高效液相色譜法在血藥濃度監(jiān)測中的應(yīng)用進展

范玲，于棟偉(蘇州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇蘇州215101)

高效液相色譜法在血藥濃度監(jiān)測中的應(yīng)用進展

范玲，于棟偉
(蘇州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇蘇州215101)

摘要:高效液相色譜( HPLC)法是近年來興起的一種監(jiān)測血藥濃度的方法，具有定量準(zhǔn)確、選擇性好、靈敏度高、精密度高等優(yōu)點。HPLC法監(jiān)測抗癲癇藥物(咪達唑侖、硝西泮、地西泮等)、抗腫瘤藥物(異環(huán)磷酰、甲氨蝶呤、依托泊苷等)、抗感染藥物(齊多夫定、奈韋拉平、利福平等)、免疫抑制劑(環(huán)孢素A、嗎替麥考酚酯)血藥濃度的結(jié)果顯示，其具有較高的回收率、日內(nèi)及日間回收率，對臨床個體化給藥治療方案的實施具有重要意義。

關(guān)鍵詞:高效液相色譜法;治療藥物監(jiān)測;血藥濃度

治療藥物監(jiān)測( TDM)是指對治療指數(shù)窄、毒性作用強、個體差異大的藥物進行血液或其他體液中藥物濃度的監(jiān)測，可指導(dǎo)臨床制定個體化給藥方案，提高藥物治療水平，達到臨床安全、有效、合理用藥的目的。目前臨床上最常用的TDM方法有光譜法、色譜法、免疫法。光譜法靈敏度較低，并且代謝物或結(jié)構(gòu)相近的化合物對監(jiān)測結(jié)果干擾較大;免疫法常用的試劑盒多為國外進口，效期短，成本相對較高;而色譜法是其中發(fā)展最快、適用性最強的方法，具有定量準(zhǔn)確、選擇性好、靈敏度高、精密度高等優(yōu)點。高效液相色譜( HPLC)法是色譜法中的一種，是近年來興起的一種監(jiān)測血藥濃度的方法，現(xiàn)將對其在血藥濃度監(jiān)測方面的應(yīng)用作一綜述。

1　抗癲癇藥物

1.1咪達唑侖( MID)、硝西泮( NZP)、地西泮( DZP) MID、NZP、DZP為治療癲癇的常用藥物，但此類藥物的治療窗較窄，血藥濃度低于治療窗則療效較差，高于治療窗則會出現(xiàn)不良反應(yīng)，甚至?xí)?dǎo)致死亡［1］。陳德志等［2］建立同時測定MID、NZP、DZP血藥濃度的反相HPLC法，結(jié)果顯示MID、NZP、DZP質(zhì)量濃度均在20～4 000 ng/mL與峰面積呈良好線性關(guān)系，回收率為98.2%～103.9%，日內(nèi)及日間精密度( RSD)均＜5%。證實該法能夠同時測定三種藥物的血藥濃度，適用于臨床血藥濃度監(jiān)測。

1.2奧卡西平( OXC) OXC是卡馬西平( CBZ)的一種10-酮類衍化物，經(jīng)胃腸道吸收后，在芳香酮降解酶的作用下能迅速且完全降解成活性代謝產(chǎn)物10，11-二氫-10-羥基CBZ而發(fā)揮抗癲癇作用。OXC優(yōu)于CBZ之處在于其生物利用度高、蛋白結(jié)合率低、無肝酶誘導(dǎo)作用、療效好、不良反應(yīng)少［3～5］。癲癇患兒應(yīng)用OXC及其代謝物的個體療效差異較大應(yīng)及時進行OXC活性代謝產(chǎn)物( MHD)的血藥濃度監(jiān)測，從而達到安全、合理用藥的目的。林志燕等［6］采用HPLC法測定血清MHD并進行分析，結(jié)果

顯示MHD在0.56～56.00 μg/mL時線性關(guān)系良好，回收率為99.7%～103.4%，日內(nèi)RSD為0.99%～2.12%;日間RSD為1.23%～4.79%;表明該法適用于癲癇患者MHD的血藥濃度監(jiān)測。

