外植體取樣時間對‘玉妃’和‘超紅’桃初代培養(yǎng)的影響

王海榮+劉偉+安淼+李桂祥+余賢美

摘 要：從2012年7月到2013年10月，以‘玉妃和‘超紅桃當(dāng)年生枝上帶腋芽的莖段為外植體，研究了不同取樣時間對初代培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明，5月份取樣‘玉妃和‘超紅桃的污染率最低，分別為16%和10%；成活率最高，分別為84%和60%以上。5月份是最佳取樣時間。

關(guān)鍵詞：‘玉妃桃；‘超紅桃；取樣時間；初代培養(yǎng)

中圖分類號：S662.103.6 文獻標(biāo)識號：A 文章編號：1001-4942（2014）11-0050-02

在植物組織培養(yǎng)中，外植體的污染程度和誘導(dǎo)的難易程度是影響植株離體培養(yǎng)繁殖速度的重要因子。外植體表面和內(nèi)部常攜帶一些微生物，是組織培養(yǎng)過程的主要污染源，也是組織培養(yǎng)污染途徑中最難解決的一個。不同季節(jié)外植體的帶菌數(shù)量和種類與取材地點和時間密切相關(guān)，因此選擇合適的取樣時間對桃的組織培養(yǎng)有重要意義。同時，在桃的組織培養(yǎng)過程中，不同時間取材的外植體內(nèi)源激素和營養(yǎng)物質(zhì)含量不同，從而導(dǎo)致初代培養(yǎng)的成活率有差異。目前，關(guān)于‘玉妃和‘超紅桃組織培養(yǎng)的研究尚未見報道。本試驗對兩種桃外植體的取樣時間，特別是整年生長季的取樣時間對初代培養(yǎng)污染率和成活率的影響進行了研究，旨在為兩種桃組織培養(yǎng)的適宜取樣時間提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以山東省果樹研究所桃試驗基地‘玉妃和‘超紅桃為試材?！皴沂窃谌R蕪市萊城區(qū)和莊鎮(zhèn)大英章村發(fā)現(xiàn)的，后經(jīng)高接觀察和嫁接手段連續(xù)4年觀察培養(yǎng)的中熟桃新品系[1]；‘超紅桃是山東省果樹研究所從引自美國的‘White Lady桃的自然雜交實生種中選出，2005年12月通過山東省林木品種審定委員會審定[2]。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體采集 從2012年7月到2013年10月，每月中下旬（兩次取樣間隔25～30 d）從桃試驗基地剪取樹勢健壯的新梢， 新梢長短一致，粗細(xì)均勻，生長勢強，無病蟲害，多分布在樹冠的中部外圍帶芽莖段的新抽枝條，用塑料保鮮膜保濕帶回實驗室，并當(dāng)天進行接種試驗。

1.2.2 外植體處理 去除葉片，將新梢剪為長約2 cm的莖段（每個莖段帶1～2個腋芽），用洗衣粉水浸泡30 min，再用清水洗凈，置于流水下沖洗。于超凈工作臺上，先用70%的酒精浸泡15 s，再用2%次氯酸鈉浸泡15 min，最后用無菌水沖洗4次，無菌濾紙吸干材料表面水分，用滅菌剪刀將莖段上下剪口剪掉0.5 cm左右，接種于MS培養(yǎng)基上（pH 5.8）。兩種桃各接種20瓶，每瓶接種3個外植體，重復(fù)3次。

1.2.3 培養(yǎng)條件 上述外植體接種后均在24～26℃，光照12 h，光強1 000～2 000 lx的條件下培養(yǎng)。10 d后調(diào)查污染率，24 d后調(diào)查成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 取樣時間對‘玉妃桃初代培養(yǎng)污染率和成活率的影響

由圖1可以看出，不同取樣時間對‘玉妃桃初代培養(yǎng)的污染率和成活率有顯著影響。污染率最高的是在2013年8月份（56%），最低是在2013年4月份（10%），而成活率最高的是在2013年5月份（84%），最低是在2012年8月份（31%）。綜合分析，5月份最適宜取樣，此時污染率為16%，且新發(fā)腋芽生長旺盛；其次，4月份污染率最低，僅為10%，而成活率達62%。

2.2 取樣時間對‘超紅桃初代培養(yǎng)污染率和成活率的影響

從圖2可以看出，連續(xù)兩年的8月份污染率都比其它月份高，并且成活率都較低，與其它月份相比差異顯著，所以不適合此時取樣。在2013年4、5月份取樣時，污染率和成活率的差異都不顯著，成活率均在60%以上，而5月份污染率最低為10%。2013年7月份取材的‘超紅桃成活率最高達64%，污染率為22%。綜合比較，5月份比較適合‘超紅桃取樣，其次為4月份和7月份。

