吡格列酮聯(lián)合辛伐他汀對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化CD40-CD40配體系統(tǒng)的影響*

遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院心內(nèi)科(錦州 121000)

邱雅慧 薛 凌

吡格列酮聯(lián)合辛伐他汀對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化CD40-CD40配體系統(tǒng)的影響*

遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院心內(nèi)科(錦州 121000)

邱雅慧 薛 凌

目的: 探討吡格列酮辛伐他汀與CD40-CD40L系統(tǒng)相互作用機(jī)制以及其對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化的影響。方法: 40只實(shí)驗(yàn)兔，隨機(jī)分為5組，每組8只：正常對(duì)照組(A組)、高脂模型組(B組)、吡格列酮組(C組)、辛伐他汀組(D組)、聯(lián)合用藥組(E組)，實(shí)驗(yàn)共16周。16周末檢測(cè)如下指標(biāo)：①血脂；②血清超敏C反應(yīng)蛋白質(zhì)(hsCRP)、人可溶性CD40配體(sCD40L)、基質(zhì)金屬蛋白梅9(MMP-9)；③測(cè)定斑塊/內(nèi)膜面積比；④斑塊部位CD40L的表達(dá)。結(jié)果: 各用藥組總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)升高，高密度脂蛋白(HDL-C)降低；各用藥組hsCRP、sCD40L、MMP-9升高，斑塊/內(nèi)膜面積比出現(xiàn)下降，CD40的表達(dá)降低，聯(lián)合用藥組效果更佳。結(jié)論: 吡格列酮、辛伐他汀通過(guò)抑制CD40-CD40L信號(hào)通路抑制炎癥反應(yīng)，調(diào)脂等不同途徑抑制動(dòng)脈硬化的形成，聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用。

動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是一種多種因素共同作用的慢性炎癥性疾病[1]。目前研究發(fā)現(xiàn)CD40-CD40L系統(tǒng)在炎癥過(guò)程中發(fā)揮重要作用的信號(hào)通路[2]。CD40與CD40L廣泛存在于與動(dòng)脈硬化相關(guān)的各種細(xì)胞和血小板中，可調(diào)節(jié)多種炎癥反應(yīng)，被認(rèn)為可能是AS炎癥進(jìn)程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察吡格列酮聯(lián)合辛伐他汀對(duì)兔AS形成的影響以及對(duì)CD40-CD40L信號(hào)系統(tǒng)的影響，探討其抑制AS的可能作用機(jī)制，為臨床提供理論依據(jù)。

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康日本大耳白兔雄性40只，遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心提供，兔齡3個(gè)月左右，體重2.0 ±0.15kg。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為5組(n=8)。正常對(duì)照組(A組)；高脂模型組(B組)；吡格列酮組(C組)；辛伐他汀組(D組)；聯(lián)合用藥組(E組)；實(shí)驗(yàn)共16周。

2 觀測(cè)指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)留取血清及動(dòng)脈標(biāo)本檢測(cè)。①全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)； ②ELISA測(cè)定高敏C反應(yīng)蛋白質(zhì)(hsCRP)、人可溶性 CD40 配體(sCD40L)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)；③油紅o染色，測(cè)定斑塊/內(nèi)膜面積比，④免疫組織化學(xué)法測(cè)定斑塊部位CD40的表達(dá)。

結(jié) 果

1 血脂結(jié)果 與A組相比，B、C、D、E組TC、TG、LDL-C升高，HDL-C降低(P<0.01)；與B組相比較，C、D和E組TC、TG、LDL-C含量均顯著降低(P<0.01)，HDL-C含量顯著升高(P<0.01)；與C、D組相比，E組TC、TG、LDL-C含量均降低(P<0.05)，HDL-C含量升高(P<0.05)。

2 hsCRP、sCD40l、MMP-9檢測(cè)結(jié)果 與A組相比，B、C、D和E組hsCRP、sCD40L、MMP-9水平顯著升高(P<0.01)；與B組相比，C、D組和E組hsCRP、sCD40L、MMP-9水平顯著降低(P<0.01)；與C、D組相比，E組hsCRP、sCD40l、MMP-9水平顯著降低(P<0.05，附表)。

3 病理形態(tài)學(xué)觀察斑塊/內(nèi)膜面積比 與B組比較，其余各組斑塊面積/內(nèi)膜面積均出現(xiàn)降低；與C、D組比較，E組斑塊面積/內(nèi)膜面積明顯下降, 差異有顯著性(P<0.05，附表)。

