真菌及幽門螺桿菌感染在胃癌檢出中的病理研究

趙惠明

(淮南朝陽醫(yī)院病理科，安徽 淮南 232007)

真菌及幽門螺桿菌感染在胃癌檢出中的病理研究

趙惠明

(淮南朝陽醫(yī)院病理科，安徽 淮南 232007)

胃癌已經(jīng)成為世界上發(fā)病率和病死率較高的惡性腫瘤之一，研究指出，幽門螺桿菌和真菌與胃癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后相關(guān)[1]。1994年國家癌癥研究中心也將幽門螺桿菌作為胃癌的Ⅰ類致癌因子，并認(rèn)為真菌和胃癌的發(fā)生有密切關(guān)系[2]。但是到目前為止，真菌、幽門螺桿菌感染和胃癌的確切發(fā)病機(jī)制和確切的關(guān)系尚不明確，胃癌侵襲轉(zhuǎn)移和影響預(yù)后的機(jī)制也不完全清楚。本研究通過觀察真菌、幽門螺桿菌感染在胃癌中的檢出率及與胃癌的相關(guān)性，以期為臨床的診治提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料回顧性分析2010年1月至2013年1月淮南朝陽醫(yī)院診治的45例胃癌患者(胃癌組)和45例慢性萎縮性胃炎患者(慢性萎縮性胃炎組)的臨床資料，胃癌組中男31例、女14例，年齡34～78歲，平均(57±7)歲；病程6個(gè)月至5年，平均(2.5±1.6)年。慢性萎縮性胃炎組中男30例、女15例，年齡35～80歲，平均(56±6)歲；病程7個(gè)月至5.5年，平均(2.6±1.6)年。兩組患者的一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。胃癌和慢性萎縮性胃炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)均經(jīng)過胃鏡和病理檢查確診。

1.2方法患者均由同一名副主任醫(yī)師進(jìn)行胃鏡檢查，并由同一名病理高年資醫(yī)師對病變組織進(jìn)行病理切片，常規(guī)石蠟切片打包，選用深圳金橋有限公司提供的姬姆薩染色試劑盒(上海江萊生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：09071354)進(jìn)行常規(guī)蘇木伊紅染色。然后進(jìn)行引物設(shè)計(jì)和合成，結(jié)合文獻(xiàn)[2]報(bào)道，核糖體RNA基因擴(kuò)增引物序列為5′-CTAGACTAACCCTCCA-3′，標(biāo)簽單抗序列為5′-ACCTACGCAGTTACGT-3′。而對于真菌則由同一名副主任醫(yī)師進(jìn)行，在孢子顯微鏡下發(fā)現(xiàn)真菌，然后進(jìn)行特殊染色石蠟打包，在4 μm切片上染色，應(yīng)用離心機(jī)(長沙維爾康湘鷹離心機(jī)有限公司生產(chǎn)，型號為DL4-TM)，以離心半徑50 cm，1200 r/min離心3 s后添加 1 mL 二甲苯中脫蠟，再次離心5 min，棄去上清液，將沉淀物用1 mL無水乙醇進(jìn)行洗滌后進(jìn)行干燥處理，按照DNA試劑盒說明書進(jìn)行規(guī)范操作。最后進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增，選擇2 μm LDNA 模板，25 μL酶混合液和10 μL引物，初始變性5 min、 94 ℃下進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，30 s后退火，然后在58 ℃循環(huán)30 s，再在72 ℃下延長30 s后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳試驗(yàn)得出結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

胃癌組中，真菌檢出26例，檢出率為57.8%，幽門螺桿菌檢出34例，檢出率為75.6%；慢性萎縮性胃炎組中，真菌檢出0例，檢出率為0，幽門螺桿菌檢出12例，檢出率為26.7%。胃癌組真菌檢出率、幽門螺桿菌檢出率高于慢性萎縮性胃炎組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=36.562，21.522，P<0.05)。

