兒童急性白血病細胞遺傳學(xué)特征分析

陳音 徐學(xué)聚

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 兒科 河南 鄭州 450052)

白血病是一組造血系統(tǒng)惡性增殖性疾病，是發(fā)病率最高的兒童惡性腫瘤，染色體核型分析及融合基因檢測是獨立的預(yù)后指標，對白血病的分型診斷和預(yù)后判斷具有重要的參考價值。本研究采用染色體核型分析聯(lián)合應(yīng)用多重巢式RT－PCR 方法分析100 例患兒的細胞遺傳學(xué)特征，為臨床診斷及治療提供理論依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年10月至2014年10月確診的初發(fā)白血病患兒共100例，根據(jù)形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果，按照FAB 分型或MICM(morphology imemuncology cytogenetics molecularbiology)分型標準［1］，將白血病分為急性淋巴細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)、急性髓細胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)，其中男67 例，女33例，男女比例為2.03∶1，年齡1.5 ～16 歲，中位年齡5歲11 個月，免疫分型示:B－ALL 76 例，T－ALL 4 例，AML 20 例，其中M1 型2 例，M2 型8 例，M3 型7 例，M4 型1 例，M5 型2 例。

1.2 檢測方法 取治療前患兒骨髓液3 ml 或外周血3 ml(必須確保外周血中原始幼稚細胞比例＞30%)，肝素抗凝，4 ℃，24 h 內(nèi)送檢，采用骨髓/外周血短期培養(yǎng)法制備染色體標本，R 顯帶技術(shù)或G 顯帶技術(shù)進行核型分析，分析20 ～30 個分裂中期細胞，核型描述按《人類細胞遺傳學(xué)國際命名體制》，采用多重巢式RTPCR 方法檢測在ALL 或AML 中可能出現(xiàn)的14 種融合基因及HOX11 的表達情況。

2 結(jié)果

2.1 ALL 核型分析結(jié)果 80 例ALL 中僅76 例有染色體核型檢查結(jié)果，4 例未見分裂相。45 例異常(59.21%)，其中染色體數(shù)目異常22 例(48.89%)，結(jié)構(gòu)異常17 例(37.78%)，同時有數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常6 例(13.33%)。異常核型中染色體數(shù)目＞50 的高超二倍體12 例(26.67%)，47 ～50 的低超二 倍 體6 例(13.33%)，假二倍體12 例(26.67%)，亞二倍體4 例(8.89%)，其中染色體易位7 例分別為:t(9;22)(q34;q11)，t(1;19)，t(4;11)(q21;q23)，t(2;11)(p13;q23)，t(14;15)(q32;q11)，t(3;6)(p14;q23)，t(8;14)(q24;q11)。

2.2 AML 核型分析結(jié)果 20 例AML 中15 例有克隆性核型異常，核型異常率為75.00%，其中結(jié)構(gòu)異常11 例，包括t(8;21)5 例，t(15;17)4 例，t(9;11)1 例，t(8;21)，del(9)1 例。數(shù)目異常5 例，其中超二倍體2例，亞二倍體3 例，同時有數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常者2 例，分別為44－45，X，－Y，t(8;21)(q22;q22)，del(9)(q22);47，XY，inv(16)(p13;q22)，+22。

2.3 融合基因分析結(jié)果 100 例患兒中融合基因檢出率為42%(42/100)，其中TEL/AML1 陽性15 例，PML/RARa 陽性7 例，E2A/PBX1 陽性6 例，AML1/ETO 陽性4 例，MLL 基因重排陽性4 例，BCR/ABL 陽性2 例，SIL/TAL1 陽性2 例，HOX11 陽性1 例。結(jié)合患兒染色體核型分析結(jié)果，15 例TEL/AML1 陽性患兒均未檢測出t(12;21)染色體易位，7 例PML/RARa 陽性患兒中4 例檢測出t(15;17)染色體易位，6 例E2A/PBX1 陽性患兒中2 例檢測出t(1;19)染色體易位，4例AML1/ETO 陽性患兒中3 例檢測出t(8;21)染色體易位，2 例BCR/ABL 陽性患兒均檢測出t(9;22)染色體易位。

31 例染色體正常核型中檢測出融合基因異常20例(64.52%)，分別為TEL/AML1 12 例，PML/RARa 3例，E2A/PBX1 2 例，MLL 基因重排2 例，AML1/ETO 1例，4 例無分裂相患兒檢測出融合基因異常2 例，分別為MLL/ENL，TEL/AML1，通過染色體核型分析及融合基因共檢測出細胞遺傳學(xué)異常69 例(69.00%)。

