不同產(chǎn)地加工方法對(duì)太子參質(zhì)量的影響

吳增光，馮 果，2* ，劉 文，李 瑋，張建鋒，張石宇，鄭雪瑩

(1．貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽550002;2．天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193)

太子參為石竹科植物孩兒參Pseudostellaria heterophylla(Miq．)Pax ex Pax et Hoffm．的干燥塊根，具有益氣健脾、生津潤(rùn)肺的功效，用于脾虛體倦、食欲不振、病后虛弱、氣陰不足、自汗口渴、肺燥干咳［1］?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，太子參含有氨基酸、多糖、苷類、磷脂類、環(huán)肽類、揮發(fā)油等多種有效成分［2－9］，具有心肌保護(hù)作用、增強(qiáng)機(jī)體免疫作用、抗氧化作用、鎮(zhèn)咳、抗菌、抗病毒、抗應(yīng)激、抗疲勞、降血糖等多種藥理作用［10－16］。

產(chǎn)地加工是形成中藥品質(zhì)的重要環(huán)節(jié)，不同的加工方法對(duì)太子參中主要化學(xué)成分的影響不同，2010年版《中國(guó)藥典》一部收載太子參的加工方法為“夏季莖葉大部分枯萎時(shí)采挖，洗凈，除去須根，置沸水中略燙后曬干或直接曬干”［1］，各地尚有曬干法、燙后曬干法、蒸后曬干法、陰干法、烘干法等加工方法，太子參產(chǎn)地加工方法的優(yōu)選亟需進(jìn)一步研究。該研究以皂苷、多糖、氨基酸、水溶性浸出物、醇溶性浸出物為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用綜合評(píng)分法優(yōu)選太子參的最佳產(chǎn)地加工方法，為太子參的產(chǎn)地加工及質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1．1 儀器 TU-1810PC型紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)、AE/240型電子天平(上海梅特勒儀器有限公司)、AVY 220型電子天平(日本島津)、SK 8210 HP型超聲波清洗機(jī)(上?？茖?dǎo)儀器有限公司)、干燥箱(中華人民共和國(guó)上海市儀器總廠)。

1．2 藥材與試藥 太子參鮮藥材來源于貴州省施秉縣太子參種植基地，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院李偉副教授鑒定為石竹科植物孩 兒 參 Pseudostellaria heterophylla(Miq．)Pax ex Pax et Hoffm．的干燥塊根;葡萄糖對(duì)照品(貴州迪大生物科技有限責(zé)任公司，批號(hào)GZDD-0774)、精氨酸對(duì)照品(貴州迪大生物科技有限責(zé)任公司，批號(hào)GZDD-0886，供含量測(cè)定用)、人參皂苷Rg1對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110703-201529，供含量測(cè)定用);其余試劑為分析純，水為蒸餾水。

1．3 產(chǎn)地加工方法

1．3．1 陰干法。采太子參鮮藥材，潔凈后置陰涼通風(fēng)處陰干。

1．3．2 曬干法。采太子參鮮藥材，潔凈后置太陽下曬干。

1．3．3 烘干法。包括2種:①采太子參鮮藥材，潔凈后及時(shí)置干燥箱內(nèi)于40、60、80、100℃烘干;②采太子參鮮藥材，潔凈后分別放置1、2、3、4、5 d 后，于60 ℃烘干。

1．3．4 蒸法。包括2種:①太子參鮮藥材蒸透后，分別置干燥箱內(nèi)于40、60、80、100 ℃烘干;②太子參鮮藥材蒸 10、15、20 min后于60℃烘干。

1．3．5 燙法?？煞譃? 種方法:①分別加4、6、8、10、12 倍量水燙透后，于60℃烘干。②加8倍量水燙3 min后分別于40、60、80、100 ℃ 烘干;③加 8 倍量水分別燙 5、9 min，于60℃烘干。

1．4 指標(biāo)成分的提取

1．4．1 皂苷的提取。精密稱取太子參粗粉1 g，加入10倍量水飽和正丁醇后，浸泡12 h，50℃下超聲提取40 min，過濾至25 ml容量瓶中，加水飽和正丁醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

1．4．2 多糖的提取。精密稱取1 g用10 ml蒸餾水浸泡24 h，超聲提取2次，每次30 min，過濾，棄去殘?jiān)喜V液濃縮，用95%乙醇靜置沉淀，過濾得到沉淀，將沉淀溶于丙酮中充分洗滌靜置過夜，沉淀再次溶于無水乙醇中充分洗滌靜置，待沉淀完全后將沉淀物置水浴鍋中加熱干燥，得到太子參多糖粗品。

