12份櫻桃品種遺傳多樣性的ISSR分析

陳新+張慶霞+徐麗+賈建云+王甲威+劉慶忠

摘 要：本試驗(yàn)采用ISSR技術(shù)對(duì)12份櫻桃種質(zhì)資源的遺傳多樣性進(jìn)行了研究。篩選出6條ISSR引物對(duì)供試材料進(jìn)行擴(kuò)增，共檢測(cè)到48個(gè)遺傳位點(diǎn)，包含44個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率為91.67%。材料間遺傳相似系數(shù)為0.29～0.98，平均為0.65。當(dāng)閾值為0.58時(shí)，供試樣品可分為3個(gè)組，即組Ⅰ、組Ⅱ和組Ⅲ。遺傳相似性分析結(jié)果顯示材料間具有豐富的遺傳多樣性。

關(guān)鍵詞：櫻桃；遺傳多樣性；ISSR

中圖分類號(hào)：S662.501 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2014）11-0012-03

櫻桃為薔薇科（Rosacea）李屬（Prunus）櫻桃組植物，多分布在亞洲和歐洲[1]，全世界櫻桃組植物約有120種以上，主要分布于北半球溫和地帶。中國(guó)栽培櫻桃已有3000多年的歷史。我國(guó)栽培的櫻桃可分為四大類，即中國(guó)櫻桃、甜櫻桃、酸櫻桃和毛櫻桃[2]，其中以中國(guó)櫻桃和甜櫻桃為主要栽培對(duì)象。我國(guó)櫻桃種質(zhì)資源豐富，華北、華中及兩廣地區(qū)皆有分布，尤以浙江、山東、河南、江蘇、陜西、四川、安徽、河北分布最多，為充分挖掘櫻桃種質(zhì)資源提供了天然條件[3，4]。

ISSR（Inter-simple sequence repeat） 是Zietkiewitcz等于1994年發(fā)展起來的微衛(wèi)星基礎(chǔ)上的分子標(biāo)記[5]，是一種簡(jiǎn)單重復(fù)序列之間擴(kuò)增多態(tài)性分子標(biāo)記。其利用基因組中有關(guān)SSR序列信息，引物的開發(fā)較SSR引物簡(jiǎn)單，且可以在不同的物種間通用，不像SSR標(biāo)記一樣具有較強(qiáng)的種屬特異性。ISSR分子標(biāo)記不僅具有SSR標(biāo)記的穩(wěn)定性且揭示的多態(tài)性較RAPD高[6，7]，是一種非常理想的分子標(biāo)記技術(shù)，目前已廣泛用于植物品種鑒定、遺傳作圖、遺傳多樣性及分子生態(tài)學(xué)研究。本試驗(yàn)采用ISSR標(biāo)記技術(shù)對(duì)山東省部分主栽櫻桃品種和砧木資源進(jìn)行檢測(cè)，并分析其遺傳背景差異，對(duì)櫻桃資源的科研、生產(chǎn)具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值和科學(xué)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用材料均于2014年4月采自山東省果樹研究所櫻桃品種資源保存圃，所用12份材料均為目前生產(chǎn)上的主要栽培品種。隨機(jī)采取健康嫩葉迅速于液氮中冷凍，放于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。樣品編?hào)及品種見表1。

1.2 模板DNA的制備

采用改良CTAB法[8]提取葉片的基因組DNA，用0.8%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其質(zhì)量。稀釋DNA至終濃度10 ng/μL，-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 ISSR反應(yīng)

ISSR引物委托上海生工生物工程股份有限公司合成，篩選出6條用于PCR（表2）。PCR擴(kuò)增體系為20 μL，其中10 × buffer （含Mg2+） 2 μL，2.5 mmol/L dNTPs 1.6 μL，10 μmol/L Primer 1 μL，2.5 U/μL Taq聚合酶0.4 μL，10 ng/μL DNA模板1 μL 和無菌ddH2O 14 μL。PCR 反應(yīng)程序?yàn)?5℃ 5 min；95℃ 1 min，48℃ 1 min，72℃ 1 min，35 個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min，程序結(jié)束后進(jìn)入4℃保存。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離檢測(cè)，于紫外燈下觀察，并拍照保存。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

