γ-亞麻酸甲酯納米乳的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)

郭義明，孫 錄，戴維群，李 忻

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130033)

γ-亞麻酸(全順式6，9，12 - 十八碳三烯酸)具有調(diào)節(jié)血脂、抗血栓、抗脂質(zhì)過(guò)氧化以及增強(qiáng)人體免疫功能等重要的生理活性，直接參與體內(nèi)一系列代謝和生理合成過(guò)程，有獨(dú)特的醫(yī)療和保健作用[1-2]，因此通常被制成高純度的γ-亞麻酸甲酯(Gamma-linolenic acid methyl ester，GLA)及適宜的制劑以保存和應(yīng)用。目前，臨床使用的含γ-亞麻酸制劑以口服的月見草油膠丸、月見草油乳、月見草油軟膠囊為主，其中γ-亞麻酸含量低，需要?jiǎng)┝勘容^大，生物利用度低。納米乳是膠體分散系統(tǒng)，由油相、水相和表面活性劑組成的熱力學(xué)穩(wěn)定體系，能提高難溶藥物的溶解度，粒徑小，能促進(jìn)藥物吸收，提高藥物生物利用度。隨著納米乳化技術(shù)日趨成熟，納米乳在藥學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用日益廣泛[3-5]。筆者以γ-亞麻酸甲酯作油相，蒸餾水作水相、聚山梨酯80 為表面活性劑、聚乙二醇400 為助表面活性劑制備了水包油型γ-亞麻酸甲酯納米乳，分析了影響納米乳粒徑的因素，并對(duì)其結(jié)構(gòu)、形態(tài)、分散性和穩(wěn)定性等進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期尋找γ-亞麻酸甲酯的一種安全、穩(wěn)定、高效的用藥系統(tǒng)，為研究γ-亞麻酸注射劑提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

FA25 型分散乳化機(jī)(上海弗魯克機(jī)電設(shè)備有限公司);Zetasizer3000HSA 型激光粒度分析儀(英國(guó)MALVERN 公司);Hitachi8100IV 型透射電子顯微鏡(TEM，日本Hitachi 公司);FTIR8400S 型紅外光譜儀(IR，日本SHIMADZU 公司);HP5890 -II 型氣相色譜儀(美國(guó)HP 公司)。γ-亞麻酸甲酯(參照文獻(xiàn)[5]合成，含量98.7%);聚山梨酯80(Tween 80，上海申宇醫(yī)藥化工有限公司);聚乙二醇400(PEG400，上海三浦化學(xué)試劑公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備[6]

以聚山梨酯80 作表面活性劑，PEG400 作助表面活性劑，γ-亞麻酸甲酯為油相，蒸餾水為水相，將聚山梨酯80 與γ-亞麻酸甲酯分別按質(zhì)量比1 ∶10，2 ∶10，3 ∶10，4 ∶10，5 ∶10，6 ∶10，7 ∶10，8 ∶10，9 ∶10 混合，并加入PEG400(聚山梨酯80 與PEG400 質(zhì)量比為5 ∶1)混勻，室溫下將混合液加入到分散乳化機(jī)攪拌下的水相中，水相逐漸變成乳白色，繼續(xù)攪拌20 min 后變成透明的水包油型γ-亞麻酸甲酯納米乳，用激光粒度分析儀測(cè)定粒徑，結(jié)果見圖1。聚山梨酯80 的含量對(duì)納米乳的粒徑有顯著影響，當(dāng)γ-亞麻酸甲酯在乳液中含量為25%，聚山梨酯80 與γ-亞麻酸甲酯重量比為5 ∶10 時(shí)，得到了粒徑小于100 nm 的γ-亞麻酸甲酯納米乳。