3 討論

外植體的選擇是影響桃組培快繁的重要因素，包括外植體的獲取地點、時間及外植體的本身特性等。本試驗結(jié)果表明，‘玉妃和‘超紅桃的最佳取材時間均為5月份，這與劉祥林[3]、周玉碧[4]等的研究結(jié)果相符，分析其原因可能是外植體一般在植株萌動初期取材較為有利，因為此時植株積累了較豐富的營養(yǎng)和內(nèi)源激素， 木質(zhì)化程度較低，其抵抗病菌的能力較強，同時病菌尚未活躍起來，故污染率較低，成活率較高；7、8月份正值病蟲害發(fā)生季節(jié)，外植體材料積累微生物較多，從而造成污染嚴(yán)重，分化能力低，萌發(fā)力較差。石曉東[5]對川中島白桃當(dāng)年生枝條在4月中旬、7月中旬取樣的比較研究中認(rèn)為，7月中旬污染率最高達66.1%，而誘導(dǎo)率最低為23.2%，分析其原因，是與當(dāng)?shù)氐牡乩須夂颦h(huán)境有關(guān)。所以，影響外植體污染率的因素除與植株本身的發(fā)育程度有關(guān)外，還與植株生長的環(huán)境密切相關(guān)。

王小箐等[6]認(rèn)為外植體遺傳因素、生理年齡、極性及取材部位等是影響形態(tài)建成的重要因素。植物的基因型不同，接種成活率差異很大。對于第二適宜取材時間的選擇，則因品種的不同而不同。本研究中‘超紅桃屬于早熟品種，7月份時已完成果實成熟，故7月份取材比6、8月份的成活率要高?！t桃的成活率最高為64%，最低還不到20%，除了外植體取材時間造成的污染原因外，最主要的是跟其本身的特性有關(guān)，比如不同取樣時間里其植株體內(nèi)內(nèi)源激素的含量不同，因而要根據(jù)取樣時間選擇合適的培養(yǎng)基配方，這有待于進一步的研究。參 考 文 獻：

[1] 張安寧， 王金政， 薛曉敏. 早熟桃新品種‘超紅[J]. 園藝學(xué)報， 2006， 33（3）：688.

[2] 張安寧， 劉偉， 王長君， 等.‘玉妃桃及其栽培技術(shù)要點[J]. 落葉果樹， 2013， 45（3）：27-29.

[3] 劉祥林， 湯浩茹. 桃胚培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化的研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2005， 33（6）：1087-1089.

[4] 周玉碧. 桃高效微繁體系的建立與遺傳穩(wěn)定性研究[D]. 蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2005：22-23.

[5] 石曉東. 川中島白桃莖段離體培養(yǎng)研究[D].太谷： 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2005：20-22.

[6] 王小箐， 李玲. 植物生長調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：36. 山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2014，46（11）：52～54endprint

摘 要：從2012年7月到2013年10月，以‘玉妃和‘超紅桃當(dāng)年生枝上帶腋芽的莖段為外植體，研究了不同取樣時間對初代培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明，5月份取樣‘玉妃和‘超紅桃的污染率最低，分別為16%和10%；成活率最高，分別為84%和60%以上。5月份是最佳取樣時間。

關(guān)鍵詞：‘玉妃桃；‘超紅桃；取樣時間；初代培養(yǎng)