1.3拉莫三嗪( LTG) LTG為一種新型苯三嗪類的廣譜抗癲癇藥，臨床上常與CBZ聯(lián)合治療部分性癲癇發(fā)作;而CBZ能誘導(dǎo)LTG的代謝，導(dǎo)致LTG血藥濃度下降，從而降低藥效。因此，對其開展血藥濃度監(jiān)測具有重要的臨床意義。何大可等［7］應(yīng)用反相HPLC法同時測定LTG與CBZ的血藥濃度，結(jié)果顯示LTG與CBZ的血藥濃度分別在0.31～40.00 μg/mL和0.16～20.00 μg/mL時線性關(guān)系良好，平均回收率分別為98.69%和98.14%，日內(nèi)RSD分別為1.6%～5.8%和1.5%～2.8%，日間RSD分別為3.4%～6.5%和5.0%～5.7%，表明該方法回收率高、精密度好。

2　抗腫瘤藥物

2.1異環(huán)磷酰胺異環(huán)磷酰胺為磷酰胺衍生物，屬氮芥類烷化劑，治療各種實體瘤和白血病均有效［8］。若該藥應(yīng)用劑量過大，可導(dǎo)致患者發(fā)生嚴(yán)重嘔吐、昏睡、意識不清等。陳新謙等［9］采用HPLC法測定人血清中的異環(huán)磷酰胺，結(jié)果顯示異環(huán)磷酰胺的血藥濃度在10～200 mg/L時線性關(guān)系良好，平均回收率為99.2%，表明該方法準(zhǔn)確度好、精密度高，適用于異環(huán)磷酰胺的血藥濃度監(jiān)測。

2.2甲氨蝶呤( MTX) MTX為二氫葉酸還原酶抑制劑，廣泛應(yīng)用于白血病、淋巴瘤、絨毛膜上皮癌等惡性腫瘤的治療，尤其是臨床上常用大劑量MTX結(jié)合亞葉酸鈣化療方案來治療骨肉瘤［9］。吳雪梅等［10］采用Supdelean萃取小柱提取血漿中的MTX，以HPLC法測定血藥濃度，顯示MTX與血中內(nèi)源性雜質(zhì)分離良好，絕對回收率為92.64%，線性范圍為0.104～104 mg/L，表明該法回收率高，可滿足血藥濃度監(jiān)測的需求。

2.3依托泊苷( VP16) VP16屬于有絲分裂抑制劑，為細(xì)胞特異性藥物，是兒童急性白血病化療方案中的常用藥物。VP16除可引起骨髓抑制、嗜中性粒細(xì)胞減少等不良反應(yīng)外，還可使已治愈的急性白血病患兒繼發(fā)治療相關(guān)性白血病，且預(yù)后極差［11］。藥物研究顯示，VP16的療效和不良反應(yīng)與血藥濃度有關(guān)。陸曉彤等［12］采用HPLC法測定白血病患兒血漿中的VP16，結(jié)果顯示日內(nèi)回收率為93.56%～96.24% ( RSD為1.07%～2.63%)，日間回收率為92.85%～94.26%( RSD為3.55%～5.89%)，表明該法簡單方便、靈敏度高、專一性好，適用于臨床樣本的監(jiān)測。

3　抗感染藥物

3.1齊多夫定( AZT)、奈韋拉平( NVP)臨床上AZT、NVP常聯(lián)合應(yīng)用于艾滋病的治療，為使得藥物在有效濃度發(fā)揮最佳效能，李燕青等［14］建立了一種快速、靈敏并同時測定這兩種藥物濃度的HPLC法結(jié)果顯示AZT高、中、低( 4、1、0.1 μg/mL)以及NVP高、中、低( 40、10、1 μg/mL)血藥濃度的平均回收率均＜10%，線性范圍分別為0.05～5、0.5～5 μg/mL;表明該方法靈敏、準(zhǔn)確、簡單、快速，可用于同時服用AZT和NVP的患者臨床血藥濃度監(jiān)測和藥代動力學(xué)研究。

