肝氣郁結(jié)對(duì)雄性大鼠精瘀影響實(shí)驗(yàn)研究

范 薇，楊芳艷，夏麗娜

(成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075)

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肝氣郁結(jié)對(duì)雄性大鼠精瘀影響實(shí)驗(yàn)研究

范 薇，楊芳艷，夏麗娜

(成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075)

目的：建立肝郁雄性大鼠模型，探討肝氣郁結(jié)對(duì)精瘀影響的可能病理改變。方法：采用束縛筒慢性應(yīng)激法建立肝郁模型，自制電棒刺激法建立電棒精瘀模型，對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)測(cè)定，運(yùn)用酶聯(lián)免疫分析試劑盒檢測(cè)大鼠股動(dòng)脈血清中α-糖甘酶(α-Glu)及雌二醇(E2)含量。結(jié)果：曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，肝郁組與空白組大鼠在穿格次數(shù)、站立次數(shù)和理毛次數(shù)等指標(biāo)存在顯著差異(P<0.05)；與空白組比較，肝郁組、電棒精瘀組的血清中α-Glu、E2含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，肝郁組與電棒精瘀組血清中α-Glu 、E2含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：肝氣郁結(jié)可導(dǎo)致雄性大鼠精瘀的發(fā)生，血清中α-Glu、E2含量水平改變是其病理變化的重要因素。

肝氣郁結(jié)；精瘀；基礎(chǔ)研究

中醫(yī)理論認(rèn)為肝主筋，司疏泄，能暢達(dá)氣機(jī)，調(diào)暢情志，其經(jīng)脈過陰器，使宗筋舉，啟動(dòng)精門，促進(jìn)精液排泄，維持男子正常生殖功能。如果肝氣郁結(jié)，則可導(dǎo)致精液排出不暢而致精瘀，從而影響男性生殖機(jī)能。本實(shí)驗(yàn)通過束縛筒慢性應(yīng)激法建立大鼠肝郁模型，電棒刺激法建立大鼠精瘀模型，通過大鼠行為學(xué)表現(xiàn)，測(cè)定血清中α-糖苷酶(α-Glu)、雌二醇(E2)濃度，揭示肝氣郁結(jié)對(duì)精瘀影響的可能病理改變，為深層次揭示情志—肝郁—精瘀的發(fā)生機(jī)制，闡釋精液瘀阻的致病機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)SD大鼠24只，雄性，8周齡，體重200～250g(24只雄鼠經(jīng)過篩選具備性活動(dòng)能力)，購(gòu)自成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)中心。

1.1.2 試劑 ELISA α-Glu試劑盒， ELISA E2試劑盒，美國(guó)R&D公司生產(chǎn)，購(gòu)于北京中天正商貿(mào)有限公司。

1.1.3 儀器 Legend RT+ 230v冷凍離心機(jī)，JJT-900/1300型超凈工作臺(tái)，Thermo酶標(biāo)儀。

1.2 方法

1.2.1 分組 大鼠飼養(yǎng)于室溫(22±2)℃，光照周期12h∶12h；自由攝食飲水、相對(duì)濕度40%條件下，每籠4只。適應(yīng)1周后，將大鼠隨機(jī)分成3組：空白組8只，肝郁組8只，電棒精瘀組8只。

1.2.2 造模用具 束縛筒(自制)：用硬塑料制成束縛筒，該筒為管狀，其上打滿通氣孔，長(zhǎng)約21cm，筒口外徑6cm，內(nèi)徑5.3cm，筒內(nèi)前端置一直徑略小于筒內(nèi)徑并可前后調(diào)節(jié)的無底圓嘴塑料瓶，其瓶口為通氣口(距離筒口5cm左右)，后端為可開關(guān)閘門，調(diào)節(jié)束縛強(qiáng)度。大鼠頭向通氣口置入后，關(guān)閉閘門，可通過調(diào)節(jié)塑料瓶改變大鼠活動(dòng)空間。