中圖分類號：S662.103.6 文獻標(biāo)識號：A 文章編號：1001-4942（2014）11-0050-02

在植物組織培養(yǎng)中，外植體的污染程度和誘導(dǎo)的難易程度是影響植株離體培養(yǎng)繁殖速度的重要因子。外植體表面和內(nèi)部常攜帶一些微生物，是組織培養(yǎng)過程的主要污染源，也是組織培養(yǎng)污染途徑中最難解決的一個。不同季節(jié)外植體的帶菌數(shù)量和種類與取材地點和時間密切相關(guān)，因此選擇合適的取樣時間對桃的組織培養(yǎng)有重要意義。同時，在桃的組織培養(yǎng)過程中，不同時間取材的外植體內(nèi)源激素和營養(yǎng)物質(zhì)含量不同，從而導(dǎo)致初代培養(yǎng)的成活率有差異。目前，關(guān)于‘玉妃和‘超紅桃組織培養(yǎng)的研究尚未見報道。本試驗對兩種桃外植體的取樣時間，特別是整年生長季的取樣時間對初代培養(yǎng)污染率和成活率的影響進行了研究，旨在為兩種桃組織培養(yǎng)的適宜取樣時間提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以山東省果樹研究所桃試驗基地‘玉妃和‘超紅桃為試材。‘玉妃桃是在萊蕪市萊城區(qū)和莊鎮(zhèn)大英章村發(fā)現(xiàn)的，后經(jīng)高接觀察和嫁接手段連續(xù)4年觀察培養(yǎng)的中熟桃新品系[1]；‘超紅桃是山東省果樹研究所從引自美國的‘White Lady桃的自然雜交實生種中選出，2005年12月通過山東省林木品種審定委員會審定[2]。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體采集 從2012年7月到2013年10月，每月中下旬（兩次取樣間隔25～30 d）從桃試驗基地剪取樹勢健壯的新梢， 新梢長短一致，粗細(xì)均勻，生長勢強，無病蟲害，多分布在樹冠的中部外圍帶芽莖段的新抽枝條，用塑料保鮮膜保濕帶回實驗室，并當(dāng)天進行接種試驗。

1.2.2 外植體處理 去除葉片，將新梢剪為長約2 cm的莖段（每個莖段帶1～2個腋芽），用洗衣粉水浸泡30 min，再用清水洗凈，置于流水下沖洗。于超凈工作臺上，先用70%的酒精浸泡15 s，再用2%次氯酸鈉浸泡15 min，最后用無菌水沖洗4次，無菌濾紙吸干材料表面水分，用滅菌剪刀將莖段上下剪口剪掉0.5 cm左右，接種于MS培養(yǎng)基上（pH 5.8）。兩種桃各接種20瓶，每瓶接種3個外植體，重復(fù)3次。

1.2.3 培養(yǎng)條件 上述外植體接種后均在24～26℃，光照12 h，光強1 000～2 000 lx的條件下培養(yǎng)。10 d后調(diào)查污染率，24 d后調(diào)查成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 取樣時間對‘玉妃桃初代培養(yǎng)污染率和成活率的影響

由圖1可以看出，不同取樣時間對‘玉妃桃初代培養(yǎng)的污染率和成活率有顯著影響。污染率最高的是在2013年8月份（56%），最低是在2013年4月份（10%），而成活率最高的是在2013年5月份（84%），最低是在2012年8月份（31%）。綜合分析，5月份最適宜取樣，此時污染率為16%，且新發(fā)腋芽生長旺盛；其次，4月份污染率最低，僅為10%，而成活率達62%。

2.2 取樣時間對‘超紅桃初代培養(yǎng)污染率和成活率的影響

從圖2可以看出，連續(xù)兩年的8月份污染率都比其它月份高，并且成活率都較低，與其它月份相比差異顯著，所以不適合此時取樣。在2013年4、5月份取樣時，污染率和成活率的差異都不顯著，成活率均在60%以上，而5月份污染率最低為10%。2013年7月份取材的‘超紅桃成活率最高達64%，污染率為22%。綜合比較，5月份比較適合‘超紅桃取樣，其次為4月份和7月份。

3 討論

外植體的選擇是影響桃組培快繁的重要因素，包括外植體的獲取地點、時間及外植體的本身特性等。本試驗結(jié)果表明，‘玉妃和‘超紅桃的最佳取材時間均為5月份，這與劉祥林[3]、周玉碧[4]等的研究結(jié)果相符，分析其原因可能是外植體一般在植株萌動初期取材較為有利，因為此時植株積累了較豐富的營養(yǎng)和內(nèi)源激素， 木質(zhì)化程度較低，其抵抗病菌的能力較強，同時病菌尚未活躍起來，故污染率較低，成活率較高；7、8月份正值病蟲害發(fā)生季節(jié)，外植體材料積累微生物較多，從而造成污染嚴(yán)重，分化能力低，萌發(fā)力較差。石曉東[5]對川中島白桃當(dāng)年生枝條在4月中旬、7月中旬取樣的比較研究中認(rèn)為，7月中旬污染率最高達66.1%，而誘導(dǎo)率最低為23.2%，分析其原因，是與當(dāng)?shù)氐牡乩須夂颦h(huán)境有關(guān)。所以，影響外植體污染率的因素除與植株本身的發(fā)育程度有關(guān)外，還與植株生長的環(huán)境密切相關(guān)。