將所獲得的電泳譜帶進(jìn)行數(shù)字化統(tǒng)計(jì)，按照?qǐng)D譜中同一位置條帶的“有”、“無”進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，有帶標(biāo)記為“1”，無帶標(biāo)記為“0”，僅記錄重復(fù)性好、條帶清晰且片段為200～750 bp 范圍內(nèi)的擴(kuò)增帶。將DNA擴(kuò)增帶數(shù)據(jù)輸入到數(shù)據(jù)矩陣，通過NTSYSpc（version 2.11 a）采用非加權(quán)類平均法（UPGMA）進(jìn)行聚類分析建立聚類圖，并計(jì)算遺傳相似系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性分析

6條引物均能對(duì)12份櫻桃種質(zhì)基因組DNA擴(kuò)增出清晰穩(wěn)定的多態(tài)性條帶，圖1為引物ISSR36擴(kuò)增的帶型。本試驗(yàn)共檢測(cè)到48個(gè)遺傳位點(diǎn)，其中包含44個(gè)多態(tài)性遺傳位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)比率為91.67%（表2）。同一樣品的不同引物擴(kuò)增條帶數(shù)量和多態(tài)性差異較大。

2.2 遺傳相似性

12份櫻桃種質(zhì)個(gè)體間的相似系數(shù)為0.29～0.98，平均值為0.65。其中1與4和2與3的遺傳相似系數(shù)最大，為0.98，說明其遺傳距離最近，即親緣關(guān)系最近，5與10 的遺傳相似系數(shù)最小，僅為0.29，說明二者遺傳相似性最低，親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。

2.3 聚類分析

對(duì)供試12份種質(zhì)進(jìn)行聚類分析，結(jié)果表明，品種間遺傳背景有較大的差異，遺傳多樣性豐富。在相似系數(shù)0.58處，12個(gè)品種可聚類為3個(gè)組（圖2），其中，1、4、10、2、3、11和12聚為一個(gè)分支，為組Ⅰ；5和9聚為一個(gè)分支，為組Ⅱ；6、7和8聚為一個(gè)分支，為組Ⅲ。

3 結(jié)論

6條ISSR 引物均能有效擴(kuò)增出多態(tài)性條帶，說明ISSR標(biāo)記是櫻桃遺傳分析的有效工具。供試12個(gè)樣品間的相似系數(shù)分布在0.29～0.98之間，ISSR標(biāo)記能將供試樣品完全區(qū)分開。品種間具有豐富的遺傳多樣性，親緣關(guān)系復(fù)雜，遺傳背景存在很大差異。物種的地理分布特征也可能影響其遺傳多樣性水平，一般而言，廣泛分布比狹域分布的物種具有更高的遺傳多樣性[9]，供試櫻桃品種間表現(xiàn)出較高遺傳多樣性，可能與它們地理分布相對(duì)較廣有關(guān)。參 考 文 獻(xiàn)：

[1] 俞德浚.中國(guó)植物志[M].北京：科學(xué)出版社， 1986： 46-87.

[2] 于亞軍，代漢萍，李寶江，等. 世界櫻桃育種進(jìn)展[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2003，20（2）：135-139.

[3] 胡正剛.中國(guó)櫻桃的分布及生產(chǎn)現(xiàn)狀[J].落葉果樹， 1996（3）：29-30.

[4] Li M M，Cai Y L，Qian Z Q， et al. Genetic diversity and differentiation in Chinese sour cherry Prunus pseudocerasus Lindl.， and its implications for conservation[J]. Genetic Resources and Crop Evolution， 2009， 56（4）： 455-464.

[5] Zietkiewicz E， Rafalski A， Labuda D. Genome fingerprinting by simple sequence repeat （SSR）-anchored polymerase chain reaction amplification[J]. Genomics， 1994， 20： 176-183.

[6] Sanchez de la Hoz M P，Davila J A，Loarce Y，et al. Simple sequence repeat primers used in polymerase chain reaction amplifications to study genetic diversity in barley [J]. Genome， 1996， 39（1）： 112-117.

[7] Ratnaparkhe M B，Santra D K，Tullu A，et al. Inheritance of inter-simple-sequence-repeat polymorphisms and linkage with a fusarium wilt resistance gene in chickpea [J].Theor. Appl. Genet.， 1998， 96（3/4）： 348-353.

[8] 陳新.榛子花芽轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)的Solexa 測(cè)序及冷調(diào)節(jié)基因的表達(dá)譜分析[D].北京：中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院，2011.

[9] Nybom H， Bartish I V. Effects of life history traits and sampling strategies on genetic diversity estimates obtained with RAPD markers in plants [J]. Perspectives in Plant Ecology， Evolution and Systematics， 2000， 3（2）：93-114.

