慢性胃炎及胃癌組織中膜聯(lián)蛋白A1 mRNA的表達(dá)變化及意義

楊 華，楊風(fēng)琴，廖國玲，劉學(xué)英

(1寧夏醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，銀川750004;2寧夏檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究所)

膜聯(lián)蛋白A1(ANXA1)是一種鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，參與抗炎反應(yīng)及細(xì)胞分化、遷移、增殖、凋亡［1］，是細(xì)胞內(nèi)介導(dǎo)糖皮質(zhì)激素抗炎作用的一種效應(yīng)因子［2，3］。ANXA1除具有明顯的抗炎作用外，還與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)［4，5］，但其具體作用機(jī)制尚不清楚。因此，我們采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR(q-PCR)檢測胃癌及慢性胃炎組織中ANXA1 mRNA的表達(dá)，分析其表達(dá)與胃癌臨床病理因素的關(guān)系，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2011年11月～2013年12月收治的手術(shù)治療的胃癌患者40例(胃癌組)，取其手術(shù)切除的癌組織;20例慢性胃炎組織(胃炎組)取自胃鏡檢查患者;均經(jīng)病理證實(shí)，標(biāo)本術(shù)后0.5～1 h凍存于-70℃冰箱備用。胃癌組男28、女12 例，年齡(58.1 ±9.02)歲;高、中分化腺癌23例，低分化腺癌17例;TNM分期Ⅰ期11例，Ⅱ期10例，Ⅲ期19例;胃壁侵犯:T14例、T24例、T312例、T420例;淋巴轉(zhuǎn)移20例，無淋巴轉(zhuǎn)移20例。胃炎組男 14例、女 6例，年齡(54.95±10.83)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 組織標(biāo)本用Trizol提取總RNA。檢測A260～280處吸光值，計(jì)算 RNA含量。q-PCR法測定，按試劑說明操作合成cDNA第1鏈。ANXA1 mRNA上游引物為5'-CCACAACTTCGCAGAGTG-3'，下游引物為 5'-CAGAACGGGAAACCATAA-3';βactin上游引物為5'-AGCGAGCATCCCCCAAAGTT-3'，下游引物為 5'-GGGCACGAAGGCTCATCATT-3'。q-PCR 反應(yīng)總體積 50 μL，含 2.5 × RealMasterMix/20 × SYBR solution 22.5 μL，0.3 μmol/L 的引物 1.5 μL，cDNA模板2 μL。每次檢測均同法加入陰性對(duì)照(不加cDNA)。參照說明書設(shè)定PCR程序:預(yù)變性95 ℃、2 min;95 ℃、15 s，60 ℃、30 s退火，68 ℃、60 s延伸，共40個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣本設(shè)3個(gè)重復(fù)。ANXA1 mRNA相對(duì)表達(dá)量采用 Pfaffl法［6］進(jìn)行分析，如果相對(duì)表達(dá)量＞2.0則為高表達(dá)。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)資料以±s表示，比較采用Mann-Whitney檢驗(yàn)。P≤0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組ANXA1 mRNA表達(dá)比較 胃癌組ANXA1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量為3.89 ±2.06，90%(36/40)的患者ANXA1 mRNA高表達(dá);慢性胃炎組ANXA1 mRNA相對(duì)表達(dá)量為 3.74 ±4.69，75%(15/20)的患者ANXA1 mRNA高表達(dá);兩組比較，P均＞0.05。

2.2 ANXA1 mRNA表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 ANXA1 mRNA表達(dá)與胃癌患者的年齡、性別及胃壁侵犯、TNM分期、組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P均 ＞0.05)。見表1。

表1 ANXA1 mRNA表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(± s)

表1 ANXA1 mRNA表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(± s)

臨床病理參數(shù) n ANXA1 mRNA P年齡(歲)＜60 22 3.68 ±2.25≥60 18 4.14 ±1.84 0.28性別男12 3.72 ±1.50 0.71胃壁侵犯T1 4 3.47 ±0.77 T2 4 3.75 ±2.26 T3 12 4.32 ±2.48 0.58 T4 20 3.74 ±2.02淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N0 20 3.64 ±2.16 N123 20 4.14 ±1.98 0.64 TNM分期Ⅰ11 3.27 ±2.40Ⅱ10 3.72 ±1.27 0.60Ⅲ19 4.34 ±2.17組織分化高、中 23 3.93 ±2.23低17 3.83 ±1.87 28 3.96 ±2.68女0.76

3 討論

慢性炎癥可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，并與腫瘤細(xì)胞形成、逃逸、浸潤、血管生成、轉(zhuǎn)移等多個(gè)環(huán)節(jié)相關(guān)，但確切機(jī)制尚未明確。例如，幽門螺桿菌感染導(dǎo)致的炎癥過程，可由慢性胃炎發(fā)展到胃黏膜萎縮、腸上皮化生、不典型增生，最后可發(fā)展為胃癌［7］。

ANXA1是一種抗炎蛋白。在炎癥反應(yīng)中，ANXA1可以從胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至胞膜，使損傷部位炎性細(xì)胞減少［8］。而且，ANXA1通過抑制磷脂酶A2和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的活化發(fā)揮抗炎作用［3］。此外，ANXA1也參與細(xì)胞的分化、遷移、生長與凋亡［8］。一些研究組通過DNA芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)，ANXA1基因在胃癌發(fā)生中是一個(gè)潛在的標(biāo)記［9，10］。然而，ANXA1在胃癌組織中的作用是不確定的。

在本研究中，我們檢測了胃炎組織與胃癌組織中ANXA1 mRNA的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ANXA1 mRNA在胃癌組織中相對(duì)高表達(dá)，用β-actin參照基因標(biāo)準(zhǔn)化處理后，其中90%的病例呈高表達(dá)水平。同樣，慢性胃炎組織中75%的病例ANXA1 mRNA高表達(dá)(平均相對(duì)表達(dá)量為3.74)，二者之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

ANXA1 mRNA在腫瘤中的表達(dá)過程仍然有限，其結(jié)果是相互矛盾的。例如，在食管鱗狀細(xì)胞癌［11］、鼻腔鼻竇腺癌［12］和乳腺癌［13］等腫瘤中，ANXA1 mRNA 表達(dá)缺失;然而，在腸腺癌［14］、尿道上皮癌［15］和肺腺癌［16］等腫瘤中，ANXA1 mRNA 過度表達(dá)。從而表明，ANXA1表達(dá)水平可能與組織或腫瘤類型有關(guān)。

本研究中，我們也分析了ANXA1 mRNA表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果顯示ANXA1 mRNA表達(dá)與胃癌患者的年齡、性別及胃壁侵犯、TNM分期、組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等沒有相關(guān)性。這可能與樣本數(shù)量過少有關(guān)，進(jìn)一步研究中應(yīng)增大樣本量。

總之，本研究顯示ANXA1 mRNA在慢性胃炎及胃癌組織中均高表達(dá)，提示可能在胃癌發(fā)生的早期階段ANXA1就上調(diào)表達(dá)，但其具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步探討。

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