結(jié)核桿菌PCR對(duì)肺外結(jié)核的早期診斷價(jià)值

高登　肖輝

【摘要】 目的 探討結(jié)核桿菌聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）在肺外結(jié)核病中早期診斷的臨床意義。方法 收集134例標(biāo)本， 分別用抗酸染色法、培養(yǎng)法、PCR法對(duì)結(jié)核桿菌進(jìn)行檢測(cè)比較。結(jié)果 抗酸染色法與PCR法比較陽性率分別為23.4%、53.2%；培養(yǎng)法與PCR法比較陽性率分別為28.3%、47.8%， 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PCR法陽性率比抗酸染色法、培養(yǎng)法分別高出了29.8%、19.5%；并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標(biāo)本PCR法100%陽性， 對(duì)照組PCR法100%陰性。結(jié)論 PCR法對(duì)結(jié)核桿菌的檢測(cè)具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點(diǎn)， 在肺外結(jié)核的早期診斷中具有很好的診斷參考價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)核桿菌聚合酶鏈反應(yīng)；肺外結(jié)核；早期；快速；診斷價(jià)值

肺外結(jié)核是指結(jié)核桿菌感染肺部以外的組織、器官等引起的結(jié)核病。常見的如結(jié)核性腦膜炎、結(jié)核性胸（腹）膜炎、淋巴結(jié)核、腎結(jié)核、骨結(jié)核等。肺結(jié)核的診斷通過流行病學(xué)、影像學(xué)、痰檢等方法診斷已經(jīng)很成熟[1]。肺外結(jié)核由于發(fā)病范圍廣、檢測(cè)所需標(biāo)本如腦脊液、胸腹水等獲取相對(duì)困難、特殊， 與肺結(jié)核相比有其特殊性。因而在肺外結(jié)核中應(yīng)用結(jié)核桿菌PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）技術(shù)能夠準(zhǔn)確、快速的進(jìn)行診斷?，F(xiàn)就本院2009年1月～2014年3月結(jié)核桿菌PCR檢測(cè)的134例標(biāo)本的檢測(cè)， 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 134例結(jié)核桿菌PCR檢測(cè)均為本院的住院患者。其中男83例， 年齡3～78歲， 平均年齡36.3歲；女51例， 年齡5～82歲， 平均年齡30.4歲。134例患者中， 77例被臨床確診為肺外結(jié)核， 為實(shí)驗(yàn)組；57例確診為非肺外結(jié)核， 為對(duì)照組。

1. 2 標(biāo)本 134例標(biāo)本中有胸腹水81例， 腦脊液24例， 尿液13例， 血液8例， 穿刺液8例。以上標(biāo)本均由護(hù)士采集于加蓋的滅菌容器中（血液標(biāo)本用EDTA-K2抗凝血）立即送檢。

1. 3 儀器及方法

1. 3. 1 PCR法 儀器用ABI GeneAmp 5700型基因擴(kuò)增儀， 試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光法）。操作和陰陽性判斷均按照試劑說明書進(jìn)行。

1. 3. 2 抗酸染色法 用萋尼氏抗酸染色法做濃集涂片染色， 按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程， 以-～++++報(bào)告結(jié)果。

1. 3. 3 結(jié)核桿菌培養(yǎng)法 標(biāo)本離心取沉淀物接種到改良羅氏培養(yǎng)基斜面上， 置37℃培養(yǎng)8周。有不透明淡黃色、粗糙、干燥、凸起于培養(yǎng)基或成菜花樣菌落生長并做抗酸染色。符合以上條件者為培養(yǎng)陽性， 否則陰性。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

肺外結(jié)核77例中， PCR法陽性41例， 陽性率53.2% （41/77）；抗酸染色法陽性18例， 陽性率23.4%（18/77）， 并且18例抗酸染色陽性標(biāo)本PCR呈陽性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理， 兩種方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在送檢標(biāo)本中， 有46例做結(jié)核桿菌培養(yǎng)， 陽性13例， 陽性率28.3%（13/46）， 在培養(yǎng)的46例標(biāo)本中PCR法陽性22例， 陽性率47.8%（22/46）， 并且13例培養(yǎng)陽性標(biāo)本PCR法全部陽性。兩法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PCR法陽性結(jié)果數(shù)值5.88×102～3.29×105 copy/ml。涂片陽性在±～+++之間。在對(duì)照組非肺外結(jié)核的57例中， PCR法、抗酸染色法及培養(yǎng)法均為陰性。見表1， 表2。