3討論

研究表明，在幽門螺桿菌感染時(shí)會出現(xiàn)基因的變異，而這些基因可以引起胃癌相關(guān)基因的變異，原癌基因Ras-21在腸化生、異型增生的上皮細(xì)胞上均有陽性表達(dá)，提示其與胃癌細(xì)胞的增長和增殖密切相關(guān)[3]。有研究[4-5]指出，H-ras基因和胃癌關(guān)系較為緊密，其所編碼的蛋白質(zhì)Ras、p21等有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化功能，其異常表達(dá)和惡性腫瘤的發(fā)生起重要作用，且該基因會持續(xù)性升高，與胃黏膜癌變的過程和發(fā)展密切相關(guān)，是胃癌發(fā)生早期基因之一，因?yàn)槠鋵?xì)胞有絲分裂能力起調(diào)節(jié)作用，其激活在癌癥病變的早期階段，所以，基因檢出情況是確診的理想方法之一。對于判斷是否出現(xiàn)胃癌有重要的臨床作用。雖然目前對于幽門螺桿菌誘發(fā)胃癌的確切發(fā)病機(jī)制不明確，但結(jié)合相關(guān)的報(bào)道[6-7]認(rèn)為與以下幾點(diǎn)有關(guān)。①幽門螺桿菌感染后胃黏膜處于增殖狀態(tài)，DNA的合成和分裂活躍，DNA錯(cuò)誤復(fù)制概率增加。②高度增殖時(shí)DNA修復(fù)能力下降，而增生活躍容易受各種致癌因子侵犯，反復(fù)損傷后造成染色體基因結(jié)構(gòu)和功能異常變化，這為惡化提供了有利的條件。③幽門螺桿菌感染后胃黏膜屏障破壞，原因是腔內(nèi)致癌物在接近胃上皮細(xì)胞不斷繁殖、增生后逐漸累積，演變?yōu)槁圆∽?。在?xì)胞釋放的氧自由基的作用下，造成細(xì)胞DAN斷裂、易位、清除，死亡，引起胞質(zhì)核轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的異常，改變了抑制基因和抑制蛋白的活性。

本研究結(jié)果顯示，幽門螺桿菌檢出率為75.6%，比國外研究結(jié)果 61%的檢出率[8]稍高，這原因可能與檢查儀器情況、參數(shù)設(shè)置等有關(guān)，且國外群體的疾病和國內(nèi)略有不同，但均表明在胃癌患者中幽門螺桿菌檢出率高，這也提示在臨床上對于幽門螺桿菌要及時(shí)清除，以免誘發(fā)癌變的可能。

有研究[9]指出，潰瘍病是胃內(nèi)某些真菌感染的基礎(chǔ)病因之一，這是由于潰瘍病時(shí)胃黏膜屏障功能損害，使真菌易于侵入消化道并寄生在潰瘍病變處，且對于長期使用質(zhì)子泵拮抗劑患者來說，胃內(nèi)的pH值會發(fā)生很大的變化，而這些均會造成真菌在胃內(nèi)的大量繁殖和定植，而本研究結(jié)果顯示，真菌在胃癌的檢出率為57.8%，而在慢性萎縮性胃炎患者中則為0。這也再次證實(shí)真菌在胃癌患者中的大量繁殖。

腫瘤發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵是微血管和淋巴管的生成。幽門螺桿菌作為一種對環(huán)境的抵抗力強(qiáng)，潛伏性佳，長期定居在組織中，不斷對組織造成損失，引起慢性炎癥，而慢性炎癥有又會促使真菌的分解和增生，進(jìn)一步刺激炎性介質(zhì)刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生，從而使組織中的微血管密度增加，而真菌是一種繁殖能力很強(qiáng)且多樣的病原菌，主要依靠各種有性或無性孢子進(jìn)行繁殖，這樣就加劇炎性物質(zhì)的增殖，加上腫瘤的病變擠壓微血管，造成局部的缺氧和低氧，而低氧會造成血管通透性增加，促進(jìn)血漿外滲[10]。進(jìn)一步促使細(xì)胞衰落凋亡。而一個(gè)腫瘤細(xì)胞死亡意味新生血管生長的又一個(gè)信號[11]。如此循環(huán)后造成感染的進(jìn)一步加重，真菌的大量繁殖，而胃癌則進(jìn)一步演變甚至轉(zhuǎn)移。所以在治療上要從多個(gè)方面進(jìn)行綜合治療。這與文獻(xiàn)報(bào)道的雙重感染對胃癌的病理性影響大有關(guān)[12]。有研究指出，真菌和幽門螺桿菌會相互作用，會由單一的感染逐漸變成混合感染，增加了胃癌的惡變病程[13]。在作用于胃癌上會由開始的單一的感染病原菌后合并成雙重作用加劇胃癌的病理變化。

有研究通過對胃癌、胃潰瘍中的真菌和幽門螺桿菌的比較后得出，胃潰瘍中的檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于胃癌中的檢出率[14]，本研究結(jié)果與之一致，但是其對結(jié)果進(jìn)行了相關(guān)的染色處理且在結(jié)果中進(jìn)行了有效的分析，限于本次研究病例數(shù)量少、設(shè)備有限等因素，未進(jìn)行相關(guān)的分析，這就造成本研究的嚴(yán)謹(jǐn)性欠佳，這也是值得日后繼續(xù)深入研究的內(nèi)容之一，只有以循證醫(yī)學(xué)角度進(jìn)行分析才能對臨床診治提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]陽長清.腫瘤標(biāo)志物在霉菌性胃潰瘍及潰瘍型胃癌鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2009,30(2):116-119.

[2]孟昭義,康復(fù)笑,何長青,等.吲哚菁綠,亞甲藍(lán)聯(lián)合染色標(biāo)記胃癌前哨淋巴結(jié)臨床分析:附32例報(bào)道[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2010,8(28):22-24.

