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    生長抑素對大鼠小腸缺血再灌注損傷的保護作用及其機制探討

    2014-12-02 04:34:32賈春志姜騰軒
    山東醫(yī)藥 2014年44期
    關鍵詞:通透性勻漿生長抑素

    賈春志,史 麗,姜騰軒,高 燕

    (沈陽軍區(qū)總醫(yī)院,沈陽 110016)

    小腸缺血再灌注(IR)不僅可以引起腸道組織的局部損害,還可以使腸內細菌和毒素轉移到體循環(huán),從而導致相關介質和細胞因子的大量釋放,嚴重的可發(fā)生多器官功能障礙綜合征[1]。生長抑素可以通過與小腸黏膜粒細胞、淋巴細胞等免疫細胞上的生長抑素受體結合,參與對免疫應答和炎癥反應的調節(jié)。2013年5~8月,我們采用腸系膜上動脈(SMA)夾閉—松夾閉的方法建立大鼠小腸IR模型,觀察生長抑素對大鼠小腸IR的保護作用?,F(xiàn)報告如下。

    1 材料與方法

    1.1 材料 健康雄性SD大鼠40只,體質量250~300 g,由沈陽藥科大學實驗動物中心提供。水合氯醛購于東北制藥集團股份有限公司,生長抑素(思他寧)購于瑞士雪蘭諾公司,γ-放射免疫計數(shù)儀(FJ-2008ps)購于西安核儀器廠,Soniprep150型超聲波發(fā)生器購于上海寧商超聲儀有限公司,酶聯(lián)免疫試劑盒購于上海恒遠生化試劑有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 造模與分組處理 將大鼠隨機分成IR組、缺血組、再灌注組和假手術組各10只,于實驗前10 h禁食,不禁水。腹腔注射水合氯醛0.2 mL/kg麻醉后,仰臥位固定,頸靜脈消毒插管。IR組、缺血組和再灌注組均采用SMA夾閉—松夾閉的方法建立大鼠小腸IR模型:腹部消毒后開腹,確認SMA的主要分支;游離血管后用血管夾阻斷血運,常規(guī)縫合關閉腹腔;1 h后拆開縫線,去掉血管夾;再次將腹壁常規(guī)縫合,經(jīng)1 h再灌注后拆線,取出全部小腸。假手術組僅麻醉、剖腹、關腹,2 h后取標本[2]。其中缺血組于缺血期、再灌注組于再灌注期均持續(xù)泵入生長抑素3.5 μg/(kg·h),IR 組和假手術組均不泵入生長抑素。

    1.2.2 小腸通透性檢測 參照Wattanasirichaigoon等[3]和 Sims等[4]的方法并加以改良。各組取出全部小腸后,取回腸末端7 cm。腸管一端用4-0絲線結扎,輕柔翻轉腸腔;另一端連接注射器并結扎固定,緩慢從注射器向腸囊袋注入1.5 mL PBS緩沖液(pH 7.4),使腸管充分擴張。將腸囊袋懸浮于37℃、溶有125I標記胰島素(分子質量5 000 Da)的100 mL PBS緩沖液中(胰島素濃度0.8 mIU/L),孵育30 min后從腸囊袋內取出1 mL液體,采用γ-放射計數(shù)儀測定胰島素從腸黏膜到漿膜的每分計數(shù)(CPM)。

    1.2.3 小腸組織 TNF-α、IL-1、IL-6檢測 采用ELISA法。各組取小腸組織標本1 000 mg,去除腸道內容物,用37℃生理鹽水清洗腸組織后,于-70℃凍存。取腸組織300 mg在4℃生理鹽水中漂洗,濾紙吸干水分,取組織塊9倍體積的生理鹽水作為勻漿介質。采用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14 μm超聲處理30 s,使細胞破裂。取10%的組織勻漿用低溫低速離心機以3 000 r/min離心15 min,取上清后采用ELISA法檢測腸組織勻漿中的 TNF-α、IL-1、IL-6。

    1.2.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以±s表示,組間比較采用方差檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    各組小腸組織TNF-α、IL-1、IL-6水平和CPM比較,IR組、再灌注組 >缺血組 >假手術組,P均 <0.05;IR組與再灌注組比較,P均>0.05。見表1。

    表1 各組小腸組織勻漿中TNF-α、IL-1、IL-6和CPM比較(n=10,±s)

