反相高效液相色譜法測定胃靈顆粒中芍藥苷含量

王 建，劉金花，時亞杰

(1. 山東省濟(jì)寧市食品藥品檢測中心，山東 濟(jì)寧 272025; 2. 山東省濟(jì)寧市精神病防治院，山東 濟(jì)寧 272051)

胃靈顆粒由海螵蛸、白芍(炒)、白術(shù)(炒)、延胡索、甘草等中藥組方，具有健胃和中、制酸止痛的功效，用于治療胃炎、胃及十二指腸潰瘍等疾病[1]。臨床試驗(yàn)表明，胃靈顆粒對于胃脘痛、胃癌前病變、消化性潰瘍具有良好的治療作用。方中白芍具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽之功效，但市售品多因硫熏導(dǎo)致有效成分分解，嚴(yán)重影響飲片質(zhì)量，需對其質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格控制。為進(jìn)一步提高制劑質(zhì)量，確保療效，在原有標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，依據(jù)生產(chǎn)工藝參數(shù)，本試驗(yàn)中建立了有效控制白芍質(zhì)量的檢測指標(biāo)，對提取方法、色譜條件進(jìn)行了篩選，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200LC 型高效液相色譜儀(G1314C VWD SL 型紫外檢測器，Chemstation 色譜數(shù)據(jù)工作站);Mettler XS205 型電子分析天平。芍藥苷對照品( 中國藥品生物制品檢定所，批號為110736 -201035，含量以96.5%計(jì));乙腈、磷酸為色譜純，其他有機(jī)試劑均為分析純，重蒸餾水。胃靈顆粒(規(guī)格均為5 g/袋，A廠家，批號為110701;B 廠家，批號為110904;C 廠家，批號為120101)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Thermo Hypersil GOLD C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(15 ∶85);流速:1.0 mL/min;檢測波長:230 nm，進(jìn)樣量:5 μL;柱溫:25 ℃。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于2 000，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

取本品研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱取芍藥苷對照品8.52 mg，置100 mL 容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL含81.11 μg 的溶液，作為對照品溶液。按處方工藝制備白芍藥材的對照樣品，根據(jù)供試品溶液的制備方法制備對照藥材溶液。按處方量及工藝制備方法制備不含白芍藥材的陰性樣品，根據(jù)供試品溶液的制備方法，即得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別精密吸取對照品溶液2，4，6，8，10，12 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，以峰面積( Y)為縱坐標(biāo)、芍藥苷進(jìn)樣量( X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=755.12 X+11.97，r=0.999 5(n=6)。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0.164 4 ～0.986 6 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一芍藥苷對照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5 次，每次5 μL，測定峰面積。結(jié)果的RSD 為0.3%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液(批號為110701)，分別在制備后0，2，4，8，10，12 h 進(jìn)樣5 μL，記錄峰面積。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD 為0.6%(n=5)，表明供試品溶液在12 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同批號(110701)樣品5 份，每份1 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果樣品平均含量5.269 4 mg/g，RSD 為0.9% ( n=5)，表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品6 份，分別加入芍藥苷對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，測定芍藥苷含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果( n=6)

2.4 樣品含量測定

取3 批(批號為110701，110904，120101)樣品，每批3 份，均按2.2.1 項(xiàng)下同法操作，制備供試品溶液，測定芍藥苷的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果( n=3)

3 討論

[2 -5]，以乙腈-0.1%磷酸溶液(15 ∶85) 為流動相，檢測波長選230 nm，結(jié)果芍藥苷峰與相鄰峰分離良好，峰形對稱，保留時間短且陰性樣品無干擾。對樣品提取時間、提取方法進(jìn)行了比較，結(jié)果超聲處理與加熱回流提取相比，兩者含量相當(dāng)，故選用超聲處理作為提取方法。還對提取時間(15，30，60 min)進(jìn)行了考察，結(jié)果超聲處理30 min 時芍藥苷基本被提取完全，故選擇提取時間為30 min。提取溶劑曾采用70%甲醇、稀乙醇，二者測得的含量一致，但稀乙醇提取的溶液黏性較大，為了更好地保護(hù)色譜儀，故選用70%甲醇作溶劑。從測定結(jié)果可見，由于胃靈顆粒原標(biāo)準(zhǔn)中無白芍含量測定項(xiàng)，因此得出的結(jié)果含量相差較大。采用高效液相色譜法測定其含量，方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可有效控制該藥品的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn):

[1] WS3-B-1177 -92，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第六冊)[S].

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