與雜質(zhì) F的分離度為2.32，拖尾因子為1.14，雜質(zhì)C與α－萘酚的分離度為2.79，度洛西汀理論板數(shù)為8 214，表明系統(tǒng)適用性良好。色譜圖見圖1A。

2.2 溶液制備

精密稱取鹽酸度洛西汀對照品適量，用乙腈－水（25∶75）配制成0.2 μg/mL鹽酸度洛西汀溶液，作為對照品溶液。取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于度洛西汀 10 mg），精密稱定，置50 mL容量瓶中，加上述溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：取制劑工藝所用輔料適量，用乙腈－水（25∶75）稀釋至一定濃度；取鹽酸度洛西汀系統(tǒng)適用性對照品適量，用上述溶劑配制成0.2 g/L的溶液；取α－萘酚對照品適量，用上述溶劑配制成 0.4 μg/mL的溶液。取配制溶液各 10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1B和圖1C。結(jié)果表明，輔料不干擾α－萘酚的測定，且與其他雜質(zhì)峰分離效果良好。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取 α－萘酚對照品適量（約16 mg），置20 mL容量瓶中，加乙腈－水（25∶75）溶解并稀釋至刻度、搖勻；精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，用上述溶劑稀釋至刻度、搖勻。分別精密量取該溶液 2，5，10，15，20 mL，置 200 mL 容量瓶中，用上述溶劑稀釋至刻度、搖勻，制成系列溶液。在上述色譜條件下，精密量取以上溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并以α－萘酚進(jìn)樣量（W）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 A＝14 593.34 W＋0.116 6，r＝0.997 6（n＝5）。結(jié)果表明，α－萘酚進(jìn)樣量在 8×10－4～8×10－3μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

檢測限與定量限試驗：取α－萘酚適量，用乙腈－水（25∶75）配制成適宜質(zhì)量濃度，分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并逐步稀釋測定，使信噪比約為10∶1時作為定量限，信噪比約為3∶1時作為檢測限。結(jié)果表明，本法的定量限為2 ng，檢測限為 0.2 ng。

重復(fù)性試驗：精密稱取α－萘酚對照品及混合輔料6份，每份約20 mg，用乙腈－水（25∶75）配制成每1 mL溶液中含 α－萘酚為0.4 μg/mL的供試品溶液。取 α－萘酚對照品，用上述溶劑并稀釋制成質(zhì)量濃度為 0.4 μg/mL 的溶液。取上述溶液各 10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果6份樣品含量的 RSD為0.64% （n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

中間精密度試驗：按擬訂方法配制供試品及對照品溶液，不同人員在另一色譜儀器上進(jìn)樣測定，每臺儀器每人各測定6份，合并計算12份樣品含量數(shù)據(jù)。結(jié)果含量的 RSD為0.48%（n＝12），表明方法的中間精密度均較好。

回收試驗：分別取 α－萘酚對照品約 16，20，24 mg各 3份，精密稱定后置100 mL量瓶中，按處方量加入空白輔料，加乙腈－水（25∶75）溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液2 mL，置10 mL容量瓶中，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻過濾即得供試品溶液。按擬訂色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果見表1。

表1 α－萘酚回收試驗結(jié)果(n＝9)

耐用性試驗：將色譜條件中的參數(shù)作適度變化，如采用不同色譜柱、調(diào)節(jié)不同柱溫、不同流速及供試品不同過濾次數(shù)等，考察對測定結(jié)果的影響情況。在擬訂色譜條件下，由圖1可見，度洛西汀與雜質(zhì)F的分離度均大于2，度洛西汀的拖尾因子均小于1.5，雜質(zhì)C與α－萘酚的分離度均大于2，度洛西汀理論板數(shù)均大于5 000，測定結(jié)果基本一致，可見方法的耐用性良好。

2.4 樣品有關(guān)物質(zhì)檢查

取對照品溶液10 μL注入液相色譜儀，對照品溶液中度洛西汀峰信噪比應(yīng)不小于20∶1；再精密量取供試品溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至度洛西汀主峰保留時間的2倍，α－萘酚含量用峰面積乘校正因子計算，其他雜質(zhì)含量按面積歸一化法計算。結(jié)果3批樣品及市售欣百達(dá)（批號為 A858915D）中α－萘酚均小于0.2%，總雜質(zhì)均小于0.6%。結(jié)果見表2。

表2 鹽酸度洛西汀腸溶膠囊有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

3 討論

文獻(xiàn)[7－11]報道了HPLC法測定鹽酸度洛西汀腸溶片或腸溶膠囊中鹽酸度洛西汀含量及有關(guān)物質(zhì)，但均未考察鹽酸度洛西汀中特定雜質(zhì)α－萘酚的含量。由于α－萘酚為特殊毒性雜質(zhì)，建議對鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中所含特定雜質(zhì)α－萘酚進(jìn)行限度控制。抑郁癥給許多患者和家庭帶來嚴(yán)重危害，鹽酸度洛西汀腸溶膠囊具有較好的治療效果。建議鹽酸度洛西汀腸溶膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)盡快對α－萘酚雜質(zhì)進(jìn)行控制，保證長期用藥的安全性。

參考美國藥典36.0（USP36）鹽酸度洛西汀檢測方法，建立了測定鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α－萘酚雜質(zhì)的含量的HPLC法，方法學(xué)考察表明，該法專屬性強(qiáng)、耐用、準(zhǔn)確，能有效檢測出α－萘酚的含量。

有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果顯示，該法能有效檢測出鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α－萘酚及總雜質(zhì)的含量，可效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

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