3 討論

肺外結(jié)核在身體除毛發(fā)、指甲外多器官組織都可發(fā)病， 感染途徑、表現(xiàn)癥狀不盡相同， 診斷方法、檢測(cè)手段也各有不同。多數(shù)患者的病情都被其他病癥所掩蓋。因而早期診斷顯得尤其重要。通常所用的檢查方法中， 結(jié)核菌素試驗(yàn)， 其陽性僅表示受結(jié)核桿菌感染， 并不一定發(fā)病?？顾崛旧芷渌种U菌等的影響， 準(zhǔn)確度、靈敏度都受到一定程度的限制。本次實(shí)驗(yàn)陽性率僅23.4%。大量的病例僅憑這種方法會(huì)漏檢。培養(yǎng)法雖然對(duì)結(jié)核病的診斷比較可靠， 但結(jié)核桿菌生長緩慢， 通常需要2～4周才有菌落生長。另外， 有些病例經(jīng)抗癆藥物治療后， 結(jié)核桿菌受抑制， 需要6～8周甚至20周才出現(xiàn)菌落。更甚者由于抗癆藥物的影響導(dǎo)致細(xì)胞壁缺陷而使培養(yǎng)失敗。也就是說， 培養(yǎng)法準(zhǔn)確度、靈敏度雖可取， 本次實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)法陽性率28.3%， 但重要的一點(diǎn)是：培養(yǎng)法由于耗時(shí)長， 對(duì)臨床的早期診斷和治療基本上是沒有意義的。而PCR法是在特定的反應(yīng)體系中通過樣本中結(jié)核桿菌DNA， 對(duì)其進(jìn)行體外快速、高保真的復(fù)制增殖， 使標(biāo)本中極微量的結(jié)核桿菌DNA被迅速放大到巨大的信號(hào)而被檢測(cè)到， 具有高特異性、高靈敏度、快速簡便等特點(diǎn)。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果其拷貝數(shù)5.88×102～3.29×105 copy/ml足以說明這一點(diǎn)。其陽性率與抗酸染色法、培養(yǎng)法比較， 分別高出了29.8%、19.5%。并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標(biāo)本在PCR法中100%陽性。突顯了PCR法的高準(zhǔn)確度和高靈敏度。此特點(diǎn)已有報(bào)道[2， 3]。PCR法在定性分析中， 因?qū)U(kuò)增產(chǎn)物要進(jìn)行瓊脂電泳， 存在PCR污染問題。可因污染而出現(xiàn)假陽性。但本次實(shí)驗(yàn)是定量分析， 整個(gè)反應(yīng)體系是邊擴(kuò)增邊檢測(cè)， 反應(yīng)體系是一個(gè)密閉的反應(yīng)體系。很少存在污染而呈現(xiàn)假陽性。因而在57例非肺外結(jié)核病例中， PCR法均為陰性。這也從另一方面說明了PCR法的高特異性和高靈敏性。

綜上所述， PCR法檢測(cè)結(jié)核桿菌， 其靈敏度和準(zhǔn)確度明顯高于其他檢測(cè)方法。具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點(diǎn)， 在肺外結(jié)核的早期診斷和治療中具有重要的應(yīng)用價(jià)值， 應(yīng)成為一種成熟的常規(guī)方法而大力推廣。使其在結(jié)核病的診治中發(fā)揮重要的作用。

參考文獻(xiàn)

[1] 金建東.熒光定量PCR檢測(cè)痰結(jié)核桿菌 DNA 及其臨床應(yīng)用.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2010， 31（22）：3565-3566.

[2] 羅振元， 黃盛文， 吳嫻，等.1624例不同類型樣本結(jié)核桿菌DNA檢測(cè)結(jié)果分析.醫(yī)學(xué)信息（上旬刊）， 2010， 23（9）：3376-3378.

[3] 丁娟娟， 陳卓昌.熒光定量PCR檢測(cè)胸腔積液中結(jié)核分支桿菌DNA的臨床研究.山東醫(yī)藥， 2012， 52（20）：71-72.