摘 要：本試驗(yàn)采用ISSR技術(shù)對(duì)12份櫻桃種質(zhì)資源的遺傳多樣性進(jìn)行了研究。篩選出6條ISSR引物對(duì)供試材料進(jìn)行擴(kuò)增，共檢測(cè)到48個(gè)遺傳位點(diǎn)，包含44個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率為91.67%。材料間遺傳相似系數(shù)為0.29～0.98，平均為0.65。當(dāng)閾值為0.58時(shí)，供試樣品可分為3個(gè)組，即組Ⅰ、組Ⅱ和組Ⅲ。遺傳相似性分析結(jié)果顯示材料間具有豐富的遺傳多樣性。

關(guān)鍵詞：櫻桃；遺傳多樣性；ISSR

中圖分類號(hào)：S662.501 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2014）11-0012-03

櫻桃為薔薇科（Rosacea）李屬（Prunus）櫻桃組植物，多分布在亞洲和歐洲[1]，全世界櫻桃組植物約有120種以上，主要分布于北半球溫和地帶。中國(guó)栽培櫻桃已有3000多年的歷史。我國(guó)栽培的櫻桃可分為四大類，即中國(guó)櫻桃、甜櫻桃、酸櫻桃和毛櫻桃[2]，其中以中國(guó)櫻桃和甜櫻桃為主要栽培對(duì)象。我國(guó)櫻桃種質(zhì)資源豐富，華北、華中及兩廣地區(qū)皆有分布，尤以浙江、山東、河南、江蘇、陜西、四川、安徽、河北分布最多，為充分挖掘櫻桃種質(zhì)資源提供了天然條件[3，4]。

ISSR（Inter-simple sequence repeat） 是Zietkiewitcz等于1994年發(fā)展起來的微衛(wèi)星基礎(chǔ)上的分子標(biāo)記[5]，是一種簡(jiǎn)單重復(fù)序列之間擴(kuò)增多態(tài)性分子標(biāo)記。其利用基因組中有關(guān)SSR序列信息，引物的開發(fā)較SSR引物簡(jiǎn)單，且可以在不同的物種間通用，不像SSR標(biāo)記一樣具有較強(qiáng)的種屬特異性。ISSR分子標(biāo)記不僅具有SSR標(biāo)記的穩(wěn)定性且揭示的多態(tài)性較RAPD高[6，7]，是一種非常理想的分子標(biāo)記技術(shù)，目前已廣泛用于植物品種鑒定、遺傳作圖、遺傳多樣性及分子生態(tài)學(xué)研究。本試驗(yàn)采用ISSR標(biāo)記技術(shù)對(duì)山東省部分主栽櫻桃品種和砧木資源進(jìn)行檢測(cè)，并分析其遺傳背景差異，對(duì)櫻桃資源的科研、生產(chǎn)具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值和科學(xué)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用材料均于2014年4月采自山東省果樹研究所櫻桃品種資源保存圃，所用12份材料均為目前生產(chǎn)上的主要栽培品種。隨機(jī)采取健康嫩葉迅速于液氮中冷凍，放于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。樣品編?hào)及品種見表1。

1.2 模板DNA的制備

采用改良CTAB法[8]提取葉片的基因組DNA，用0.8%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其質(zhì)量。稀釋DNA至終濃度10 ng/μL，-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 ISSR反應(yīng)

ISSR引物委托上海生工生物工程股份有限公司合成，篩選出6條用于PCR（表2）。PCR擴(kuò)增體系為20 μL，其中10 × buffer （含Mg2+） 2 μL，2.5 mmol/L dNTPs 1.6 μL，10 μmol/L Primer 1 μL，2.5 U/μL Taq聚合酶0.4 μL，10 ng/μL DNA模板1 μL 和無菌ddH2O 14 μL。PCR 反應(yīng)程序?yàn)?5℃ 5 min；95℃ 1 min，48℃ 1 min，72℃ 1 min，35 個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min，程序結(jié)束后進(jìn)入4℃保存。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離檢測(cè)，于紫外燈下觀察，并拍照保存。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