1．4．3 氨基酸的提取。取太子參粉末0．05 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加70%乙醇25 ml，超聲處理45 min，放冷，搖勻，濾過，收集續(xù)濾液，即得供試品溶液。

1．5 指標(biāo)成分的含量測(cè)定

1．5．1 皂苷的含量測(cè)定。

1．5．1．1 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品15 mg于10 ml容量瓶中，加入少量甲醇溶解并定容，即得1．5 mg/ml的對(duì)照品溶液。

1．5．1．2 線性關(guān)系考察。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液 0．2、0．4、0．5、0．6、0．8、1．0 ml，分別置于 10 ml具塞試管中，以1 ml甲醇作為空白，于沸水浴下?lián)]去溶劑，精密加入5%的香草醛冰醋酸溶液(用前臨時(shí)配制)0．2 ml和高氯酸0．8 ml混勻，密塞。置60℃水浴中加熱15 min后取出，用流水冷卻。然后精密加入冰醋酸5 ml，搖勻，于560 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1．5．1．3 樣品測(cè)定。按“1．4．1”制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液0．3 ml，顯色后于紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，計(jì)算其含量。

1．5．2 多糖的含量測(cè)定。

1．5．2．1 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取葡萄糖對(duì)照品1．36 mg，置于10 ml容量瓶中加水定容至刻度，搖勻即得濃度為0．136 mg/ml的葡萄糖對(duì)照品溶液。

1．5．2．2 線性關(guān)系考察。分別精密吸取 0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、1．2 ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液于試管中，依次加入蒸餾水使終體積為2．0 ml，蒸餾水作空白對(duì)照。各管加入苯酚試液0．5 ml，搖勻，再滴加濃硫酸各 4．0 ml，沸水浴 15 min，取出放至室溫，于490 nm處測(cè)定吸光度。以吸光度值為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1．5．2．3 樣品測(cè)定。按“1．4．2”制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1．0 ml，顯色后于紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，計(jì)算其含量。

1．5．3 氨基酸的含量測(cè)定。

1．5．3．1 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取精氨酸對(duì)照品5．02 mg置于10 ml容量瓶中加水至刻度，搖勻即得濃度為0．502 mg/ml精氨酸對(duì)照品溶液。

1．5．3．2 線性關(guān)系考察。精密吸取對(duì)照品溶液 0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0 ml于 10 ml量瓶中，加水至同體積，依次加入醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH=5．4)2．0 ml和3%茚三酮乙二醇溶液2．0 ml，沸水浴15 min，取出，加50%異丙醇至刻度，搖勻;另以3．0 ml水為空白，同法操作。在570 nm處測(cè)定吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1．5．3．3 樣品測(cè)定。分別取各樣品按“1．4．3”制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1．0 ml，顯色后于紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，計(jì)算其含量。

1．5．4 浸出物的測(cè)定。

1．5．4．1 水溶性浸出物。按2010年版《中國(guó)藥典》附錄XA水溶性浸出物測(cè)定方法(熱浸法)對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算水溶性浸出物的量。

1．5．4．2 醇溶性浸出物。按2010年版《中國(guó)藥典》附錄XA醇溶性浸出物測(cè)定方法(熱浸法)對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算醇溶性浸出物的量。

1．6 產(chǎn)地加工方法的優(yōu)選 該試驗(yàn)采用多指標(biāo)綜合評(píng)分法［17］優(yōu)選太子參的產(chǎn)地加工方法，以皂苷、多糖、氨基酸、水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，且含量都是越高越好。因此在數(shù)據(jù)處理時(shí)引用一個(gè)綜合指標(biāo)“隸屬度”，即指標(biāo)隸屬度=(指標(biāo)值－指標(biāo)最小值)/(指標(biāo)最大值－指標(biāo)最小值);根據(jù)各成分在太子參中的重要性，考慮到皂苷和多糖各占30%、氨基酸占20%、水溶性浸出物和醇溶性浸出物各占10%的權(quán)重，綜合分?jǐn)?shù)=皂苷隸屬度×30%+多糖隸屬度×30%+氨基酸隸屬度×20%+水溶性浸出物隸屬度×10%+醇溶性浸出物隸屬度×10%，滿分為1．00，計(jì)算各樣品的綜合評(píng)分值。