[收稿日期：2014-07-16]endprint

【摘要】 目的 探討結(jié)核桿菌聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）在肺外結(jié)核病中早期診斷的臨床意義。方法 收集134例標(biāo)本， 分別用抗酸染色法、培養(yǎng)法、PCR法對(duì)結(jié)核桿菌進(jìn)行檢測(cè)比較。結(jié)果 抗酸染色法與PCR法比較陽性率分別為23.4%、53.2%；培養(yǎng)法與PCR法比較陽性率分別為28.3%、47.8%， 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PCR法陽性率比抗酸染色法、培養(yǎng)法分別高出了29.8%、19.5%；并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標(biāo)本PCR法100%陽性， 對(duì)照組PCR法100%陰性。結(jié)論 PCR法對(duì)結(jié)核桿菌的檢測(cè)具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點(diǎn)， 在肺外結(jié)核的早期診斷中具有很好的診斷參考價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)核桿菌聚合酶鏈反應(yīng)；肺外結(jié)核；早期；快速；診斷價(jià)值

肺外結(jié)核是指結(jié)核桿菌感染肺部以外的組織、器官等引起的結(jié)核病。常見的如結(jié)核性腦膜炎、結(jié)核性胸（腹）膜炎、淋巴結(jié)核、腎結(jié)核、骨結(jié)核等。肺結(jié)核的診斷通過流行病學(xué)、影像學(xué)、痰檢等方法診斷已經(jīng)很成熟[1]。肺外結(jié)核由于發(fā)病范圍廣、檢測(cè)所需標(biāo)本如腦脊液、胸腹水等獲取相對(duì)困難、特殊， 與肺結(jié)核相比有其特殊性。因而在肺外結(jié)核中應(yīng)用結(jié)核桿菌PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）技術(shù)能夠準(zhǔn)確、快速的進(jìn)行診斷。現(xiàn)就本院2009年1月～2014年3月結(jié)核桿菌PCR檢測(cè)的134例標(biāo)本的檢測(cè)， 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 134例結(jié)核桿菌PCR檢測(cè)均為本院的住院患者。其中男83例， 年齡3～78歲， 平均年齡36.3歲；女51例， 年齡5～82歲， 平均年齡30.4歲。134例患者中， 77例被臨床確診為肺外結(jié)核， 為實(shí)驗(yàn)組；57例確診為非肺外結(jié)核， 為對(duì)照組。

1. 2 標(biāo)本 134例標(biāo)本中有胸腹水81例， 腦脊液24例， 尿液13例， 血液8例， 穿刺液8例。以上標(biāo)本均由護(hù)士采集于加蓋的滅菌容器中（血液標(biāo)本用EDTA-K2抗凝血）立即送檢。

1. 3 儀器及方法

1. 3. 1 PCR法 儀器用ABI GeneAmp 5700型基因擴(kuò)增儀， 試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光法）。操作和陰陽性判斷均按照試劑說明書進(jìn)行。

1. 3. 2 抗酸染色法 用萋尼氏抗酸染色法做濃集涂片染色， 按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程， 以-～++++報(bào)告結(jié)果。

1. 3. 3 結(jié)核桿菌培養(yǎng)法 標(biāo)本離心取沉淀物接種到改良羅氏培養(yǎng)基斜面上， 置37℃培養(yǎng)8周。有不透明淡黃色、粗糙、干燥、凸起于培養(yǎng)基或成菜花樣菌落生長并做抗酸染色。符合以上條件者為培養(yǎng)陽性， 否則陰性。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

肺外結(jié)核77例中， PCR法陽性41例， 陽性率53.2% （41/77）；抗酸染色法陽性18例， 陽性率23.4%（18/77）， 并且18例抗酸染色陽性標(biāo)本PCR呈陽性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理， 兩種方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在送檢標(biāo)本中， 有46例做結(jié)核桿菌培養(yǎng)， 陽性13例， 陽性率28.3%（13/46）， 在培養(yǎng)的46例標(biāo)本中PCR法陽性22例， 陽性率47.8%（22/46）， 并且13例培養(yǎng)陽性標(biāo)本PCR法全部陽性。兩法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PCR法陽性結(jié)果數(shù)值5.88×102～3.29×105 copy/ml。涂片陽性在±～+++之間。在對(duì)照組非肺外結(jié)核的57例中， PCR法、抗酸染色法及培養(yǎng)法均為陰性。見表1， 表2。

