滸苔粉對肉雞免疫機(jī)能及盲腸微生物區(qū)系的影響

王述柏，史雪萍，周傳鳳，朱風(fēng)華，林英庭

（青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東 青島266109）

目前全世界海藻粉產(chǎn)量達(dá)5萬噸，許多國家建有海藻飼料加工廠，將海藻粉作為飼料添加劑廣泛應(yīng)用于畜禽飼養(yǎng)，我國海藻粉的生產(chǎn)及應(yīng)用還處于起步階段[1]。滸苔（Entermorpha prolifera）屬綠藻門石莼目石莼科滸苔屬的藻類植物，具有味道鮮美、營養(yǎng)全面、藻體嫩綠、野生資源豐富、極易生長繁殖等特點(diǎn)，是一種極具開發(fā)價(jià)值的海洋藻類。據(jù)報(bào)道，飼喂?jié)G苔粉可明顯降低肉兔血液低密度脂蛋白膽固醇和甘油三酯的含量[2]，提高生長豬日增重和料重比[3]，提高肉雞胃腸道消化酶活性和飼料利用率[4-5]。目前有關(guān)滸苔粉在畜禽體內(nèi)的作用機(jī)制、適宜添加方式及合理添加水平等有待于進(jìn)一步探討。本試驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上，研究了肉雞飼糧中不同滸苔粉添加水平對其免疫機(jī)能及腸道微生物群落的影響，旨在為新型非常規(guī)飼料資源-滸苔粉在家禽生產(chǎn)中的合理開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)動(dòng)物：400只1日齡健康愛拔益加（AA）肉仔雞（購自青島正大集團(tuán)肉種雞場）。

滸苔粉常規(guī)營養(yǎng)成分含量經(jīng)實(shí)驗(yàn)室測定分別為：粗蛋白9.15%，粗纖維6.02%，粗脂肪0.75%，灰分27.11%，鹽分8.42%，鈣1.46%(均為干物質(zhì)中所占比例)。

疫苗：新支妥（雞新城疫LaSota株+傳支H120二聯(lián)疫苗）、銳必法（雞傳染性囊病耐熱保護(hù)劑活苗）和雞新城疫Ⅳ系（均購自普瑞生物藥業(yè)有限公司）。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 供試雞按完全隨機(jī)原則分為4組。每組5個(gè)重復(fù)，每重復(fù)20只。第1組為對照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧，第2組、第3組和第4組于基礎(chǔ)飼糧中分別添加1%、2%、4%滸苔粉，第2組、第3組和第4組飼糧中食鹽添加量分別減少0.08%、0.17%、0.25%（使各組飼糧食鹽含量均為0.35%）,其他組成成分與對照組相同。預(yù)試期5 d，正試期30天?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 免疫程序 1日齡檢測試驗(yàn)雞新城疫母源抗體效價(jià)平均為5（log2），各組間無顯著差異。試驗(yàn)雞免疫程序見表2。

1.4 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)雞均按肉雞飼養(yǎng)管理規(guī)程常規(guī)飼養(yǎng)，自由采食、飲水，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件完全一致。

表2 試驗(yàn)雞免疫程序

1.5 檢測指標(biāo)及方法

1.5.1 免疫學(xué)指標(biāo) 分別于21日齡、35日齡，自各試驗(yàn)組隨機(jī)取5只雞，每重復(fù)1只，心臟采血，2 mL加抗凝劑，用于檢測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，2～3 mL不加抗凝劑，制備血清，-20℃保存，用于檢測新城疫抗體效價(jià)。

新城疫抗體效價(jià)和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率：新城疫抗體效價(jià)采用HI試驗(yàn)測定，結(jié)果以log2的平均值表示。血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率采用MTT法測定，結(jié)果以刺激指數(shù)（SI值）表示[6]。

免疫器官指數(shù)：各試驗(yàn)組隨機(jī)取5只雞，每重復(fù)1只，21日齡和35日齡屠宰后摘取肉雞免疫器官（胸腺、脾臟、腔上囊）并稱重。計(jì)算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)（g/kg）=免疫器官重量（g）/活重（kg）×100%。

1.5.2 盲腸微生物群落 試驗(yàn)雞于42日齡早飼前，自每組每重復(fù)隨機(jī)取1只雞，頸動(dòng)脈放血處死，迅速剖腹并結(jié)扎盲腸的開口端，滅菌手術(shù)刀切取盲腸，酒精棉球消毒結(jié)扎開口端后，放入已滅菌塑料袋中。在超凈工作臺(tái)上立即稱取0.50 g盲腸內(nèi)容物于已滅菌試管中，加入滅菌稀釋液4.5 mL，加入滅菌玻璃珠，用力振搖使之充分溶解，靜置15min，逐級稀釋至10-3～10-7倍，分別吸取稀釋液10μL，大腸桿菌接種于麥康凱培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h，乳酸桿菌和雙歧桿菌分別接種于MRS培養(yǎng)基和TPY瓊脂培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng)48 h，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)重復(fù)。選擇最適宜的稀釋梯度（以20～300個(gè)菌落為宜），對3種微生物進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)，求其平均值并計(jì)算每克腸道內(nèi)容物所含的細(xì)菌數(shù)。數(shù)據(jù)以每克盲腸內(nèi)容物中菌落（CFU）的對數(shù)值（log CFU/g）表示[7]。