4 CD40表達(dá)結(jié)果 與A組相比，B、C、D及E組主動(dòng)脈內(nèi)膜斑塊可見(jiàn)CD40表達(dá)；與B組比較，C、D、E組主動(dòng)脈內(nèi)膜CD40表達(dá)顯著降低， E組與C、D組相比，CD40表達(dá)減少(P<0.05)。

附表 各組血清hsCRP、sCD40L、MMP-9的變化

注：與A組相比 *P<0.01；與B組相比#P<0.01；與C、D組相比◇P<0.05。

討 論

在AS發(fā)生過(guò)程中，CD40-CD40L在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的多種細(xì)胞廣泛存在，與AS斑塊的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[3]。研究發(fā)現(xiàn)與AS密切相關(guān)的功能性分子(細(xì)胞因子、黏附分子和基質(zhì)金屬蛋白酶等)的分布與CD40-CD40L的分布具有明顯的一致性，CD40L與AS斑塊形成、斑塊破裂相關(guān)[4]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示免疫組化顯示藥物組動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中CD40表達(dá)較模型組減少，推斷吡格列酮及辛伐他汀具有抗AS作用與阻斷CD40-CD40L信號(hào)通路有關(guān)。

近期研究顯示PPAR-γ激活后能夠抑制促炎因子、炎癥因子靶基因的活化與轉(zhuǎn)錄，減少促炎細(xì)胞因子干擾素γ、腫瘤壞死因子-α、白介素-2的表達(dá)。促炎細(xì)胞因子可以增加CD40-CD40L mRNA的表達(dá)，使巨噬細(xì)胞和活化T細(xì)胞表面CD40表達(dá)增加[5]。因此推斷PPAR-γ的活化間接減少了CD40-CD40L系統(tǒng)的表達(dá)，在AS過(guò)程中發(fā)揮了相應(yīng)的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示PPAR-γ激動(dòng)劑吡格列酮抑制了動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展過(guò)程中CD40-CD40L的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，抑制AS斑塊的形成。辛伐他汀也可以使CD40-CD40L表達(dá)減少，調(diào)節(jié)血脂，抑制血管炎癥反應(yīng)、抑制粥樣斑塊的發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與單一用藥相比，斑塊面積在聯(lián)合用藥時(shí)能夠明顯降低，其他指標(biāo)如血脂、炎癥因子等也較單一用時(shí)改善。實(shí)驗(yàn)表明吡格列酮和辛伐他汀藥物聯(lián)合可以干預(yù)AS的發(fā)生發(fā)展與阻斷CD40-CD40L系統(tǒng)相關(guān)，具有協(xié)同作用。下一步需要進(jìn)行長(zhǎng)期臨床實(shí)驗(yàn)來(lái)明確兩類(lèi)藥物的相互作用效果。

[1] Tuttolomondo A, Di Raimondo D, Pecoraro R,etal. Atherosclerosis as an inflammatory disease[J]. Curr Pharm Des, 2012, 18(28):4266-4288.

[2] Borcherding F, Nitschke M, Hundorfean G,etal.The CD40-CD40L pathway contributes to the proinflammatory function of intestinal epithelial cells in inlammatory bowel disease[J]. Am J Pathol, 2010, 176(4): 1816-1827.

[3] Tousoulis D, Androulakis E, Papageorgiou N,etal. From atherosclerosis to acute coronary syndromes: the role of soluble CD40 ligand[J].Trends Cardiovasc Med， 2010，20(5):153-64.

[4] Robles-Carrillo L,Meyer T,Hatfield M,etal.Anti-CD40L immune complexes potently activate platelets in vitro and cause thrombosis in FCGR2A transgenic mice[J].J Immunol,2010, 185(3): 1577-1583.

[5] Jung UJ, Torrejon C, Chang CL,etal. Fatty acids regulate endothelial lipase and inflammatory markers in macrophages and in mouse aorta: a role for PPARγ[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2012, 32(12):2929-2937.

(收稿：2015-08-10)

*遼寧省科學(xué)事業(yè)公益研究基金(GY2012-B-005)

動(dòng)脈硬化 @CD40-CD40配體 動(dòng)物，實(shí)驗(yàn) 兔

R543.5

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.12.003

遼寧省錦州市科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目(12B1D26)