HCV－RNA載量 抗－HCV及ALT AST聯(lián)合檢測(cè)在丙型肝炎患者診治中的應(yīng)用價(jià)值＊

陳相蕾 何麗萍 王朝富

（綿陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院，四川 綿陽(yáng) 621000）

丙型病毒性肝炎（丙型肝炎）是一種傳染性疾病，是由丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）經(jīng)血液、性、母嬰傳播等途徑導(dǎo)致的。該病的流行性強(qiáng)且較難治愈［1］。世界衛(wèi)生組織調(diào)查顯示，全世界約3%的人口感染了丙型肝炎病毒，約1.7億慢性帶病毒者是發(fā)展成肝硬化和（或）肝癌的高危人群［2］。我國(guó)屬于HCV 的中、高流行區(qū)，感染率約為3.2%［3］。截止目前，我國(guó)累計(jì)HCV 感染者已突破4300萬(wàn)。臨床上有60%～80%的感染者發(fā)展為慢性丙型肝炎，其中約20%患者進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝癌［4］。研究顯示，約有70%以上的丙型肝炎患者可無(wú)任何癥狀，因此需及早對(duì)丙型肝炎做出診斷和治療［5］。對(duì)患者血清中HCV 相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，有助于患者的早期診斷和治療，也成為預(yù)防和控制丙肝傳播的關(guān)鍵［6］。研究表明同時(shí)檢測(cè)HCV－RNA 載量、抗－HCV 和ALT、AST等可有助于提高丙型肝炎檢 出率及肝臟損傷程度的判斷，為臨床治療提供有利幫助［7］。因此，本文選取160例丙型肝炎患者，探討HCV－RNA 載量、抗－HCV及ALT、AST 聯(lián)合檢測(cè)在丙型肝炎患者診斷治療中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年10月至2014年9月于本院進(jìn)行醫(yī)治的160例丙型肝炎患者，診斷均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］。排除甲、乙、丁、戊肝感染，肝臟腫瘤及非特異性免疫原性肝病。其中男87 例，女73 例，年齡22～87歲，平均（39.4±12.5）歲?？崭瓜拢』颊? ml靜脈血，使用帶分離膠的專用真空采血管分離血清，3000r／min，離心10 min。應(yīng)立即將血清采集分離，采血6h內(nèi)必須分離、收集血清，并轉(zhuǎn)移至一次性使用的無(wú)RN A 酶的無(wú)菌微量離心管中，－80℃冰箱保存，標(biāo)本運(yùn)輸應(yīng)于冷凍條件下進(jìn)行。

1.2 試劑與方法

1.2.1 HCV－RNA 檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HCV－RNA 載量。采用美國(guó)Bio Rad CFX96熒光定量PCR 儀，試劑盒由上?？迫A生物工程股份有限公司提供。由PCR 實(shí)驗(yàn)室人員 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，每次實(shí)驗(yàn)中均設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照、質(zhì)控血清以及標(biāo)準(zhǔn)品（1.5×104～1.5×107），檢測(cè)下限為小于1×103copies／ml。

1.2.2 抗－HCV 檢測(cè)采用ELISA 法檢測(cè)抗－HAC滴度。采用伯樂(lè)酶標(biāo)儀，試劑由北京新興四寰生物技術(shù)有限公司提供。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，每次操作時(shí)，均需設(shè)空白對(duì)照1孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，質(zhì)控血清1 孔，讀取各孔的OD 值。S／CO≥1 判定為抗－HAC陽(yáng)性。

1.2.3 ALT、AST 檢測(cè) 采用酶速率法檢測(cè)ALT、AST。采用AU－5400全自動(dòng)生化分析儀，試劑由日本OLYMPUS公司提供。ALT 濃度＞40U／L 為異常，AST＞0～38U／L為異常。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本文研究數(shù)據(jù)均采取SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料表示采?。ǎ?，檢驗(yàn)采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05，表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCV－RNA 載量與抗－HAC 之間的關(guān)系 160例丙型肝炎患者血清中，HCV－RNA 載量與抗－HAC滴度檢測(cè)均為陽(yáng)性者129例（80.6%）；HCV－RNA 載量陰性，抗－HAC陽(yáng)性者19例；HCV－RNA 載量陽(yáng)性，抗－HAC陰性者12例，見(jiàn)表1。

分析141 例HCV－RNA 載量檢測(cè)陽(yáng)性患者，對(duì)HCV－RNA 載量對(duì)數(shù)值與抗－HAC滴度值進(jìn)行相關(guān)性分析，HCV－RNA 載量與抗－HAC 滴度無(wú)顯著相關(guān)性（r＝0.405，P＞0.05），見(jiàn)圖1。