3 討論

肺外結(jié)核在身體除毛發(fā)、指甲外多器官組織都可發(fā)病， 感染途徑、表現(xiàn)癥狀不盡相同， 診斷方法、檢測(cè)手段也各有不同。多數(shù)患者的病情都被其他病癥所掩蓋。因而早期診斷顯得尤其重要。通常所用的檢查方法中， 結(jié)核菌素試驗(yàn)， 其陽性僅表示受結(jié)核桿菌感染， 并不一定發(fā)病?？顾崛旧芷渌种U菌等的影響， 準(zhǔn)確度、靈敏度都受到一定程度的限制。本次實(shí)驗(yàn)陽性率僅23.4%。大量的病例僅憑這種方法會(huì)漏檢。培養(yǎng)法雖然對(duì)結(jié)核病的診斷比較可靠， 但結(jié)核桿菌生長緩慢， 通常需要2～4周才有菌落生長。另外， 有些病例經(jīng)抗癆藥物治療后， 結(jié)核桿菌受抑制， 需要6～8周甚至20周才出現(xiàn)菌落。更甚者由于抗癆藥物的影響導(dǎo)致細(xì)胞壁缺陷而使培養(yǎng)失敗。也就是說， 培養(yǎng)法準(zhǔn)確度、靈敏度雖可取， 本次實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)法陽性率28.3%， 但重要的一點(diǎn)是：培養(yǎng)法由于耗時(shí)長， 對(duì)臨床的早期診斷和治療基本上是沒有意義的。而PCR法是在特定的反應(yīng)體系中通過樣本中結(jié)核桿菌DNA， 對(duì)其進(jìn)行體外快速、高保真的復(fù)制增殖， 使標(biāo)本中極微量的結(jié)核桿菌DNA被迅速放大到巨大的信號(hào)而被檢測(cè)到， 具有高特異性、高靈敏度、快速簡便等特點(diǎn)。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果其拷貝數(shù)5.88×102～3.29×105 copy/ml足以說明這一點(diǎn)。其陽性率與抗酸染色法、培養(yǎng)法比較， 分別高出了29.8%、19.5%。并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標(biāo)本在PCR法中100%陽性。突顯了PCR法的高準(zhǔn)確度和高靈敏度。此特點(diǎn)已有報(bào)道[2， 3]。PCR法在定性分析中， 因?qū)U(kuò)增產(chǎn)物要進(jìn)行瓊脂電泳， 存在PCR污染問題。可因污染而出現(xiàn)假陽性。但本次實(shí)驗(yàn)是定量分析， 整個(gè)反應(yīng)體系是邊擴(kuò)增邊檢測(cè)， 反應(yīng)體系是一個(gè)密閉的反應(yīng)體系。很少存在污染而呈現(xiàn)假陽性。因而在57例非肺外結(jié)核病例中， PCR法均為陰性。這也從另一方面說明了PCR法的高特異性和高靈敏性。

綜上所述， PCR法檢測(cè)結(jié)核桿菌， 其靈敏度和準(zhǔn)確度明顯高于其他檢測(cè)方法。具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點(diǎn)， 在肺外結(jié)核的早期診斷和治療中具有重要的應(yīng)用價(jià)值， 應(yīng)成為一種成熟的常規(guī)方法而大力推廣。使其在結(jié)核病的診治中發(fā)揮重要的作用。

參考文獻(xiàn)

[1] 金建東.熒光定量PCR檢測(cè)痰結(jié)核桿菌 DNA 及其臨床應(yīng)用.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2010， 31（22）：3565-3566.

[2] 羅振元， 黃盛文， 吳嫻，等.1624例不同類型樣本結(jié)核桿菌DNA檢測(cè)結(jié)果分析.醫(yī)學(xué)信息（上旬刊）， 2010， 23（9）：3376-3378.

[3] 丁娟娟， 陳卓昌.熒光定量PCR檢測(cè)胸腔積液中結(jié)核分支桿菌DNA的臨床研究.山東醫(yī)藥， 2012， 52（20）：71-72.