3 討論

白血病是一組正常造血過程中某一階段細胞惡性擴增的單克隆性異質(zhì)性疾病，在小兒惡性腫瘤中發(fā)病率居首位，近年來，環(huán)境和空氣的持續(xù)污染以及人們對房屋裝修污染認識的不足，使兒童白血病發(fā)生率有逐年增多趨勢，與國外報道基本一致［2］，骨髓檢查是確立診斷和評定療效的重要依據(jù)，隨著流式細胞術(shù)、染色體核型分析聯(lián)合多重PCR 方法在臨床上的應(yīng)用，兒童白血病的診斷符合率接近90%［3］，為疾病的臨床診斷、分型及預(yù)后判斷提供了有力的參考依據(jù)。

染色體核型異?？梢暈樽钣幸饬x的獨立預(yù)后因素，多項研究均顯示ALL 和AML 患兒染色體結(jié)構(gòu)異常發(fā)生頻率相差很大，60% ～89%的ALL 有細胞遺傳學(xué)異常［4］。在所收集的100 例白血病患兒資料中，80例ALL 核型異常率為56.25%(45/80)，高超二倍體、低超二倍體、假二倍體、亞二倍體檢出率分別為26.67%、13.33%、26.67%、8.89%，與文獻報道基本相符［6］，其數(shù)目的增加多見于4、6、8、10、14、17、18、21及X 號染色體。大多資料表明超二倍體和多倍體提示預(yù)后較好，而亞二倍體則預(yù)后較差［7］。Ph(+)ALL占2.63%，與文獻報道相符［8］，其預(yù)后差，影響患兒血象的完全緩解率和可能的生存率，建議1 個療程化療緩解后盡快行骨髓移植。20 例AML 中核型異常率為75.00%(15/20)，與相關(guān)報道相符［5］，+8 是AML 中最常見的數(shù)目異常染色體改變，約占AML 患兒核型異常的10% ～15%［7］，主要見于M1、M4 和M5，常見的結(jié)構(gòu)異常主要包括t(8;21)、t(15;17)，多集中于M2、M3 亞型中，t(8;21)是一個較好的標志，它的存在使這類患者對一些藥物有較好的反應(yīng)，可作為低風(fēng)險治療方案的制定依據(jù)，同時可用于療效監(jiān)測及微小殘留的檢測［10］。t(15;17)是確診M3 及采用全反式維A 酸治療的標準，其臨床完全緩解率大于90%［11］。

多數(shù)白血病發(fā)生染色體畸變，累及不同的融合基因，這些遺傳學(xué)變化與疾病的臨床及預(yù)后有密切關(guān)系，單一融合基因檢測可能會導(dǎo)致病情貽誤，采用多重RT－PCR 方法同時進行多種常見融合基因的篩查法更符合WHO 最新分型的需要，融合基因還可作為檢測白血病微小殘留病灶的分子標志物，臨床上已將融合基因作為白血病診斷危險度分級的標準，其可有效預(yù)測疾病的完全緩解率、復(fù)發(fā)率和總體生存率，從而輔助臨床治療［12］。TEL/AML1 易位是兒童ALL 中最為常見的易位，通常提示較好的預(yù)后，其復(fù)發(fā)的時間也較晚，而MLL 基因重排及BCR/ABL 融合基因則為所熟知的預(yù)后較差的標志。本研究中TEL/AML1 陽性檢出率15.00%，染色體核型分析未檢測出t(12;21)易位，7 例PML/RARa 陽性患兒只有4 例檢測出t(15;17)，陽性率偏低，說明染色體核型分析可能受細胞培養(yǎng)方法、顯帶技術(shù)、分辨能力影響，使一些微小的染色體異常如易位或缺失區(qū)域很難被識別，只有借助RTPCR 技術(shù)或Southern blot 才能被發(fā)現(xiàn)。染色體核型分析聯(lián)合多重巢式RT－PCR 方法使白血病患兒的遺傳學(xué)異常檢出率提升至69.00%，較單用染色體核型分析或融合基因檢測均高，與國內(nèi)外文獻報道相一致［6，13，14］，充分說明二者在臨床上的結(jié)合應(yīng)用可顯著提高白血病細胞遺傳學(xué)異常檢出率，指導(dǎo)白血病的診斷分型、個性化治療及預(yù)后。

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