齊多拉米雙夫定片微生物檢查方法研究

吳中華

(安徽省生物研究所， 合肥 230088)

齊多拉米雙夫定片微生物檢查方法研究

吳中華

(安徽省生物研究所， 合肥 230088)

建立齊多拉米雙夫定片微生物檢查方法。方法取齊多拉米雙夫定片，按《中國藥典》2010版二部附錄所載的“微生物限度檢查法”項下方法試驗，結果表明：采用薄膜過濾法測定細菌數，平皿法測定霉菌和酵母菌數，薄膜過濾法檢查控制菌大腸埃希菌。

齊多拉米雙夫定片；微生物限度檢查法

齊多拉米雙夫定片為復方制劑，主要成分為齊多夫定和拉米夫定，該制劑有協(xié)同抑菌作用，抗菌作用較單一成分增強，是治療HIV感染較為理想藥物。因藥品的處方、劑型、生產工藝的不同，其微生物檢驗方法也不盡相同，本試驗按照《中國藥品檢驗標準操作規(guī)程》[1]和《中國藥典》2010版二部附錄要求，通過加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉5種試驗菌，建立該產品的微生物檢查方法。

1 試驗材料

1.1 供試品

齊多拉米雙夫定片(安徽貝克生物制藥有限公司生產，批號110501、110502、110503，規(guī)格：拉米夫定150 mg/片和齊多夫定300 mg/片)。

1.2 培養(yǎng)基

玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基均由北京三藥科技開發(fā)公司生產，稀釋劑為pH值7.0的氯化鈉-蛋白胨緩沖液；以上均參照產品說明書和《中國藥典》2010年版配制。采用濕熱滅菌法[2]滅菌。

1.3 菌種

金黃色葡萄糖球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003] 、大腸埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]、白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]、黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]均來自中國食品藥品檢定院。

2 方法與結果

2.1 菌液制備[3]按《中國藥典》2010年版二部附錄“微生物限度檢查法”項下制備，制成50～100cfu/mL的菌懸液。菌株培養(yǎng)物均為第3代培養(yǎng)物。

2.2 供試液制備 取供試品10 g，加稀釋液至100 mL，混勻，制成1∶10供試液，薄膜過濾法取1∶10供試液50 mL，離心3 min(500 r/min)，取上清液薄膜過濾。

2.3 回收率計算

試驗組：取供試液，參照2.4和2.5方法計數。

菌液組：取各試驗菌，與試驗組相同操作(不加供試液)測定所加的試驗菌數。

供試品對照組：取供試液，與試驗組相同操作(不加試驗菌)測定供試液本底菌數。

試驗組菌落回收率(%)=(試驗組平均菌落數-供試品對照組平均菌落數)/菌液組平均菌落數×100%

2.4 細菌計數方法驗證試驗

平皿法取1∶10供試液1 mL加入無菌平皿，培養(yǎng)基稀釋法取1∶10供試液1 mL分別等量分注[4]2個平皿和5個平皿，以上平皿分別加入大腸埃希菌、金黃色葡萄糖球菌 、枯草芽孢桿菌50～100 cfu，立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，各制備2個平行培養(yǎng)[3]計數；薄膜過濾法取離心上清液1 mL加入無菌薄膜過濾器(微孔濾膜直徑50 mm，孔徑不大于0.45 μm)中，加稀釋劑300 mL(50 mL/次)進行沖洗過濾。在最后一次沖洗液中加入50～100 cfu上述試驗菌，取出薄膜，正面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，結果見表1。

表1 試驗菌平均回收率

2.5 霉菌及酵母菌計數驗證試驗

取1∶10供試液1 mL加入無菌平皿，分別加入白色念珠菌、黑曲霉50～100 cfu，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，各制備2個平行培養(yǎng)計數，結果見表1。

2.6 薄膜過濾法檢查控制菌大腸埃希菌

取離心上清液10 mL，參照2.4薄膜過濾，取出薄膜，加入100 mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，按控制菌大腸埃希菌檢查方法檢查[3]，結果見表2。

以上試驗獨立平行3次。

表2 控制菌大腸埃希菌測試結果

表中“+”表示檢出控制菌；“-”表示未檢出控制菌。

3 討論

從表1可以看出：在細菌、霉菌和酵母菌數檢查方法試驗中，平皿法對白色念珠菌和黑曲霉的回收率均高于70%[3]；薄膜過濾法對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的回收率高于70%[3]。從表2可以看出控制菌大腸埃希菌采用薄膜過濾法試驗組和陽性對照組檢出，陰性對照組未檢出，符合《中國藥典》要求。

試驗結論：齊多拉米雙夫定片微生物限度檢查方法，細菌和控制菌大腸埃希菌可采用薄膜過濾法檢查，而霉菌和酵母菌則應采用平皿法檢查。

[1]中國藥品生物制品檢定所，微生物限度檢查法[M] 《中國藥品檢驗標準操作規(guī)程》，北京，中國醫(yī)藥科技出版社，2010，356-358.

[2]國家藥典委員會， 滅菌法[M]，中華人民共和國藥典(二部)，北京，中國醫(yī)藥科技出版社，2010，附錄190.

[3]國家藥典委員會， 微生物限度檢查法[M]，中華人民共和國藥典(二部)，北京，中國醫(yī)藥科技出版社，2010，附錄 107-113.

[4]國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認證中心， 微生物檢查[M]//質量控制實驗室與物料系統(tǒng)，北京，中國醫(yī)藥科技出版社， 2011： 244.

Methodological study on microbial limit test of Zidovudine and Lamivudine tablets

WU Zhong-hua

(Biological Institute of Anhui Province， Hefei 230088， China)

According to the Chinese pharmacopieia(2010 Edition), an accurate method for microbial limit test of Zidovudine and Lamivudine tablets was established in this study. Membrane filtration and/or direct plate culture were taken for counting bacteria, mold and yeast usingE.colias the controls.

Zidovudine and Lamivudine tablets; microbial limit test

2015-01-14；

2015-02-16

吳中華，執(zhí)業(yè)藥師，主要從事藥品開發(fā)，E-mail:1291139562@qq.com。

R96

B

2095-1736(2015)05-0099-02

doi∶10.3969/j.issn.2095-1736.2015.05.099