3.2利福平( RFP) RFP是肺結(jié)核患者的首選藥物，屬肝藥酶誘導(dǎo)劑，其血藥濃度個體差異很大，長期服用者血藥濃度降低［15］。閆鋒等［16］采用HPLC法測定了RFP血藥濃度，結(jié)果顯示RFP在0.5～16.0 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.43%，表明該法準(zhǔn)確、靈敏，適用于血藥濃度監(jiān)測。

3.3伊曲康唑伊曲康唑是一種合成的廣譜抗真菌藥，對皮膚癬菌等各種酵母菌和真菌感染均有效其在體內(nèi)部分代謝為羥基伊曲康唑，同樣具有抗真菌活性。由于兩者的個體差異較大，因此對其開展TDM具有重要的臨床意義。陳鈞等［17］采用HPLC法測定了伊曲康唑及其代謝產(chǎn)物羥基伊曲康唑的血藥濃度，結(jié)果顯示伊曲康唑和羥基伊曲康唑的線性范圍均為5～500 ng/mL，提取回收率均＞80%，日內(nèi)、日間RSD均＜10%，表明該方法適用于兩種藥物的血藥濃度監(jiān)測和藥動學(xué)研究。

4　免疫抑制劑

4.1環(huán)孢素A( CsA) CsA是一種強力免疫抑制劑，在臨床上主要用于預(yù)防同種異體器官或組織移植所發(fā)生的排斥反應(yīng)［18］。在臨床應(yīng)用中，CsA的血藥濃度過低則達不到治療作用，過高則會引起惡心嘔吐等不良反應(yīng)。為使CsA發(fā)揮最佳的治療作用侯鐵柱等［19］采用HPLC法測定CsA的血藥濃度，結(jié)果顯示其在50～2 000 ng/mL時峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積與濃度線性關(guān)系良好，方法回收率為97.3%～98.9%，萃取回收率為73.9%～79.4%，日內(nèi)、日間RSD均＜5.2%;表明HPLC法操作簡便、快速、準(zhǔn)確可靠，可用于CsA的血藥濃度監(jiān)測。

4.2嗎替麥考酚酯( MMF) MMF是預(yù)防和治療異體移植器官排斥反應(yīng)的免疫抑制藥物，口服后可迅速經(jīng)腸道吸收，脫酯化后轉(zhuǎn)化為有活性的霉酚酸( MPA)，從而發(fā)揮免疫抑制作用。由于MPA的治

療窗窄，藥動學(xué)過程個體差異大，因此對其開展TDM有重要的臨床意義。彭明麗等［20］結(jié)果顯示，HPLC法測定血漿MPA在0.20～49.96 μg/mL時線性良好，平均回收率均＞90%，日內(nèi)RSD均＜10%，日間RSD均＜15%，表明該法適用于MPA血藥濃度監(jiān)測。

5　其他藥物

華卡等［21］建立高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用( HPLCMS)的方法同時測定人血漿中的胺碘酮及去乙基胺碘酮，張相彩等［22］采用反相HPLC法測定雷米普利血藥濃度，邱暢等［23］建立高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測定人血漿中瑞舒伐他汀血藥濃度，結(jié)果均顯示其具有較高的準(zhǔn)確性、精密性和靈敏度，且操作簡便、快速，適用于血藥濃度監(jiān)測。

HPLC法是目前臨床上最常用的血藥濃度監(jiān)測方法，而色譜柱作為分離、分析樣品的重要載體，對進行分析的樣品純凈度要求高，使得此方法對樣品的前期處理要求高［24，25］。目前針對色譜分析中樣品處理繁瑣的難題，已有研究者成功開發(fā)了在線凈化富集生物體液的填料柱，使得樣品監(jiān)測時無需預(yù)處理，蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)經(jīng)洗脫而不被保留，而小分子物質(zhì)可自由出入固定相的疏水部分而得到分析。隨后液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)使得HPLC法靈敏度更高、準(zhǔn)確性更好，在很大程度上拓寬了其應(yīng)用范圍。因此，HPLC法會越來越普及，并廣泛應(yīng)用于治療藥物的血藥濃度監(jiān)測。

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收稿日期:( 2015-03-05)

文章編號:1002-266X( 2015) 32-0100-03

文獻標(biāo)志碼:A

中圖分類號:R96

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.32.043