[3]Zhang C,Yamada N,Wu YL,etal.Helicobacter pylori infection,glandular atrophy and intestinal metaplasia in superficial gastritis,gastric erosion,erosive gastritis,gastric ulcer and early gastric cancer[J].World J Gastroenterol,2010,11(6):791-796.

[4]張東生,李東海,王平凡,等.霉菌、幽門螺桿菌及雙菌種感染在胃潰瘍、胃癌中檢出的意義[J].微生物學(xué)雜志,2013,33(2):48-53.

[5]李彩虹.PGC、PTEN、HER-2、CEA及CA72-4在霉菌性胃潰瘍和潰瘍型胃腺癌中的對比研究[D].長沙：中南大學(xué),2011.

[6]馬俊華,汪必成.胃癌中細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白27基因蛋白表達(dá)、基因突變及其與啟動子甲基化的關(guān)系[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2013,30(5):1048-1050.

[7]趙永勛,李玉民,關(guān)泉林，等.幽門螺桿菌感染對胃癌組織Runx3、iNOS蛋白表達(dá)及患者生存率的影響[J].中國老年學(xué)雜志,2012,32(20):4396-4398.

[8]Trivedi H,Turkbey B,Rastinehad AR,etal.Use of a patient-specific MRI based prostate mold for validation of multi-parametric MRI in the localization of prostate cancer[J].Urology,2013,4(13):5959-5961.

[9]劉改芳,林三仁.幽門螺桿菌感染與胃癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志,2013,23(9):573-574.

[10]王艦,李勝軍,趙成海，等.幽門螺桿菌感染胃癌組織MMP-2和MMP-9表達(dá)及其對胃癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響[J].世界華人消化雜志,2010,15(7):755-757.

[11]夏華向,張貴水.細(xì)胞凋亡與增殖在幽門螺桿菌感染致胃癌中的重要作用[J].世界華人消化雜志,2010,7(9):740-742.

[12]楊艷麗,胡建國,司岑,等.EBV、Hp感染與胃癌的關(guān)系及相互作用研究[J].天津醫(yī)藥,2013,41(11):1048-1051.

[13]郭曉林,姜雅秋,王丹,等.幽門螺桿菌感染與C-myc基因和P53基因表達(dá)與胃癌的相關(guān)性研究[J].中國老年學(xué)雜志,2010,27(1):56-58.

[14]Lanzavecchia S,Bellon PL,Lupetti P,etal.Three-dimensional reconstruction of metal replicas of the Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin[J].J Struct Biol,2011,121(1):9-18.

摘要：目的探討真菌、幽門螺桿菌感染在胃癌檢出中的病理情況。方法回顧性分析2010年1月至2013年1月淮南朝陽醫(yī)院診治的胃癌患者(胃癌組)和慢性萎縮性胃炎患者(慢性萎縮性胃炎組)的臨床資料,各45例，均采用常規(guī)石蠟切片、蘇木精-伊紅染色、特殊染色，免疫組織化學(xué)染色和聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增方法對標(biāo)本進(jìn)行研究，觀察真菌和幽門螺桿菌檢出情況。結(jié)果胃癌組中，真菌檢出26例，占57.8%，幽門螺桿菌檢出34例，占75.6%；慢性萎縮性胃炎組中，真菌檢出0例，幽門螺桿菌檢出12例，占26.7%。兩組幽門螺桿菌檢出率和真菌檢出率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論真菌、幽門螺桿菌感染均是誘發(fā)胃癌的致病菌。

關(guān)鍵詞：胃癌；真菌；幽門螺桿菌感染；病理診斷

Pathological Studies in Gastric Cancer and Mould and Helicobacter Pylori Infection DetectionZHAOHui-ming.(DepartmentofPathology,ChaoyangHospitalofHuainan,Huainan232007,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the pathology of detection of the mould,Helicobacter pylori infection in gastric cancer.MethodsRetrospective analysis of clinical data of 45 cases of gastric cancer and 45 cases of chronic atrophic gastritis from Huainan Chaoyang Hospital during Jan.2010 and Jan.2013 was done,the specimen were all studied by paraffin sections,hematoxylin eosin staining,special staining,immunohistochemistry and polymerase chain reaction method,to observe the detection situation of the mould and Helicobacter pylori.ResuttsIn the gastric cancer group,the number of detected mould was 26 cases, the ratio was 57.8%,the number of detected Helicobacter pylori was 34 cases,the ratio was 75.6%;in chronic atrophic gastritis,the number of detected mould was 0,the number of detected Helicobacter pylori was 12 cases,the ratio was 26.7%.The Helicobacter pylori detection and mold detection rate of the two groups were statistically significantly different(P<0.05).ConclusionMould,Helicobacter pylori infection are both gastric cancer inducing pathogens.

Key words：Gastric cancer; Mould; Helicobacter pylori infection; Pathological diagnosis

收稿日期：2014-09-12修回日期：2014-12-19編輯：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.16.066

中圖分類號：R447

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)16-3056-03