拉米夫定和阿德福韋酯抗病毒療效與HBV基因型的關(guān)系*

劉 鍵，陸學(xué)東，黃 烈，莊 鵬，王 瓊，吳潤香，楊來智

(廣東省深圳市第四人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部;2.感染科 518033)

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·論 著·

拉米夫定和阿德福韋酯抗病毒療效與HBV基因型的關(guān)系*

劉 鍵1，陸學(xué)東1，黃 烈1，莊 鵬2，王 瓊1，吳潤香1，楊來智1

(廣東省深圳市第四人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部;2.感染科 518033)

目的 探討慢性乙型肝炎患者應(yīng)用拉米夫定、阿德福韋酯的療效與HBV基因型的關(guān)系。方法 選取125例慢性乙型肝炎患者，分別給予拉米夫定(拉米夫定組，n=60)和阿德福韋酯(阿德福韋酯組，n=65)抗病毒治療。觀察2組治療3、6、12個(gè)月后的病毒學(xué)應(yīng)答率、血清學(xué)應(yīng)答率及生化學(xué)應(yīng)答率，并于治療12個(gè)月后檢測耐藥率及耐藥基因突變位點(diǎn)。結(jié)果 拉米夫定組在治療6、12個(gè)月后，B基因型HBV感染患者病毒學(xué)應(yīng)答率、血清學(xué)應(yīng)答率明顯高于C基因型HBV感染患者(P<0.05)，但生化學(xué)應(yīng)答率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。阿德福韋酯組在治療期間B基因型HBV感染患者與C基因型HBV感染患者的病毒學(xué)應(yīng)答率、血清學(xué)應(yīng)答率、生化學(xué)應(yīng)答率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療12個(gè)月后，拉米夫定組耐藥率明顯高于阿德福韋酯組(P<0.05)，拉米夫定組和阿德福韋酯組耐藥基因突變位點(diǎn)分別以rt108M、rt236T為主。結(jié)論 拉米夫定對B基因型HBV的抑制作用優(yōu)于C基因型HBV；阿德福韋酯的抗病毒療效與HBV基因型無關(guān)；在慢性乙肝型炎治療過程中要重視HBV耐藥性發(fā)生，加強(qiáng)療效評估。

乙型肝炎病毒； 基因型； 拉米夫定； 阿德福韋酯

抗HBV治療是慢性乙型肝炎的主要治療手段。研究顯示，慢型乙型肝炎的進(jìn)展、抗病毒治療的療效與HBV基因型及耐藥基因變異有密切關(guān)系[1-2]。 核苷類似物是目前臨床上最常用的抗病毒類藥物。本研究擬探討深圳地區(qū)慢性乙型肝炎患者HBV基因型與核苷類似物抗病毒療效的關(guān)系，為不同基因型患者選擇合理有效的抗病毒治療方案提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年1月至2013年12月本院門診和住院的接受拉米夫定、阿德福韋酯抗病毒治療的慢性乙型肝炎患者125例，其中男83例，女42例，年齡19～63歲，平均33.55歲，均按慢性乙型肝炎防治指南(2010版)診斷標(biāo)準(zhǔn)確診[3]。納入患者甲、丙、丁、戍、庚等其他類型肝炎病毒檢測均為陰性，并且無拉米夫定或阿德福韋酯治療史，HBV DNA無拉米夫定、阿德福韋酯耐藥基因位點(diǎn)。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 入選者分為拉米夫定組、阿德福韋酯組。拉米夫定組(n=60)中，B基因型HBV感染患者38例，C基因型HBV感染患者22例，給予口服拉米夫定(葛蘭素史克制藥蘇州有限公司，批號H20030581)100 mg/d，1次/天；阿德福韋酯組(n=65)中，B基因型HBV感染患者40例、C基因型HBV感染患者25例，給予口服阿德福韋酯片(上海益生源藥業(yè)有限公司，批號H20070216)10 mg/d，1次/天。每組患者至少用藥12個(gè)月，分別在治療前及治療3、6、9、12個(gè)月時(shí)檢測HBV DNA、HBV血清標(biāo)志物及肝功能指標(biāo)，在治療12個(gè)月時(shí)進(jìn)行該藥物的耐藥性檢測。

1.2.2 標(biāo)本采集 靜脈采集慢性乙型肝炎患者不抗凝血3 mL，2 000 r/min離心5 min，分離血清-20 ℃儲存?zhèn)溆?，所有?biāo)本無溶血、脂血現(xiàn)象。

1.2.3 HBV DNA檢測 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測HBV DNA，MX-3000P熒光定量PCR儀購自Agilent公司，HBV DNA定量試劑盒由QIAGEN公司提供。