電動(dòng)刺激棒：自制鐵棒(棒長(zhǎng)6cm)，一端用導(dǎo)線連于電針機(jī)(華佗牌電子針療儀 SDZ-II)。

1.2.3 造模 ①肝郁模型組。實(shí)驗(yàn)采用張立俠等[1]方法，建立雄性大鼠肝郁模型。大鼠適應(yīng)1周后開始造模，將肝郁模型組大鼠束縛于束縛筒內(nèi)，每天180min，以后每天增加束縛10min，并調(diào)節(jié)縮小束縛筒空間，逐日加大束縛強(qiáng)度, 通過增強(qiáng)束縛強(qiáng)度和時(shí)間消除大鼠對(duì)應(yīng)激的耐受性，造模第31天，束縛時(shí)間為480min，并維持此時(shí)間與強(qiáng)度，繼續(xù)束縛19天，造模時(shí)間共計(jì)50天。每次束縛時(shí)，使大鼠鉆進(jìn)束縛筒內(nèi)，平架在木板上，不予進(jìn)食和水。

②電棒精瘀組 。采用電動(dòng)刺激棒，插入大鼠肛門2～2.5cm，采取斷續(xù)波，1V電流大小電刺激，連續(xù)刺激1min，以大鼠陰莖勃起充血，有前列腺液溢出但不射精為度，每日1次，連續(xù)刺激50天。

1.2.4 行為學(xué)觀察 實(shí)驗(yàn)在無噪音的實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件下進(jìn)行。操作者握住大鼠的尾巴根部1/3處，輕輕將大鼠放入開闊箱的中央格，并開始計(jì)時(shí)。由兩位實(shí)驗(yàn)人員共同觀察記錄大鼠5min內(nèi)的行為舉動(dòng)，每只大鼠僅做1次開闊箱行為測(cè)定，實(shí)驗(yàn)要求在單盲條件下進(jìn)行。(每只大鼠在實(shí)驗(yàn)完畢后被取出后，應(yīng)及時(shí)將其排泄物清掃干凈，以免留有氣味而干擾下一只大鼠的觀察結(jié)果。)

觀察指標(biāo)：穿格次數(shù)，三爪以上跨入鄰格的次數(shù)；直立次數(shù)，兩前肢完全離開地面或伏于側(cè)壁上的次數(shù)；理毛修飾次數(shù)，前肢向上抬舉，抓癢、洗臉、舔足的次數(shù)。

1.2.5 生化指標(biāo)檢測(cè) 造模第50天，于末次束縛(或電棒刺激)2h后處死大鼠，三組大鼠股動(dòng)脈取血，采用ELISA法檢測(cè)血清中α-Glu及E2含量。

2 結(jié)果

2.1 大鼠行為學(xué)觀察結(jié)果

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，肝郁組與空白組大鼠在穿格次數(shù)、站立次數(shù)和理毛次數(shù)上存在顯著差異(P<0.05)，大鼠行為學(xué)觀察結(jié)果見表1。

表1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察慢性束縛應(yīng)激模型大鼠行為變化比較 ±s，次)

注：與空白組比較，*P<0.05。

2.2 血清中α-Glu及E2含量檢測(cè)結(jié)果

與空白組比較，肝郁組、電棒精瘀組小鼠血清中α-Glu、E2含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，肝郁組與電棒精瘀組血清中α-Glu 、E2含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

組別α-Glu(U/L)E2(ng/L)空白組(n=8)5.1251±1.09358.7634±1.23280肝郁組(n=8)3.3895±1.4464*12.2655±1.9420*電棒精瘀組(n=8)2.5897±1.0369*13.5084±0.83462*

注：與空白組比較，*P<0.05。

3 討論

臨床流行病學(xué)資料顯示，中醫(yī)肝臟病證占五臟總體病證的40%，肝郁證為肝臟病證的基本病理變化，是肝病證候核心，為最為常見的中醫(yī)證候[2]。精瘀是指生殖之精瘀滯于生殖道或精室所形成的一種腐敗濁邪，由精液排出障礙引起的以疼痛、生殖機(jī)能異常為主的病證[3]。精瘀一旦形成，其致病廣泛，以泌尿、生殖系統(tǒng)疾病較為常見，是導(dǎo)致慢性非細(xì)菌性前列腺炎病變的主要因素[4]。根據(jù)中醫(yī)理論，情志—肝郁—精瘀具有相關(guān)性，本實(shí)驗(yàn)通過建立肝郁大鼠模型及電棒精瘀模型，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)，驗(yàn)證肝氣郁結(jié)對(duì)雄性大鼠精瘀的影響。

