復(fù)方靈芝口服液對(duì)睡眠剝奪大鼠睡眠的影響

周彥娜，薄世興，陳 瑩，黃厚今

(1 遵義醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室，貴州遵義 563000;2遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院干部保健病房，貴州遵義 563000)

睡眠剝奪(sleep deprivation)指由生活事件或各種病理生理原因如藥物效應(yīng)、慢性疾病、精神疾病或睡眠障礙導(dǎo)致的睡眠減少的狀態(tài)，且睡眠減少可以激發(fā)器官的一些改變，包括免疫功能、認(rèn)知功能、內(nèi)分泌功能等［1］。目前已有實(shí)驗(yàn)報(bào)道，應(yīng)用丙泊酚大鼠背側(cè)中縫核微量注射、五味子凍干粉、針刺可改善睡眠剝奪大鼠的睡眠［2-4］;藥理研究表明，靈芝具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、抗疲勞、降血糖、降血壓、消炎和鎮(zhèn)靜催眠等藥理作用［5］，而關(guān)于靈芝對(duì)睡眠剝奪大鼠睡眠的改善作用目前尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在研究復(fù)方靈芝口服液對(duì)睡眠剝奪大鼠睡眠的影響。

1 材料及方法

1.1 主要試劑、儀器和藥品

復(fù)方靈芝口服液，貴州吉仁堂藥業(yè)有限公司;氯苯丙氨酸(PCPA)，美國Sigma 公司;巴比妥鈉、戊巴比妥鈉，上海紫一試劑廠;注射器、生理鹽水若干。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

健康SPF 級(jí)雌性SD 大鼠，體重180～200g，由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK(渝)2012-0005。光照每12h 明暗交替，自由飲食，開始實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)5d。隨機(jī)分為5 組:空白組(B組)睡眠剝奪組(M 組)、復(fù)方靈芝口服液干預(yù)低、中、高劑量組(GL 組、GM 組、GH 組);GL 組、GM組、GH 組分別給予0.15、0.75、1.5g/(kg·bw)復(fù)方靈芝口服液灌胃，B 組及M 組給予同等體積的去離子水灌胃，每天1 次，連續(xù)灌胃至實(shí)驗(yàn)結(jié)束;灌胃14d 后，除B 組外，其余各組連續(xù)2d 每天腹腔注射氯苯丙氨酸［300mg/(kg·bw)］制造睡眠剝奪模型［6］，B 組給予腹腔注射同等體積的生理鹽水，造模成功后進(jìn)行催眠實(shí)驗(yàn)。

依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)》(2003年版)［7］中關(guān)于改善睡眠保健食品的判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，采用的實(shí)驗(yàn)方法有直接睡眠實(shí)驗(yàn)、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)、延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果得出，戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)、延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)的藥物用量分別為12、25、120mg/(kg·bw)，連續(xù)3d 依次進(jìn)行直接睡眠實(shí)驗(yàn)和戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)、延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)，每天晚上9:00 開始實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中入睡動(dòng)物數(shù)為分類變量資料，采用卡方檢驗(yàn);其余數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用ANOVA 方差分析，統(tǒng)計(jì)軟件選用SPSS18.0 軟件，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 戊巴比妥鈉閾下劑量睡眠情況

給予復(fù)方靈芝口服液后，各組大鼠均未出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象;根據(jù)表1 中數(shù)據(jù)可看出，隨著靈芝劑量增加，各組出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象動(dòng)物數(shù)也增加，但統(tǒng)計(jì)學(xué)未見差異。

表1 戊巴比妥鈉閾下劑量睡眠情況

2.2 延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間

與B 組相比，M 組大鼠的戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間均明顯延長(P＜0.05);與M 組相比，GM 組和GH組較M 組大鼠的戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間明顯延長(P＜0.05)，與GL 組相比，GM 組和GH 組較GL 組睡眠時(shí)間明顯延長(P＜0.05)，且GM 組與GH 組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)(表2)。

表2 延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間(±s)

表2 延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間(±s)

注:a 與B 組相比P＜0.05，b 與M 組相比P＜0.05，b 與GL 組相比P＜0.05，c 與GM 組相比，P＜0.05。

2.3 巴比妥鈉睡眠潛伏期

由表3 可見，經(jīng)方差分析，F(xiàn)=1.133，P=0.353 ＞0.05，各組之間潛伏期無差異。

表3 巴比妥鈉睡眠潛伏期(±s)

表3 巴比妥鈉睡眠潛伏期(±s)

3 討論

復(fù)方靈芝口服液的成分均選自國家公布的藥食兩用中藥，且已有多項(xiàng)試驗(yàn)證實(shí)具有鎮(zhèn)靜催眠的功效［5，8］，是我國具有鎮(zhèn)靜催眠作用的中醫(yī)藥方劑中的常用藥物。檢測(cè)藥物的鎮(zhèn)靜催眠作用評(píng)價(jià)方法是參照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)》 (2003 版)［7］進(jìn)行的，包括延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中二項(xiàng)陽性，且無明顯直接睡眠作用，可判定該受試樣品具有改善睡眠的功能。

3.1 直接睡眠實(shí)驗(yàn)和戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，給予復(fù)方靈芝口服液后，各組大鼠均未出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象，說明直接睡眠實(shí)驗(yàn)陰性。戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)藥物是否具有改善睡眠功能的重要指標(biāo)之一;實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著靈芝劑量增加，各組出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象動(dòng)物數(shù)也增加，但統(tǒng)計(jì)學(xué)未見差異。

3.2 延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)

延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)藥物是否具有改善睡眠功能的重要指標(biāo)之一，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與B 組相比，M 組睡眠時(shí)間明顯延長，說明睡眠剝奪狀態(tài)可以增加大鼠戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間;與M 組和GL 組相比，GM 組、GH 組大鼠的睡眠時(shí)間明顯延長，且GH 組較GM 組明顯延長，說明給予復(fù)方靈芝口服液可明顯延長睡眠剝奪大鼠戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間。

3.3 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)

巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)藥物是否具有改善睡眠功能的重要指標(biāo)之一，實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，各個(gè)組間未見差異性，即該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陰性?？紤]原因是:(1)巴比妥鈉藥物的量在預(yù)試驗(yàn)時(shí)未確定好;(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因?yàn)橹貜?fù)給予戊巴比妥鈉，對(duì)此類藥物產(chǎn)生了耐受性，需要加大劑量?？傊P(guān)于復(fù)方靈芝口服液對(duì)巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠潛伏期尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。

4 結(jié)論

復(fù)方靈芝口服液可延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間，但對(duì)增加睡眠剝奪的入睡動(dòng)物數(shù)和縮短巴比妥鈉誘導(dǎo)的潛伏期無明顯作用，且無直接睡眠作用，說明復(fù)方靈芝口服液可明顯延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間。

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