圖1 聚山梨酯80 對(duì)納米乳粒徑的影響

2.2 結(jié)構(gòu)分析

在4 000 ～400 cm-1波長(zhǎng)范圍內(nèi)，用溴化鉀壓片法測(cè)定γ-亞麻酸甲酯和γ-亞麻酸甲酯納米乳的紅外光譜，結(jié)果見圖2。γ-亞麻酸甲酯的紅外光譜(IR)圖2 顯示，在3 500 ～3 200 cm-1范圍內(nèi)的強(qiáng)峰屬于羥基和分子內(nèi)氫鍵結(jié)合峰;在1 740 cm-1的特征強(qiáng)吸收屬于酯羰基官能團(tuán);在1 170 cm-1處的吸收峰屬于羰基甲酯官能團(tuán);在2 800 ～3 000 cm-1的3 個(gè)尖峰和1 500 cm-1附近的尖銳峰帶是由于烴鏈的C—H 伸展產(chǎn)生的。紅外光譜在715 cm-1和1 620 cm-1處的特征吸收帶表明了雙鍵的存在。上述特征吸收峰在γ -亞麻酸甲酯納米乳的IR 圖2 中均能觀察到。在1 245 cm-1和940 cm-1處的吸收峰是由于聚山梨酯80 存在而產(chǎn)生的，可歸于C—O—C 的對(duì)稱帶和不對(duì)稱帶引起的伸縮震動(dòng)。IR圖譜證明，乳化后γ-亞麻酸甲酯的特征吸收峰沒(méi)有發(fā)生任何移動(dòng)，表明γ-亞麻酸甲酯沒(méi)有發(fā)生化學(xué)結(jié)構(gòu)變化。

圖2 紅外光譜圖

2.3 形態(tài)觀察

將γ-亞麻酸甲酯納米乳室溫下放置6 個(gè)月，用透射電子顯微鏡觀察γ-亞麻酸甲酯納米乳的形貌，結(jié)果見圖3。可見，納米乳液滴呈球形，平均直徑約為60 nm。

圖3 γ-亞麻酸甲酯納米乳透射電鏡圖

2.4 穩(wěn)定性

將γ-亞麻酸甲酯納米乳室溫下放置6 個(gè)月，外觀、粒徑均無(wú)明顯變化，置離心機(jī)中，以10 000 r/min 的速度離心30 min 進(jìn)行加速實(shí)驗(yàn)，溶液沒(méi)有相分離發(fā)生。用氣相色譜法測(cè)定納米乳中的γ-亞麻酸甲酯含量[7]，結(jié)果未發(fā)生明顯變化，表明將γ-亞麻酸甲酯制成納米乳后質(zhì)量穩(wěn)定，納米乳載體能保持γ-亞麻酸甲酯的穩(wěn)定性。

2.5 分散性

用激光粒度分析儀分別測(cè)定新鮮制備及室溫貯存6 個(gè)月的γ-亞麻酸甲酯納米乳粒徑，粒徑分布見圖4。結(jié)果貯存6 個(gè)月的γ-亞麻酸甲酯納米乳粒子粒徑分布雖有微弱變化，但依然介于40 ～100 nm 之間，有很好的分散性，平均粒徑約60 nm。

圖4 γ-亞麻酸甲酯納米乳粒徑分布圖

3 討論

γ-亞麻酸中含有3 個(gè)不飽和雙鍵，對(duì)熱敏感、容易氧化、在堿性條件下易發(fā)生雙鍵位置及構(gòu)型異構(gòu)化反應(yīng)，形成共軛多烯酸，失去生理活性。故制備時(shí)應(yīng)選擇在室溫下進(jìn)行。留樣試驗(yàn)結(jié)果表明，水包油型γ-亞麻酸甲酯納米乳室溫貯存6 個(gè)月后各項(xiàng)檢查指標(biāo)未發(fā)生明顯變化。

納米乳制備工藝是由納米乳的微觀結(jié)構(gòu)和特有的理化性質(zhì)決定的，與表面活性劑類型、油相的性質(zhì)及藥物的油水分配系數(shù)等因素有關(guān)，本試驗(yàn)中表面活性劑聚山梨酯80 的用量對(duì)載藥量影響最明顯，乳滴的粒徑及其分布也取決于聚山梨酯80 的用量。PEG400 做助表面活性劑有助于納米乳的自發(fā)形成。

γ-亞麻酸甲酯納米乳的制備為γ-亞麻酸的應(yīng)用開拓了新的途徑，基于本試驗(yàn)結(jié)果可以認(rèn)為，這種納米乳系統(tǒng)可以無(wú)須化學(xué)修飾而用于制備γ-亞麻酸甲酯的非腸道給藥注射劑型。

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