2 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel軟件整理，SPSS11.5軟件One-way ANOVA進(jìn)行方差分析，LSD法進(jìn)行組間差異顯著性檢驗(yàn)。表中數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

3 結(jié)果與分析

3.1 滸苔粉對肉仔雞血清新城疫抗體效價(jià)的影響 肉仔雞血清新城疫抗體效價(jià)見表3。由表3可知，21日齡時(shí)各試驗(yàn)組均顯著高于1組（對照組）（P＜0.05）；35日齡時(shí)2組、3組、4組分別較對照組高6.20%、16.80%、13.40%，3組、4組與對照組差異顯著（P＜0.05）。

表3 肉仔雞血清新城疫抗體效價(jià) （log2）

3.2 滸苔粉對肉仔雞血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

肉仔雞血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率見表4。由表4可知，試驗(yàn)組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均不同程度高于對照組。21日齡，2組、3組和4組顯著高于1組（P＜0.05）；35日齡，2組和3組極顯著高于1組（P＜0.01）；4組顯著高于1組（P＜0.05）。

表4 肉仔雞血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率 （SI值）

3.3 滸苔粉對肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 肉仔雞免疫器官指數(shù)見表5。由表5可知，各試驗(yàn)組肉雞的胸腺指數(shù)和腔上囊指數(shù)與對照組（1組）無顯著差異（P＞0.05）。21日齡，3個(gè)試驗(yàn)組肉仔雞的脾臟指數(shù)均略高于對照組，差異不顯著（P＞0.05）；35日齡，3個(gè)試驗(yàn)組脾臟指數(shù)均顯著高于對照組（P＜0.05)。

表5 肉仔雞免疫器官指數(shù) （g/kg）

3.4 滸苔粉對肉仔雞盲腸微生物區(qū)系的影響肉仔雞盲腸微生物數(shù)量見表6。由表6可知，盲腸大腸桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量各組間差異均不顯著（P＞0.05）。

4 討論

4.1 滸苔粉對肉雞免疫機(jī)能的影響 雞血清抗體效價(jià)和血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率可分別反映其體液免疫和細(xì)胞免疫能力。鐘禮云[8]、徐大倫等[9]研究發(fā)現(xiàn)，滸苔多糖和滸苔的甲醇提取物均能夠明顯促進(jìn)T、B淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)。本試驗(yàn)表明，飼糧中添加滸苔粉可不同程度提高肉仔雞新城疫抗體效價(jià)，提高肉仔雞血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，脾臟指數(shù)亦均高于對照組，說明滸苔粉對肉雞免疫能力有促進(jìn)作用。滸苔粉含有豐富的硫酸多糖，硫酸多糖可通過與淋巴細(xì)胞和吞噬細(xì)胞表面的受體結(jié)合、調(diào)節(jié)環(huán)磷酸腺苷（cAMP）和Ca2+等信使分子的濃度，影響細(xì)胞內(nèi)的信息傳遞過程，誘生酶及多種細(xì)胞因子，激活補(bǔ)體、巨噬細(xì)胞和T、B淋巴細(xì)胞等來增強(qiáng)機(jī)體的免疫[8-10]，可見，滸苔粉提高動(dòng)物免疫機(jī)能的作用機(jī)制與其所含的生物活性成分有關(guān)。

4.2 滸苔粉對肉仔雞腸道微生物的影響 呂琴等[11]報(bào)道，不同種類海藻對大鼠盲腸內(nèi)微生物區(qū)系及腸內(nèi)環(huán)境具有不同的影響。滸苔粉含有多種生物活性成分，主要有滸苔多糖、脂溶性色素、蛋白質(zhì)多肽、甾醇、脂肪酸等[12]。李凌緒等[13]報(bào)道，滸苔的乙醇提取物對甜椒灰霉菌、鏈格孢菌有較強(qiáng)的抑制作用。孫國強(qiáng)等[14]報(bào)道，滸苔粉對奶牛牛糞中大腸桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌菌落數(shù)無顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)組肉仔雞盲腸乳酸桿菌、雙歧桿菌的數(shù)量有提高的趨勢，但與對照組無顯著差異，對肉仔雞盲腸大腸桿菌數(shù)量亦無顯著影響。

4.3 滸苔粉的應(yīng)用前景及存在問題 海藻飼料是一種極有研究價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值和開發(fā)利用潛力的野生飼料資源。滸苔粉作為飼料產(chǎn)品的研究開發(fā)雖已取得了一定的進(jìn)展，但存在很多不足，如因不同種類、不同產(chǎn)地滸苔粉營養(yǎng)成分的較大差異性，導(dǎo)致其在飼料中應(yīng)用方法的不統(tǒng)一；高鹽分滸苔的脫鹽處理技術(shù)；滸苔配套配方技術(shù)的實(shí)際測定等，上述問題有待進(jìn)一步研究。

5 結(jié)論

飼料中添加1%～4%滸苔粉，可顯著提高肉仔雞血清新城疫抗體效價(jià)、血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和脾臟指數(shù)，對盲腸大腸桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量無顯著影響。可見，飼用滸苔粉可提高肉仔雞免疫能力。

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