    表1 各組小腸組織勻漿中TNF-α、IL-1、IL-6和CPM比較(n=10,±s)

    注:與假手術組比較,*P <0.05;與再灌注組比較,#P <0.05;與缺血組比較,△P <0.05

    組別 TNF(pg/g) IL-1(pg/g) IL-6(pg/g)CPM IR 組 1 642.23±136.13*△ 1 899.65±164.64*△ 1 635.68± 94.56*△ 46.36±3.16*△缺血組 1 066.17 ±105.13*# 1 106.47 ±128.80*# 1 097.83 ±159.05*# 22.58 ±1.53*#再灌注組 1 535.04 ± 76.54* 1 897.89 ±264.50* 1 580.48 ±133.32* 45.99 ±3.05*假手術組 687.78 ± 35.40 702.81 ± 78.22 205.98 ± 29.68 17.27 ±1.85

    3 討論

    研究表明,小腸IR不僅可以引起腸道組織的局部損傷,同時也可以造成肝、肺、腎等器官的損害[5,6]??赡苁且驗槟c管缺血導致正常黏膜屏障功能喪失,腸內細菌、內毒素移位,進而激活體內單核/巨噬細胞系統(tǒng),合成一系列細胞因子和炎癥介質。而細胞因子和炎癥介質的大量釋放是導致膿毒癥和多器官障礙綜合征(MODS)的重要原因[7],同時細胞因子和炎癥介質又可以破壞腸黏膜屏障,進一步加劇這一病理過程。呂藝等[8]發(fā)現(xiàn),在正常情況下,大鼠小腸組織中TNF-α和IL-1、IL-6等僅少量表達,腸組織缺血1~1.5 h表達開始增加,再灌注0.5~1 h表達至峰值。同肝、肺組織比較,小腸組織損傷是TNF-α和IL-1、IL-6最先表達升高且幅度最大的部位。由此推斷,小腸是早期炎癥發(fā)生的重要器官,在MODS啟動中起重要作用[9]。

    生長抑素是具有多種生物學效應的肽類激素,分布于內外分泌腺、腦、胃腸道等組織。生長抑素通過與靶細胞上相應的受體結合,發(fā)揮其多樣性的生物學效應[10]。小腸黏膜固有層中含有豐富的生長抑素肽能神經(jīng)纖維,這些肽能神經(jīng)纖維與上皮層及固有層的巨噬細胞、淋巴細胞等免疫細胞相鄰,直接調節(jié)腸道的免疫功能[11]。小腸黏膜中粒細胞、淋巴細胞等免疫細胞上表達多種生長抑素受體,生長抑素通過與這些細胞上的受體結合,影響它們的成熟分化及其對抗原刺激的反應性,進而參與對免疫應答和炎癥反應的調節(jié),能夠抑制多種炎癥細胞釋放TNF-α 和 IL-1、IL-6 等炎癥介質[12,13]。本研究結果顯示,各組小腸組織 TNF-α、IL-1、IL-6水平和 CPM比較,IR組、再灌注組>缺血組>假手術組(P均<0.05),IR組與再灌注組比較則無顯著差異(P均>0.05)。由此可見,小腸組織缺血發(fā)生后,單核/巨噬細胞系統(tǒng)被激活,開始釋放大量TNF-α,然后誘導IL-1、IL-6等生成;由于炎性介質的大量釋放,致使缺血小腸組織的通透性增高。而生長抑素的應用可以抑制由內毒素誘導的TNF-α和IL-1、IL-6等炎癥介質分泌,降低腸組織的通透性,保護了腸黏膜屏障。同時,在缺血期應用生長抑素對腸黏膜具有較好的保護作用,其效果優(yōu)于再灌注期??赡苄∧c缺血期已大量分泌炎癥介質,引起的黏膜屏障和通透性損害已經(jīng)形成,即便再灌注期組織血供恢復并應用生長抑素干預調節(jié),其保護作用也極其有限。

    綜上所述,缺血期應用生長抑素可有效降低大鼠小腸IR組織TNF-α和IL-1、IL-6水平,進而減輕炎癥反應,降低細菌易位率,減輕內毒素血癥;同時可以降低小腸缺血引起的腸黏膜通透性增加,進而改善微循環(huán),有利于促進IR的恢復。

    [1]張春暉,侯亞利,牛春雨,等.腸缺血—再灌注致多器官損傷發(fā)病機制的研究進展[J].中國微循環(huán),2008,12(6):389-392.

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