王小箐等[6]認(rèn)為外植體遺傳因素、生理年齡、極性及取材部位等是影響形態(tài)建成的重要因素。植物的基因型不同，接種成活率差異很大。對于第二適宜取材時間的選擇，則因品種的不同而不同。本研究中‘超紅桃屬于早熟品種，7月份時已完成果實成熟，故7月份取材比6、8月份的成活率要高?！t桃的成活率最高為64%，最低還不到20%，除了外植體取材時間造成的污染原因外，最主要的是跟其本身的特性有關(guān)，比如不同取樣時間里其植株體內(nèi)內(nèi)源激素的含量不同，因而要根據(jù)取樣時間選擇合適的培養(yǎng)基配方，這有待于進一步的研究。參 考 文 獻：

[1] 張安寧， 王金政， 薛曉敏. 早熟桃新品種‘超紅[J]. 園藝學(xué)報， 2006， 33（3）：688.

[2] 張安寧， 劉偉， 王長君， 等.‘玉妃桃及其栽培技術(shù)要點[J]. 落葉果樹， 2013， 45（3）：27-29.

[3] 劉祥林， 湯浩茹. 桃胚培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化的研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2005， 33（6）：1087-1089.

[4] 周玉碧. 桃高效微繁體系的建立與遺傳穩(wěn)定性研究[D]. 蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2005：22-23.

[5] 石曉東. 川中島白桃莖段離體培養(yǎng)研究[D].太谷： 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2005：20-22.

[6] 王小箐， 李玲. 植物生長調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：36. 山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2014，46（11）：52～54endprint

摘 要：從2012年7月到2013年10月，以‘玉妃和‘超紅桃當(dāng)年生枝上帶腋芽的莖段為外植體，研究了不同取樣時間對初代培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明，5月份取樣‘玉妃和‘超紅桃的污染率最低，分別為16%和10%；成活率最高，分別為84%和60%以上。5月份是最佳取樣時間。

關(guān)鍵詞：‘玉妃桃；‘超紅桃；取樣時間；初代培養(yǎng)

中圖分類號：S662.103.6 文獻標(biāo)識號：A 文章編號：1001-4942（2014）11-0050-02

在植物組織培養(yǎng)中，外植體的污染程度和誘導(dǎo)的難易程度是影響植株離體培養(yǎng)繁殖速度的重要因子。外植體表面和內(nèi)部常攜帶一些微生物，是組織培養(yǎng)過程的主要污染源，也是組織培養(yǎng)污染途徑中最難解決的一個。不同季節(jié)外植體的帶菌數(shù)量和種類與取材地點和時間密切相關(guān)，因此選擇合適的取樣時間對桃的組織培養(yǎng)有重要意義。同時，在桃的組織培養(yǎng)過程中，不同時間取材的外植體內(nèi)源激素和營養(yǎng)物質(zhì)含量不同，從而導(dǎo)致初代培養(yǎng)的成活率有差異。目前，關(guān)于‘玉妃和‘超紅桃組織培養(yǎng)的研究尚未見報道。本試驗對兩種桃外植體的取樣時間，特別是整年生長季的取樣時間對初代培養(yǎng)污染率和成活率的影響進行了研究，旨在為兩種桃組織培養(yǎng)的適宜取樣時間提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以山東省果樹研究所桃試驗基地‘玉妃和‘超紅桃為試材?！皴沂窃谌R蕪市萊城區(qū)和莊鎮(zhèn)大英章村發(fā)現(xiàn)的，后經(jīng)高接觀察和嫁接手段連續(xù)4年觀察培養(yǎng)的中熟桃新品系[1]；‘超紅桃是山東省果樹研究所從引自美國的‘White Lady桃的自然雜交實生種中選出，2005年12月通過山東省林木品種審定委員會審定[2]。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體采集 從2012年7月到2013年10月，每月中下旬（兩次取樣間隔25～30 d）從桃試驗基地剪取樹勢健壯的新梢， 新梢長短一致，粗細(xì)均勻，生長勢強，無病蟲害，多分布在樹冠的中部外圍帶芽莖段的新抽枝條，用塑料保鮮膜保濕帶回實驗室，并當(dāng)天進行接種試驗。

1.2.2 外植體處理 去除葉片，將新梢剪為長約2 cm的莖段（每個莖段帶1～2個腋芽），用洗衣粉水浸泡30 min，再用清水洗凈，置于流水下沖洗。于超凈工作臺上，先用70%的酒精浸泡15 s，再用2%次氯酸鈉浸泡15 min，最后用無菌水沖洗4次，無菌濾紙吸干材料表面水分，用滅菌剪刀將莖段上下剪口剪掉0.5 cm左右，接種于MS培養(yǎng)基上（pH 5.8）。兩種桃各接種20瓶，每瓶接種3個外植體，重復(fù)3次。

