靜脈注射人參皂苷Rb1在小鼠腦組織分布

郝成欣

摘 要：目的 該文采用靜脈注射給藥途徑，研究人參皂苷Rb1在小鼠腦組織分布。方法 將小鼠解剖取腦組織，將生理鹽水加入1ml/200mg的組織中生成勻漿，再對勻漿液進行萃取，萃取使用等體積的水飽和正丁醇飽和液，預(yù)處理的腦樣品采用HPLC法測得人參皂苷Rb1分布。結(jié)果 人參皂苷Rb1在腦組織中5min即達到吸收高峰，30min后自體內(nèi)消除。結(jié)論 對其發(fā)揮抗老年癡呆、神經(jīng)系統(tǒng)損傷保護、促進周圍神經(jīng)細胞再生、腦缺血損傷保護等等多種藥效具有重要意義。

關(guān)鍵詞：人參皂苷Rb1 靜脈注射 腦組織分布 高效液相色譜

中圖分類號：R54 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2014）11（c）-0249-02

人參皂苷Rb1即人參二醇系皂苷，分子量是1109.29，C54H92O23是其分子式，主要來源于五加科植物人參、西洋參、三七等植物?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明人參皂苷Rb1具有腦缺血損傷保護、神經(jīng)損傷保護、促進學(xué)習(xí)記憶能力，增強認知能力，促進周圍神經(jīng)細胞再生等中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用[1-3]，是一種極具有藥用價值的化合物。

1 資料與設(shè)備

1.1 藥物與試劑

由雙興科技開發(fā)有限公司提供人參皂苷Rb1對照品；采用TEDIA COMPANY.INC公司生產(chǎn)的甲醇、乙腈色譜純試劑；北京化工廠生產(chǎn)的甲醇（分析純）。

1.2 使用設(shè)備和相關(guān)儀器

采用FA1204B電子分析天平，SHZ-D（Ш）型不銹鋼臺式循環(huán)水式真空泵，Agilent 1100型分析-半制備液相，RE501旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，Hettich Vniversal 16R低溫冷凍離心機。

1.3 動物

健康小鼠，體重36～40g，吉林省白城市省所提供。普通飼料喂養(yǎng)1周，自由飲水。

2 試驗方法

2.1 色譜所需條件

流動相：乙腈和水按28：72的體積比混合；CenturySILBDSC18柱，50 mm×2.1 mmI.D.，5 mm粒徑；205 nm的檢測波長；1.00 ml/min的流速；以室溫作為柱溫。

2.2 給藥方案與樣品采集

小鼠腦組織中分布實驗的取樣時間是根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果而定。

15只體重36～40 g的健康小鼠。動物試驗地點在吉林省白城市白城醫(yī)高專藥化藥分實驗室。采用濃度為6 mg/ml的人參皂苷Rb1溶液注射，分別于給藥前與給藥后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min以 8 mg/kg的劑量靜脈給藥，每次3只，處死動物，解剖腦組織，并沖掉表面浮血用0.9%的生理鹽水，最后置于-40℃冰箱保存待測。

2.3 樣品預(yù)處理

處理腦組織樣品的方法：

稱重后把腦組織剪碎并研磨，用Gilson移液器按1 ml/200 mg組織重量加入生理鹽水勻漿。用等體積的水飽和正丁醇3次萃取組織勻漿液，用1 ml甲醇溶解在85 ℃下經(jīng)過減壓干燥的萃取液，經(jīng)過3～5倍的稀釋，用0.22 mm微孔濾膜過濾，檢測則采用HPLC。

3 結(jié)果

3.1 人參皂苷Rb1標準品HPLC圖和確定色譜條件

人參皂苷Rb1標準品精準的1.00 mg，用甲醇進行1 ml的定容，達到100 μg的濃度，用甲醇將其稀釋成50 μg的濃度，取出20 μml過0.22 μm微孔濾膜，色譜條件的確定則通過流動相乙腈和水的比率的改變，以及標準品適宜的出峰時間來得出的。圖1采用HPLC的流動相，其乙腈和水的比率為28：72；1.00 ml/min的流速；205 nm的檢測波長。如表1所示，人參皂苷Rb1對照品有18.596 min的出峰時間，2.1 mAURb1的高度。

3.2 用HPLC對小鼠空白腦組織進行檢測

結(jié)果顯示人參皂苷Rb1受腦組織中成分的干擾很小，見表2。

3.3 用HPLC檢測小鼠給藥后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min的腦組織標準品

在各時間點上均放3只小鼠，針對5 min、30 min、60 min、120 min、240 min不同的時間點，人參皂苷Rb1通過靜脈注射后，處理老鼠腦組織時采用上面2.2的方法，分別取20μml過0.22μm微孔濾膜，用HPLC檢測。然后把小鼠腦組織中檢測的人參皂苷Rb1對比曲線圖畫出來。圖中顯示，5 min腦組織中最高，吸收高度為1.2 mAU，隨著時間推移，曲線驟然下降，30 min吸收高度為0.2 mAU。60 min、120 min、240 min后均未測得腦組織中Rb1的含量（圖2）。

3.4 分析討論

由腦組織樣品分布圖可知，人參皂苷Rb1通過靜脈注入小鼠腦后，5 min即達到高峰，之后明顯下降，30 min后未測得腦組織中Rb1的含量。

通過實驗結(jié)果得出的曲線可以看出，18.596 min為其出峰時間，人參皂苷Rb1通過靜脈注射5 min、30 min、60 min、120 min、240 min后處理的心臟組織樣品進行HPLC檢測，其在19.13 min左右也得到分離，與標準曲線進行對照，說明該藥物在腦組織中有所分布。

4 結(jié)語

采用HPLC的流動相：具有1.00 ml/min的流速；乙腈與水的比率為28：72；檢測波長是205 nm。由此人參皂苷Rb1標準品的標準曲線可以確定出來。

根據(jù)腦組織分布圖判斷，在5 min前均出現(xiàn)干擾峰，相比較人參皂苷Rb1標準品而言，Rb1標準品對腦組織會產(chǎn)生較小的干擾。

對小鼠腦組織樣品測定結(jié)果進行分析得出，用8 mg/kg人參皂苷Rb1對小鼠進行注射后，針對不同的5個時間點，小鼠心臟組織的藥物濃度有以下特點：

5 min腦組織中Rb1濃度〉30 min腦組織中Rb1濃度，30 min后藥物逐漸自腦組織消除。根據(jù)小鼠腦組織中人參皂苷Rb1檢測曲線圖，小鼠靜脈注射人參皂苷Rb1后，藥物在腦組織中有所分布，滯留時間短，對人參皂苷Rb1發(fā)揮腦缺血損傷保護、神經(jīng)損傷保護、抗阿爾茨海默病、抗血管性癡呆、促進周圍神經(jīng)細胞再生等多種藥效提供基礎(chǔ)理論依據(jù)，具有重要的意義。

參考文獻

[1] 王瓊，王逸，韓春勇，等.人參皂苷Rg1、Rb1及其代謝產(chǎn)物益智作用的研究進展[J].中草藥，2014，45（13）：1960-1965.

[2] 劉秋婭，李曉宇，劉皋林，等.人參皂苷Rb1的藥理作用研究進展[J].中國藥學(xué)雜志，2013，48（15）：1233-1237.

[3] GAO X Q，YANG C X，CHEN G J，et al.Ginsenoside Rb1 regulates the expressions of brain-derived neurotrophic factor and caspase-3 and induces neurogenesis in rats with experimental cerebral ischemia[J].J Ethnopharmacol，2010，132（2）：393-399.endprint