1.2.4 HBV DNA基因型與常見耐藥位點(diǎn)檢測 采用DNA反相斑點(diǎn)雜交芯片技術(shù)檢測HBV DNA基因型與常見耐藥基因位點(diǎn)。COMBI-H12型分子雜交儀購自FINEPCR公司，PTC-200型PCR擴(kuò)增儀購自MJ RESEARCH公司，HBV DNA耐藥基因芯片試劑盒由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供。

1.2.5 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測 采用日本日立7600型全自動生化分析儀檢測ALT，試劑由北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司提供。

1.2.6 乙型肝炎e抗原(HBeAg)相對水平檢測 采用免疫化學(xué)發(fā)光法檢測HBeAg的相對水平，Gene-Amp5700型熒光PCR檢測儀購自美國PE公司，病毒核酸定量檢測試劑盒由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。

1.3 療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[4]根據(jù)《病毒性肝炎防治方案》確定抗病毒療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：(1)生化學(xué)應(yīng)答，ALT復(fù)常指ALT降至正常范圍之內(nèi)；(2)病毒學(xué)應(yīng)答，HBV 陰轉(zhuǎn)指HBV DNA低于檢測下限，即HBV DNA<1×103copy/mL；(3)血清學(xué)應(yīng)答，HBeAg陰轉(zhuǎn)或HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換。

2 結(jié) 果

2.1 B、C基因型HBV感染患者拉米夫定療效比較 在拉米夫定抗病毒治療3個(gè)月時(shí)，B、C基因型HBV感染患者的病毒學(xué)應(yīng)答率、血清學(xué)應(yīng)答率及生化學(xué)應(yīng)答率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療6、12個(gè)月時(shí)，B、C基因型HBV感染患者的病毒學(xué)應(yīng)答率、血清學(xué)應(yīng)答率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但生化學(xué)應(yīng)答率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2 B、C基因型HBV感染患者阿德福韋酯療效比較 B、C基因型HBV感染患者應(yīng)用阿德福韋酯抗病毒治療3、6、12個(gè)月，病毒學(xué)應(yīng)答率、血清學(xué)應(yīng)答率及生化學(xué)應(yīng)答率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表1 B、C基因型HBV感染患者拉米夫定療效比較[n(%)]

表2 B、C基因型HBV感染患者阿德福韋酯療效比較[n(%)]

2.3 耐藥性檢測 治療12個(gè)月時(shí)，對拉米夫定組和阿德福韋酯組患者進(jìn)行治療藥物的耐藥性檢測，結(jié)果顯示拉米夫定組耐藥率明顯高于阿德福韋酯組(P<0.05)；拉米夫定組中，C基因型HBV感染患者的耐藥率明顯高于B基因型HBV感染患者(P<0.05)，見表3。耐藥基因位點(diǎn)檢測結(jié)果顯示，拉米夫定組耐藥基因位點(diǎn)主要為rt108M，其次為rt204V；阿德福韋酯組耐藥基因位點(diǎn)為rt236T，其次為rt181V。

表3 拉米夫定和阿德福韋酯耐藥性檢測結(jié)果

3 討 論

拉米夫定和阿德福韋酯是目前臨床上應(yīng)用較廣泛的2種核苷類抗HBV藥物。拉米夫定抑制HBV復(fù)制的作用機(jī)制是藥物在細(xì)胞內(nèi)磷酸化后再與脫氧胞嘧啶核苷之間進(jìn)行競爭，進(jìn)入合成中的cDNA鏈，逐步終止復(fù)制過程，從而阻斷HBV復(fù)制中RNA-DNA的反轉(zhuǎn)錄[5-6]。阿德福韋酯是1種新型腺嘌呤磷酸酯類化合物?？诜⒌赂ｍf酯吸收后，經(jīng)水解、磷酸化形成阿德福韋二磷酸酯，與腺苷酸競爭，終止HBV DNA 新鏈合成，抑制HBV復(fù)制[7-8]，阿德福韋酯不僅抗HBV效果顯著，在拉米夫定耐藥突變株出現(xiàn)的情況下，還可對其進(jìn)行有效抑制[9-10]。

有研究顯示，不同基因型的HBV對抗病毒藥物的敏感性有一定差異。核苷類似物的研究主要集中于拉米夫定，關(guān)于拉米夫定療效與HBV基因型相關(guān)性的報(bào)道較多，有學(xué)者認(rèn)為B、C基因型HBV對拉米夫定的療效無影響；也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，拉米夫定對C基因型HBV的抑制作用較B基因型HBV差[6]。有研究報(bào)道，B基因型HBV感染患者病毒學(xué)應(yīng)答率、血清學(xué)應(yīng)答率及生化學(xué)應(yīng)答率均高于C基因型及B+C基因型HBV感染患者[11]。接受拉米夫定治療的C基因型HBV感染患者的反應(yīng)性及停藥后的抗病毒持續(xù)時(shí)間均低于B基因型HBV感染患者[12]。目前，HBV基因型對阿德福韋酯抗病毒療效是否具有影響尚存在爭議[13-15]。