將所獲得的電泳譜帶進(jìn)行數(shù)字化統(tǒng)計(jì)，按照?qǐng)D譜中同一位置條帶的“有”、“無”進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，有帶標(biāo)記為“1”，無帶標(biāo)記為“0”，僅記錄重復(fù)性好、條帶清晰且片段為200～750 bp 范圍內(nèi)的擴(kuò)增帶。將DNA擴(kuò)增帶數(shù)據(jù)輸入到數(shù)據(jù)矩陣，通過NTSYSpc（version 2.11 a）采用非加權(quán)類平均法（UPGMA）進(jìn)行聚類分析建立聚類圖，并計(jì)算遺傳相似系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性分析

6條引物均能對(duì)12份櫻桃種質(zhì)基因組DNA擴(kuò)增出清晰穩(wěn)定的多態(tài)性條帶，圖1為引物ISSR36擴(kuò)增的帶型。本試驗(yàn)共檢測(cè)到48個(gè)遺傳位點(diǎn)，其中包含44個(gè)多態(tài)性遺傳位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)比率為91.67%（表2）。同一樣品的不同引物擴(kuò)增條帶數(shù)量和多態(tài)性差異較大。

2.2 遺傳相似性

12份櫻桃種質(zhì)個(gè)體間的相似系數(shù)為0.29～0.98，平均值為0.65。其中1與4和2與3的遺傳相似系數(shù)最大，為0.98，說明其遺傳距離最近，即親緣關(guān)系最近，5與10 的遺傳相似系數(shù)最小，僅為0.29，說明二者遺傳相似性最低，親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。

2.3 聚類分析

對(duì)供試12份種質(zhì)進(jìn)行聚類分析，結(jié)果表明，品種間遺傳背景有較大的差異，遺傳多樣性豐富。在相似系數(shù)0.58處，12個(gè)品種可聚類為3個(gè)組（圖2），其中，1、4、10、2、3、11和12聚為一個(gè)分支，為組Ⅰ；5和9聚為一個(gè)分支，為組Ⅱ；6、7和8聚為一個(gè)分支，為組Ⅲ。

3 結(jié)論

6條ISSR 引物均能有效擴(kuò)增出多態(tài)性條帶，說明ISSR標(biāo)記是櫻桃遺傳分析的有效工具。供試12個(gè)樣品間的相似系數(shù)分布在0.29～0.98之間，ISSR標(biāo)記能將供試樣品完全區(qū)分開。品種間具有豐富的遺傳多樣性，親緣關(guān)系復(fù)雜，遺傳背景存在很大差異。物種的地理分布特征也可能影響其遺傳多樣性水平，一般而言，廣泛分布比狹域分布的物種具有更高的遺傳多樣性[9]，供試櫻桃品種間表現(xiàn)出較高遺傳多樣性，可能與它們地理分布相對(duì)較廣有關(guān)。參 考 文 獻(xiàn)：

[1] 俞德浚.中國(guó)植物志[M].北京：科學(xué)出版社， 1986： 46-87.

[2] 于亞軍，代漢萍，李寶江，等. 世界櫻桃育種進(jìn)展[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2003，20（2）：135-139.

[3] 胡正剛.中國(guó)櫻桃的分布及生產(chǎn)現(xiàn)狀[J].落葉果樹， 1996（3）：29-30.

[4] Li M M，Cai Y L，Qian Z Q， et al. Genetic diversity and differentiation in Chinese sour cherry Prunus pseudocerasus Lindl.， and its implications for conservation[J]. Genetic Resources and Crop Evolution， 2009， 56（4）： 455-464.

[5] Zietkiewicz E， Rafalski A， Labuda D. Genome fingerprinting by simple sequence repeat （SSR）-anchored polymerase chain reaction amplification[J]. Genomics， 1994， 20： 176-183.

[6] Sanchez de la Hoz M P，Davila J A，Loarce Y，et al. Simple sequence repeat primers used in polymerase chain reaction amplifications to study genetic diversity in barley [J]. Genome， 1996， 39（1）： 112-117.

[7] Ratnaparkhe M B，Santra D K，Tullu A，et al. Inheritance of inter-simple-sequence-repeat polymorphisms and linkage with a fusarium wilt resistance gene in chickpea [J].Theor. Appl. Genet.， 1998， 96（3/4）： 348-353.

[8] 陳新.榛子花芽轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)的Solexa 測(cè)序及冷調(diào)節(jié)基因的表達(dá)譜分析[D].北京：中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院，2011.

[9] Nybom H， Bartish I V. Effects of life history traits and sampling strategies on genetic diversity estimates obtained with RAPD markers in plants [J]. Perspectives in Plant Ecology， Evolution and Systematics， 2000， 3（2）：93-114.