2 結(jié)果與分析

2．1 含量測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果

2．1．1 皂苷含量。以吸光度值為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，皂苷含量的回歸方程為:A=29．088C－0．017 6，相關(guān)系數(shù)r=0．999 5，表明人參皂苷Rg1在0．01 ～0．16 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;皂苷含量測(cè)定的精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)的 RSD 分別為0．8%、1．2%、1．7%，均小于 3%;加樣回收率試驗(yàn)，其平均回收率為98．66%，RSD為2．8%。

2．1．2 多糖含量。以吸光度值為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，多糖含量的回歸方程為:A=5．378 3C－0．159 3，相關(guān)系數(shù)r=0．999 2，表明葡萄糖在0．041 8 ～0．251 0 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;多糖含量測(cè)定的精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD 分別為0．87%、0．94%、2．16%，均小于3%;加樣回收率試驗(yàn)，其平均回收率為98．66%，RSD為2．06%。

2．1．3 氨基酸含量。以吸光度值為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，氨基酸含量的回歸方程為:A=11．493C－0．041 9，相關(guān)系數(shù)r=0．9994，表明精氨酸在0．0251 ～0．1506 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。氨基酸含量測(cè)定的精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)的 RSD 分別為 0．09%、1．75%、2．61%，均小于3%;加樣回收率試驗(yàn)，其平均回收率為100．02%，RSD為1．3%。

2．2 綜合評(píng)分法優(yōu)選最佳產(chǎn)地加工方法 按“1．5”項(xiàng)下各評(píng)價(jià)指標(biāo)的含量測(cè)定方法對(duì)各樣品的指標(biāo)成分進(jìn)行測(cè)定，并按“1．6”項(xiàng)下方法計(jì)算其綜合評(píng)分值。從表1可得出，1號(hào)樣品的產(chǎn)地加工方法為陰干法，綜合評(píng)分值為0．401 5;2號(hào)樣品為曬干法，綜合評(píng)分值為0．657 1;3～12號(hào)樣品為烘干法，其8號(hào)樣品的綜合評(píng)分值最高，為0．662 9;13～19號(hào)樣品為蒸法，其19號(hào)樣品的綜合評(píng)分值最高，為0．746 4;20～30號(hào)樣品為燙法，其24號(hào)樣品的綜合評(píng)分值最高，為0．601 6。在不同的產(chǎn)地加工方法中，以綜合評(píng)分值的大小排序，從大到小的順序?yàn)檎舴?0．746 4)﹥烘干(0．662 9)﹥曬干(0．657 1)﹥燙法(0．601 6)﹥陰干(0．401 5)，表明太子參的最佳產(chǎn)地加工方法為蒸法，蒸法的最佳工藝為取太子參鮮藥材，蒸20 min，于60℃烘干。

表1 不同產(chǎn)地加工方法對(duì)太子參藥材質(zhì)量的影響(n=3)

3 討論

太子參中皂苷類成分容易受生物活性酶的影響;多糖類成分難溶或不溶于水，但容易被水解成低聚糖、單糖;氨基酸類成分易溶于水，且熱穩(wěn)定性差，長(zhǎng)時(shí)間加熱會(huì)導(dǎo)致成分的損失。故不同產(chǎn)地加工方法對(duì)太子參藥材的質(zhì)量有較大的影響，在產(chǎn)地加工過程中，應(yīng)盡快滅活新鮮太子參中的酶的活性，嚴(yán)格控制干燥溫度和時(shí)間是太子參產(chǎn)地加工的關(guān)鍵技術(shù)所在，也是影響太子參質(zhì)量的主要因素。

多成分、多指標(biāo)控制中藥材質(zhì)量已成為發(fā)展新趨勢(shì)，是中藥現(xiàn)代化發(fā)展進(jìn)程中的必然要求。該研究以太子參皂苷、多糖、氨基酸、水溶性浸出物、醇溶性浸出物作為指標(biāo)成分，采用綜合評(píng)分法對(duì)太子參的產(chǎn)地加工方法進(jìn)行優(yōu)選，所優(yōu)選出的方法科學(xué)合理，其加工工藝簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、加工出的藥材色澤和品質(zhì)好，綜合評(píng)分值較高，使太子參的質(zhì)量從源頭上得到了控制。該產(chǎn)地加工方法的優(yōu)選對(duì)企業(yè)及藥農(nóng)的規(guī)模化、產(chǎn)業(yè)化加工太子參藥材具有一定的指導(dǎo)意義。

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