本研究對深圳地區(qū)125例慢性乙型肝炎患者分別應(yīng)用拉米夫定或阿德福韋酯進(jìn)行為期12個(gè)月的抗病毒治療，通過對HBV DNA、HBeAg、ALT等指標(biāo)的檢測分析，發(fā)現(xiàn)B基因型HBV感染患者與C基因型HBV感染患者在應(yīng)用拉米夫定6、12個(gè)月后的病毒學(xué)應(yīng)答率、血清學(xué)應(yīng)答率存在明顯差異(P<0.05)，但在治療期間生化學(xué)應(yīng)答率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示B基因型HBV對拉米夫定的抗病毒應(yīng)答率高于C基因型HBV。阿德福韋酯抗病毒治療3、6、12個(gè)月后，B基因型HBV感染患者與C基因型HBV感染患者的病毒學(xué)應(yīng)答率、血清學(xué)應(yīng)答率、生化學(xué)應(yīng)答率均無明顯差異(P>0.05)，說明HBV基因型對阿德福韋酯的療效無明顯影響，與許正鋸等[16]和楊麗敏等[17]報(bào)道結(jié)果一致。本研究通過對藥物的耐藥性檢測，發(fā)現(xiàn)治療12個(gè)月后，拉米夫定組和阿德福韋酯組均有耐藥突變基因出現(xiàn)，拉米夫定組耐藥基因位點(diǎn)主要為rt108M，阿德福韋酯組耐藥基因位點(diǎn)為rt236T。拉米夫定組耐藥率高于阿德福韋酯組(P<0.05)；拉米夫定組中，C基因型HBV感染患者的耐藥率明顯高于B基因型HBV感染患者(P<0.05)。

綜上所述，在慢性乙肝型炎治療過程中要重視HBV耐藥性的發(fā)生，加強(qiáng)療效評估，一旦發(fā)現(xiàn)耐藥，要及時(shí)調(diào)整治療方案，如對拉米夫定耐藥者可更換阿德福韋酯治療或聯(lián)合用藥治療；對阿德福韋酯耐藥者可聯(lián)合應(yīng)用拉米夫定，或用替比夫定、恩替卡韋聯(lián)合用藥治療[18-19]。建議治療6個(gè)月時(shí)進(jìn)行耐藥基因檢測，及早發(fā)現(xiàn)耐藥，及時(shí)更換藥物，以保證和提高療效。

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Correlation between HBV genotype and the antiviral efficacy of lamifuding and adefovir dipivoxil*

LIUJian1,LUXue-dong1,HUANGLie1,ZHUANGPeng2,WANGQiong1,WURun-xiang1,YANGLai-zhi1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory;2.DepartmentofInfectiousDisease,theFourthPeople′sHospitalofShenzhen,Shenzhen，Guangdong518033，China)

Objective To explore the relationship between the antiviral therapy efficacy of lamifuding and adefovir dipivoxil with HBV genotypes in chronic hepatitis B(CHB).Methods 125 cases of CHB patients were selected and treated lamivudine (lamivudine group,n=60) and adefovir dipivoxil (adefovir dipivoxil group,n=65).The virus response rates,serological response rates and biochemical response rates of two groups were observed respectively after 3,6,12 months treatment.The drug resistance rates and mutation sites of drug resistance gene were detected after 12 months treatment.Results In lamivudine group,patients infected genotype B HBV had higher virus response rate and serological response rate than patients infected genotype C HBV after 6 and 12 months treatment (P<0.05),while the biochemical response rates had no significant difference between two genotypes (P>0.05).In adefovir dipivoxil group,there were no significant difference of virus response rates,serological response rates and biochemical response rates between patients infected genotype B and genotype C HBV (P>0.05) during treatment.After 12 months treatment,the drug resistance rate of lamivudine group was higher than adefovir dipivoxil group (P<0.05).The main mutation sites of drug resistance gene of lamivudine group and adefovir dipivoxil group were rt108M and rt236T respectively.Conclusion Lamivudine has better antiviral efficacy for genotype B HBV than genotype C HBV,while the antiviral efficacy of adefovir dipivoxil is independent with HBV genotypes.The drug resistance of HBV should be paid attention to during treatment,and the assessment of efficacy should also be strengthened.

hepatitis B virus； genotype； lamivudine； adefovir dipivoxil

廣東省深圳市福田區(qū)公益性科研項(xiàng)目(FTWS081)。

劉鍵，男，本科，主管檢驗(yàn)師，從事醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.20.033

A

1672-9455(2015)20-3055-03

2015-04-10

2015-07-05)