摘 要：本試驗(yàn)采用ISSR技術(shù)對(duì)12份櫻桃種質(zhì)資源的遺傳多樣性進(jìn)行了研究。篩選出6條ISSR引物對(duì)供試材料進(jìn)行擴(kuò)增，共檢測(cè)到48個(gè)遺傳位點(diǎn)，包含44個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率為91.67%。材料間遺傳相似系數(shù)為0.29～0.98，平均為0.65。當(dāng)閾值為0.58時(shí)，供試樣品可分為3個(gè)組，即組Ⅰ、組Ⅱ和組Ⅲ。遺傳相似性分析結(jié)果顯示材料間具有豐富的遺傳多樣性。

關(guān)鍵詞：櫻桃；遺傳多樣性；ISSR

中圖分類號(hào)：S662.501 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2014）11-0012-03

櫻桃為薔薇科（Rosacea）李屬（Prunus）櫻桃組植物，多分布在亞洲和歐洲[1]，全世界櫻桃組植物約有120種以上，主要分布于北半球溫和地帶。中國(guó)栽培櫻桃已有3000多年的歷史。我國(guó)栽培的櫻桃可分為四大類，即中國(guó)櫻桃、甜櫻桃、酸櫻桃和毛櫻桃[2]，其中以中國(guó)櫻桃和甜櫻桃為主要栽培對(duì)象。我國(guó)櫻桃種質(zhì)資源豐富，華北、華中及兩廣地區(qū)皆有分布，尤以浙江、山東、河南、江蘇、陜西、四川、安徽、河北分布最多，為充分挖掘櫻桃種質(zhì)資源提供了天然條件[3，4]。

ISSR（Inter-simple sequence repeat） 是Zietkiewitcz等于1994年發(fā)展起來的微衛(wèi)星基礎(chǔ)上的分子標(biāo)記[5]，是一種簡(jiǎn)單重復(fù)序列之間擴(kuò)增多態(tài)性分子標(biāo)記。其利用基因組中有關(guān)SSR序列信息，引物的開發(fā)較SSR引物簡(jiǎn)單，且可以在不同的物種間通用，不像SSR標(biāo)記一樣具有較強(qiáng)的種屬特異性。ISSR分子標(biāo)記不僅具有SSR標(biāo)記的穩(wěn)定性且揭示的多態(tài)性較RAPD高[6，7]，是一種非常理想的分子標(biāo)記技術(shù)，目前已廣泛用于植物品種鑒定、遺傳作圖、遺傳多樣性及分子生態(tài)學(xué)研究。本試驗(yàn)采用ISSR標(biāo)記技術(shù)對(duì)山東省部分主栽櫻桃品種和砧木資源進(jìn)行檢測(cè)，并分析其遺傳背景差異，對(duì)櫻桃資源的科研、生產(chǎn)具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值和科學(xué)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用材料均于2014年4月采自山東省果樹研究所櫻桃品種資源保存圃，所用12份材料均為目前生產(chǎn)上的主要栽培品種。隨機(jī)采取健康嫩葉迅速于液氮中冷凍，放于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。樣品編?hào)及品種見表1。

1.2 模板DNA的制備

采用改良CTAB法[8]提取葉片的基因組DNA，用0.8%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其質(zhì)量。稀釋DNA至終濃度10 ng/μL，-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 ISSR反應(yīng)

ISSR引物委托上海生工生物工程股份有限公司合成，篩選出6條用于PCR（表2）。PCR擴(kuò)增體系為20 μL，其中10 × buffer （含Mg2+） 2 μL，2.5 mmol/L dNTPs 1.6 μL，10 μmol/L Primer 1 μL，2.5 U/μL Taq聚合酶0.4 μL，10 ng/μL DNA模板1 μL 和無菌ddH2O 14 μL。PCR 反應(yīng)程序?yàn)?5℃ 5 min；95℃ 1 min，48℃ 1 min，72℃ 1 min，35 個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min，程序結(jié)束后進(jìn)入4℃保存。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離檢測(cè)，于紫外燈下觀察，并拍照保存。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