實(shí)驗(yàn)選擇束縛筒慢性束縛應(yīng)激法制作肝郁模型，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，肝郁組與空白組大鼠比較在穿格次數(shù)、站立次數(shù)和理毛次數(shù)上存在顯著差異(P<0.05)，肝郁組大鼠行為學(xué)顯示與文獻(xiàn)中肝郁證動(dòng)物模型相一致，提示肝郁模型建立成功。實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)中，血清α-Glu含量的測(cè)定顯示，與空白組比較，肝郁組、電棒精瘀組的血清中α-Glu、E2含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，肝郁組與電棒精瘀組血清中α-Glu、E2含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

α-Glu由附睪分泌，可反映附睪的功能，與附睪精子成熟有關(guān)。當(dāng)輸精管和附睪阻塞時(shí)，α-Glu量會(huì)明顯減少，因此可作為精道阻塞的重要依據(jù)。男性不育癥，如精索靜脈曲張、精子缺乏或精子活力下降及輸精管切除后均可見血清中α-Glu活力降低。本試驗(yàn)中，血清E2水平明顯改變，空白組與肝郁組、空白組與電棒精瘀組有顯著差異。雌激素主要作用在于維持和調(diào)控副性器官的功能。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，慢性無菌性前列腺炎的發(fā)生是由于血清中E2濃度增高所引起的，性激素可調(diào)節(jié)前列腺的正常生理功能[5]。本試驗(yàn)顯示，肝氣郁結(jié)可致血清E2濃度水平升高，導(dǎo)致精瘀的形成。肝郁組與電棒精瘀組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肝氣郁結(jié)可導(dǎo)致雄性大鼠精瘀的發(fā)生，血清中α-Glu、E2含量水平改變是其病理變化的重要因素。目前，肝郁精瘀動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究仍處在探索階段，在肝氣郁結(jié)的何種階段、何種程度會(huì)導(dǎo)致精瘀及精瘀的病理判定標(biāo)準(zhǔn)有待進(jìn)一步深入研究。

[1] 張立俠，王慧.肝郁證勃起功能障礙大鼠模型模型建立的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)男科學(xué)雜志，2006,20(11)：29-31.

[2] 楊文明，程彪，鮑遠(yuǎn)程，等.肝郁證實(shí)驗(yàn)研究概覽[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2004，11(12)：1125-1127.

[3] 王承平, 徐中環(huán), 周波.“白淫”、“白濁”、“敗精”之內(nèi)涵辨析[J].河南中醫(yī),2005，25(3)：24-25.

[4] 王承平, 胡卡明, 王永剛.敗精致病性與慢性非細(xì)菌性前列腺炎相關(guān)性研究[J].四川中醫(yī)，2009，27(2)：11-14.

[5] 沈周俊，何竑超.慢性無菌性前列腺炎與性激素[J].中國(guó)男科學(xué)雜志，2008,22(2):1-6.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Research on Effects of Liver Depression of Male Rat Srerm Stasis

Fan Wei ,Yang Fangyan,Xia Lina

(Chengdu Univercity of TCM, Chengdu 610075, China)

Objective:To establish liver qistagnation male rats model and investigate pathological change of sperm stasis by the stagnation of liver qi.Methods:barrel bound chronic irritated method was adopted to establish the model of liver depression, and self-made electric prods stimulation method was adopted to establish the model of sperm stasis. The rats behavior determination and alpha glycoside enzyme (alpha-Glu),estradiol (E2) content detection in femoral artery serum by ELISA kit were processed. Results:In the open field test, there are significant differences between liver depression group and blank control group rats in wear lattice times, stand up times and teddying hair times (P<0.05). It shows big difference in the contents of the serum alpha-Glu, E2 between the groups of liver depression group, sperm stasis group and the control group(P<0.05). While there is some difference between the group of liver depression and sperm stasis with no statistical significance (P>0.05).Conclusion:The liver qi stagnation can lead to the occurrence of male rat sperm stasis, level of alpha-Glu, serum E2 content change is an important factor in the pathological changes.

Liver Depression;Sperm Stasis;Effection

2014-12-17

成都中醫(yī)藥大學(xué)科技發(fā)展基金(ZRYB201143)

范薇(1972—)，女，博士，成都中醫(yī)藥大學(xué)講師，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)藏象及敗精理論。E-mail:921575069@qq.com

R271.1

A

1673-2197(2015)06-0007-02

10.11954/ytctyy.201506003