2.2 HCV－RNA 載量與ALT 之間的關(guān)系 分析141例HCV－RNA載量檢測(cè)陽(yáng)性患者，根據(jù)HCV－RNA載量大小分為103～104，104～105，105～106，106～107，＞107copies／ml五組。其中ALT 異常為105例，異常率74.5%，ALT 異常率與HCV－RNA 載量呈正相關(guān)，詳見(jiàn)下表2。對(duì)HCV－RNA 載量對(duì)數(shù)值與ALT水平進(jìn)行相關(guān)性分析，ALT 水平與HCV－RNA 載量呈正相關(guān)（r＝0.87，P＜0.05），見(jiàn)圖2。

表1 HCV－RNA載量與抗－HAC檢測(cè)結(jié)果Table 1 The result of detection of HCV－RNA capacity and anti－HCV

圖1 HCV－RNA載量與抗－HAC相關(guān)性分析Figure 1 Correlation analysis of HCV－RNA capacity and anti－HCV

表2 HCV－RNA載量與ALT檢測(cè)結(jié)果Table 2 The result of detection of HCV－RNA capacity and ALT

圖2 HCV－RNA載量與ALT相關(guān)性分析Figure 2 Correlation analysis of HCV－RNA capacity and ALT

2.3 HCV－RNA 載量與AST 之間的關(guān)系 分析141例HCV－RNA 載量檢測(cè)陽(yáng)性患者，根據(jù)HCV－RNA載量大小分為103～104，104～105，105～106，106～107，＞107copies／ml五組。其中AST 異常為105例，異常率74.5%，AST 異常率與HCV－RNA 載量呈正相關(guān)，詳見(jiàn)下表3。對(duì)HCV－RNA 載量對(duì)數(shù)值與AST水平進(jìn)行相關(guān)性分析，AST 水平與HCV－RNA 載量呈正相關(guān)（r＝0.91，P＜0.05），見(jiàn)圖3。

表3 HCV－RNA載量與AST檢測(cè)結(jié)果Table 2 The result of detection of HCV－RNA capacity and AST

圖3 HCV－RNA載量與AST相關(guān)性分析Figure 3 Correlation analysis of HCV－RNA capacity and AST

3 討論

丙肝是由HCV 引起的病毒性傳染病，是一種主要經(jīng)血液傳播的感染性疾 病，其發(fā)病率僅次于乙型病毒性肝炎，HCV 是僅次于乙型肝炎病毒（HBV）導(dǎo) 致肝癌的主要危險(xiǎn)因素，感染HCV 對(duì)人們的健康造成很大的危害［9］。大多數(shù)丙肝患者的癥狀不明顯，往往不容易被發(fā)現(xiàn)，而目前尚無(wú)有效疫苗及有效治療方法。因此，HCV 感染的早期準(zhǔn)確診斷就是防控丙肝最有效的手段。

目前，臨床診斷HCV 感染主要是檢測(cè)HCVRNA 和抗－HCV，抗－HCV 間接反映HCV 的感染和既往感染。HCV－RNA 是診斷HCV 病毒血癥的“金標(biāo)準(zhǔn)”［10］。單一靠抗－HCV 滴度來(lái)診斷HCV 感染容易造成HCV 的漏診，漏診HCV 病毒感染不僅會(huì)耽誤患者的就診，而且會(huì)增加傳播他人的可能性。如今常規(guī)輸血全套里僅有抗－HCV 的檢測(cè)，而沒(méi)有HCVRNA 載量檢測(cè)，如此不能完全保證輸血后不會(huì)感染HCV［11］。本研究結(jié)果顯示HCV－RNA 載量與抗－HAC 滴度無(wú)顯著相關(guān)性。HCV 感染后血清中產(chǎn)生HCV 抗體的平均時(shí)間即窗口期為82天［12］。因此，早期感染者易漏診；可長(zhǎng)期存在，不能區(qū)別既往感染和現(xiàn)癥感染。受機(jī)體免疫水平影響、使用免疫抑制劑治療的患者或患其它嚴(yán)重疾病導(dǎo)致體內(nèi)免疫低下的病人，均可致體內(nèi)抗體無(wú)法檢出。因此，臨床上必須同時(shí)檢測(cè)HCV－RNA 和抗－HCV 來(lái)診斷HCV 病毒感染，同時(shí)檢測(cè)的準(zhǔn)確率也比單獨(dú)抗－HCV 檢測(cè)高很多。