將所獲得的電泳譜帶進(jìn)行數(shù)字化統(tǒng)計(jì)，按照?qǐng)D譜中同一位置條帶的“有”、“無”進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，有帶標(biāo)記為“1”，無帶標(biāo)記為“0”，僅記錄重復(fù)性好、條帶清晰且片段為200～750 bp 范圍內(nèi)的擴(kuò)增帶。將DNA擴(kuò)增帶數(shù)據(jù)輸入到數(shù)據(jù)矩陣，通過NTSYSpc（version 2.11 a）采用非加權(quán)類平均法（UPGMA）進(jìn)行聚類分析建立聚類圖，并計(jì)算遺傳相似系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性分析

6條引物均能對(duì)12份櫻桃種質(zhì)基因組DNA擴(kuò)增出清晰穩(wěn)定的多態(tài)性條帶，圖1為引物ISSR36擴(kuò)增的帶型。本試驗(yàn)共檢測(cè)到48個(gè)遺傳位點(diǎn)，其中包含44個(gè)多態(tài)性遺傳位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)比率為91.67%（表2）。同一樣品的不同引物擴(kuò)增條帶數(shù)量和多態(tài)性差異較大。

2.2 遺傳相似性

12份櫻桃種質(zhì)個(gè)體間的相似系數(shù)為0.29～0.98，平均值為0.65。其中1與4和2與3的遺傳相似系數(shù)最大，為0.98，說明其遺傳距離最近，即親緣關(guān)系最近，5與10 的遺傳相似系數(shù)最小，僅為0.29，說明二者遺傳相似性最低，親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。

2.3 聚類分析

對(duì)供試12份種質(zhì)進(jìn)行聚類分析，結(jié)果表明，品種間遺傳背景有較大的差異，遺傳多樣性豐富。在相似系數(shù)0.58處，12個(gè)品種可聚類為3個(gè)組（圖2），其中，1、4、10、2、3、11和12聚為一個(gè)分支，為組Ⅰ；5和9聚為一個(gè)分支，為組Ⅱ；6、7和8聚為一個(gè)分支，為組Ⅲ。

3 結(jié)論

6條ISSR 引物均能有效擴(kuò)增出多態(tài)性條帶，說明ISSR標(biāo)記是櫻桃遺傳分析的有效工具。供試12個(gè)樣品間的相似系數(shù)分布在0.29～0.98之間，ISSR標(biāo)記能將供試樣品完全區(qū)分開。品種間具有豐富的遺傳多樣性，親緣關(guān)系復(fù)雜，遺傳背景存在很大差異。物種的地理分布特征也可能影響其遺傳多樣性水平，一般而言，廣泛分布比狹域分布的物種具有更高的遺傳多樣性[9]，供試櫻桃品種間表現(xiàn)出較高遺傳多樣性，可能與它們地理分布相對(duì)較廣有關(guān)。參 考 文 獻(xiàn)：

[1] 俞德浚.中國(guó)植物志[M].北京：科學(xué)出版社， 1986： 46-87.

[2] 于亞軍，代漢萍，李寶江，等. 世界櫻桃育種進(jìn)展[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2003，20（2）：135-139.

[3] 胡正剛.中國(guó)櫻桃的分布及生產(chǎn)現(xiàn)狀[J].落葉果樹， 1996（3）：29-30.

[4] Li M M，Cai Y L，Qian Z Q， et al. Genetic diversity and differentiation in Chinese sour cherry Prunus pseudocerasus Lindl.， and its implications for conservation[J]. Genetic Resources and Crop Evolution， 2009， 56（4）： 455-464.

[5] Zietkiewicz E， Rafalski A， Labuda D. Genome fingerprinting by simple sequence repeat （SSR）-anchored polymerase chain reaction amplification[J]. Genomics， 1994， 20： 176-183.

[6] Sanchez de la Hoz M P，Davila J A，Loarce Y，et al. Simple sequence repeat primers used in polymerase chain reaction amplifications to study genetic diversity in barley [J]. Genome， 1996， 39（1）： 112-117.

[7] Ratnaparkhe M B，Santra D K，Tullu A，et al. Inheritance of inter-simple-sequence-repeat polymorphisms and linkage with a fusarium wilt resistance gene in chickpea [J].Theor. Appl. Genet.， 1998， 96（3/4）： 348-353.

[8] 陳新.榛子花芽轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)的Solexa 測(cè)序及冷調(diào)節(jié)基因的表達(dá)譜分析[D].北京：中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院，2011.

[9] Nybom H， Bartish I V. Effects of life history traits and sampling strategies on genetic diversity estimates obtained with RAPD markers in plants [J]. Perspectives in Plant Ecology， Evolution and Systematics， 2000， 3（2）：93-114.