1.2.3 培養(yǎng)條件 上述外植體接種后均在24～26℃，光照12 h，光強1 000～2 000 lx的條件下培養(yǎng)。10 d后調(diào)查污染率，24 d后調(diào)查成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 取樣時間對‘玉妃桃初代培養(yǎng)污染率和成活率的影響

由圖1可以看出，不同取樣時間對‘玉妃桃初代培養(yǎng)的污染率和成活率有顯著影響。污染率最高的是在2013年8月份（56%），最低是在2013年4月份（10%），而成活率最高的是在2013年5月份（84%），最低是在2012年8月份（31%）。綜合分析，5月份最適宜取樣，此時污染率為16%，且新發(fā)腋芽生長旺盛；其次，4月份污染率最低，僅為10%，而成活率達62%。

2.2 取樣時間對‘超紅桃初代培養(yǎng)污染率和成活率的影響

從圖2可以看出，連續(xù)兩年的8月份污染率都比其它月份高，并且成活率都較低，與其它月份相比差異顯著，所以不適合此時取樣。在2013年4、5月份取樣時，污染率和成活率的差異都不顯著，成活率均在60%以上，而5月份污染率最低為10%。2013年7月份取材的‘超紅桃成活率最高達64%，污染率為22%。綜合比較，5月份比較適合‘超紅桃取樣，其次為4月份和7月份。

3 討論

外植體的選擇是影響桃組培快繁的重要因素，包括外植體的獲取地點、時間及外植體的本身特性等。本試驗結(jié)果表明，‘玉妃和‘超紅桃的最佳取材時間均為5月份，這與劉祥林[3]、周玉碧[4]等的研究結(jié)果相符，分析其原因可能是外植體一般在植株萌動初期取材較為有利，因為此時植株積累了較豐富的營養(yǎng)和內(nèi)源激素， 木質(zhì)化程度較低，其抵抗病菌的能力較強，同時病菌尚未活躍起來，故污染率較低，成活率較高；7、8月份正值病蟲害發(fā)生季節(jié)，外植體材料積累微生物較多，從而造成污染嚴(yán)重，分化能力低，萌發(fā)力較差。石曉東[5]對川中島白桃當(dāng)年生枝條在4月中旬、7月中旬取樣的比較研究中認(rèn)為，7月中旬污染率最高達66.1%，而誘導(dǎo)率最低為23.2%，分析其原因，是與當(dāng)?shù)氐牡乩須夂颦h(huán)境有關(guān)。所以，影響外植體污染率的因素除與植株本身的發(fā)育程度有關(guān)外，還與植株生長的環(huán)境密切相關(guān)。

王小箐等[6]認(rèn)為外植體遺傳因素、生理年齡、極性及取材部位等是影響形態(tài)建成的重要因素。植物的基因型不同，接種成活率差異很大。對于第二適宜取材時間的選擇，則因品種的不同而不同。本研究中‘超紅桃屬于早熟品種，7月份時已完成果實成熟，故7月份取材比6、8月份的成活率要高。‘超紅桃的成活率最高為64%，最低還不到20%，除了外植體取材時間造成的污染原因外，最主要的是跟其本身的特性有關(guān)，比如不同取樣時間里其植株體內(nèi)內(nèi)源激素的含量不同，因而要根據(jù)取樣時間選擇合適的培養(yǎng)基配方，這有待于進一步的研究。參 考 文 獻：

[1] 張安寧， 王金政， 薛曉敏. 早熟桃新品種‘超紅[J]. 園藝學(xué)報， 2006， 33（3）：688.

[2] 張安寧， 劉偉， 王長君， 等.‘玉妃桃及其栽培技術(shù)要點[J]. 落葉果樹， 2013， 45（3）：27-29.

[3] 劉祥林， 湯浩茹. 桃胚培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化的研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2005， 33（6）：1087-1089.

[4] 周玉碧. 桃高效微繁體系的建立與遺傳穩(wěn)定性研究[D]. 蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2005：22-23.

[5] 石曉東. 川中島白桃莖段離體培養(yǎng)研究[D].太谷： 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2005：20-22.

[6] 王小箐， 李玲. 植物生長調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：36. 山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2014，46（11）：52～54endprint