而僅檢測(cè)HCV－RNA 和抗－HCV 仍有許多局限。ALT、AST 的檢測(cè)可以很好地反映肝細(xì)胞的損傷及病變程度［13］。因此，再同時(shí)檢測(cè)ALT、AST，檢測(cè)結(jié)果將更加精確。當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，首先檢出ALT 異常［14］，而ALT 水平不能很準(zhǔn)確的反映肝細(xì)胞受損的程度［15］，且ALT 水平與丙型肝炎患者病情不完全正相關(guān)。當(dāng)肝臟損傷后，AST 被大量釋放到血清中，它能夠直接反映肝細(xì)胞損傷程度。AST 與ALT 對(duì)肝損傷很敏感，其水平隨著HCV－RNA 載量的增高，異常率也隨之增高［16］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)ALT 水平及異常率與HCV－RNA 載量呈正相關(guān)；AST 水平及異常率與HCV－RNA 載量呈正相關(guān)，與上述結(jié)論一致，即ALT、AST 的檢測(cè)可以很好地反映肝細(xì)胞的損傷程度和病變程度，能夠進(jìn)一步增加檢測(cè)結(jié)果的正確率。

4 結(jié)論

同時(shí)檢測(cè)HCV－RNA 定量、抗－HCV 抗體滴度可提高丙型肝炎的檢出率，檢測(cè)ALT、AST 可一定程度評(píng)估肝臟受損狀況，為丙型肝炎的診斷治療提供臨床依據(jù)，HCV－RNA 載量、抗－HCV 及ALT、AST 聯(lián)合檢測(cè)不僅能夠增加丙型肝炎患者診斷的準(zhǔn)確性，更能夠?yàn)樗麄兗霸缰委熖峁┲匾呐R床價(jià)值。

［1］張菊香.丙型肝炎病毒血清學(xué)檢測(cè)在臨床中的應(yīng)用［J］.西部醫(yī)學(xué)，2011，23（06）：1146，1149.

［2］付萬(wàn)智，楊麗，曾韜.派羅欣聯(lián)合利巴韋林治療慢性丙型肝炎的療效分析［J］.西部醫(yī)學(xué)，2012，24（12）：2345－2346.

［3］Chen SL，Morgan TR.The natural history of hepatitis C virus（HCV）infection［J］.Int J Med Sci，2006，3（2）：47－52.

［4］丙型肝炎患者HCV RNA 載量與ALT、TBil及抗HCV IgG 的相關(guān)性［J］.江蘇醫(yī)藥，2014，40（17）：2013－2015.

［5］陳馨.血清HCV－RNA、抗－HCV抗體及肝臟酶譜聯(lián)合診斷治療丙型肝炎的臨床意義［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（7）：903－904.

［6］劉賢華，白曉東，劉元明，等.丙型肝炎病毒核酸定量和抗－HCV血清學(xué)分析的診斷價(jià)值［J］.武警醫(yī)學(xué)，2013，24（6）：488－490.

［7］黃秀瓊，吳英.110例丙肝患者HCV－RNA 載量及抗－HCV 與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性研究［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（15）：1809－1810.

［8］尚慧鋒.丙型肝炎患者血清HCV－RN A 載量與抗－HCV 及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶聯(lián)合檢測(cè)的意義［J］.臨床醫(yī)藥實(shí)踐，2012，21（10）：757－759.

［9］Kirk GD，Bah E，Montesano R.Molecular Epidemiology of human liver cancer：insights and prevention from The Gambia，West Africa［J］.Carcinogenesis，2006，27（10）：2070－2082.

［10］楊東亮.丙型肝炎的病毒學(xué)檢測(cè)指標(biāo)及其臨床意義［J］.中華肝臟病雜志，2004，12（2）：104－104.

［11］呂莉.丙型病毒性肝炎檢測(cè)在加強(qiáng)輸血管路的應(yīng)用［J］.醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2012，25（6）：726－727.

［12］史玉嶺.丙型肝炎核心抗原檢測(cè)在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用價(jià)值［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，27（1）：47－48.

［13］袁世偉，鄭衛(wèi)東.肝臟酶譜檢測(cè)在診斷肝病中的應(yīng)用及其臨床意義［J］.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11（23）：1884－1885.

［14］Zechini B，Pasquazzi C，Aceti A.Correltion of serum aminotransferases with HCV－RNA levels and histological findings in patients with chronic hepatitis C：the role of serum aspartate transaminasein the evaluation of disease progression［J］.Eur J Gastroenterol Hepatol，2004，16（9）：891－896.

［15］黃建平，胡建華，劉曉暉，等.肝膽疾病患者血清肝臟酶譜變化及分析［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，28（4）：416－418.

［16］丁柳，周易，宋興勃，等.HCV－RNA 載量與肝臟組織損傷的關(guān)系［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，3（3）：481－483.