[收稿日期：2014-07-16]endprint

【摘要】 目的 探討結(jié)核桿菌聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）在肺外結(jié)核病中早期診斷的臨床意義。方法 收集134例標(biāo)本， 分別用抗酸染色法、培養(yǎng)法、PCR法對(duì)結(jié)核桿菌進(jìn)行檢測(cè)比較。結(jié)果 抗酸染色法與PCR法比較陽性率分別為23.4%、53.2%；培養(yǎng)法與PCR法比較陽性率分別為28.3%、47.8%， 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PCR法陽性率比抗酸染色法、培養(yǎng)法分別高出了29.8%、19.5%；并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標(biāo)本PCR法100%陽性， 對(duì)照組PCR法100%陰性。結(jié)論 PCR法對(duì)結(jié)核桿菌的檢測(cè)具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點(diǎn)， 在肺外結(jié)核的早期診斷中具有很好的診斷參考價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)核桿菌聚合酶鏈反應(yīng)；肺外結(jié)核；早期；快速；診斷價(jià)值

肺外結(jié)核是指結(jié)核桿菌感染肺部以外的組織、器官等引起的結(jié)核病。常見的如結(jié)核性腦膜炎、結(jié)核性胸（腹）膜炎、淋巴結(jié)核、腎結(jié)核、骨結(jié)核等。肺結(jié)核的診斷通過流行病學(xué)、影像學(xué)、痰檢等方法診斷已經(jīng)很成熟[1]。肺外結(jié)核由于發(fā)病范圍廣、檢測(cè)所需標(biāo)本如腦脊液、胸腹水等獲取相對(duì)困難、特殊， 與肺結(jié)核相比有其特殊性。因而在肺外結(jié)核中應(yīng)用結(jié)核桿菌PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）技術(shù)能夠準(zhǔn)確、快速的進(jìn)行診斷?，F(xiàn)就本院2009年1月～2014年3月結(jié)核桿菌PCR檢測(cè)的134例標(biāo)本的檢測(cè)， 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 134例結(jié)核桿菌PCR檢測(cè)均為本院的住院患者。其中男83例， 年齡3～78歲， 平均年齡36.3歲；女51例， 年齡5～82歲， 平均年齡30.4歲。134例患者中， 77例被臨床確診為肺外結(jié)核， 為實(shí)驗(yàn)組；57例確診為非肺外結(jié)核， 為對(duì)照組。

1. 2 標(biāo)本 134例標(biāo)本中有胸腹水81例， 腦脊液24例， 尿液13例， 血液8例， 穿刺液8例。以上標(biāo)本均由護(hù)士采集于加蓋的滅菌容器中（血液標(biāo)本用EDTA-K2抗凝血）立即送檢。

1. 3 儀器及方法

1. 3. 1 PCR法 儀器用ABI GeneAmp 5700型基因擴(kuò)增儀， 試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光法）。操作和陰陽性判斷均按照試劑說明書進(jìn)行。

1. 3. 2 抗酸染色法 用萋尼氏抗酸染色法做濃集涂片染色， 按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程， 以-～++++報(bào)告結(jié)果。

1. 3. 3 結(jié)核桿菌培養(yǎng)法 標(biāo)本離心取沉淀物接種到改良羅氏培養(yǎng)基斜面上， 置37℃培養(yǎng)8周。有不透明淡黃色、粗糙、干燥、凸起于培養(yǎng)基或成菜花樣菌落生長并做抗酸染色。符合以上條件者為培養(yǎng)陽性， 否則陰性。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

肺外結(jié)核77例中， PCR法陽性41例， 陽性率53.2% （41/77）；抗酸染色法陽性18例， 陽性率23.4%（18/77）， 并且18例抗酸染色陽性標(biāo)本PCR呈陽性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理， 兩種方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在送檢標(biāo)本中， 有46例做結(jié)核桿菌培養(yǎng)， 陽性13例， 陽性率28.3%（13/46）， 在培養(yǎng)的46例標(biāo)本中PCR法陽性22例， 陽性率47.8%（22/46）， 并且13例培養(yǎng)陽性標(biāo)本PCR法全部陽性。兩法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PCR法陽性結(jié)果數(shù)值5.88×102～3.29×105 copy/ml。涂片陽性在±～+++之間。在對(duì)照組非肺外結(jié)核的57例中， PCR法、抗酸染色法及培養(yǎng)法均為陰性。見表1， 表2。

3 討論

肺外結(jié)核在身體除毛發(fā)、指甲外多器官組織都可發(fā)病， 感染途徑、表現(xiàn)癥狀不盡相同， 診斷方法、檢測(cè)手段也各有不同。多數(shù)患者的病情都被其他病癥所掩蓋。因而早期診斷顯得尤其重要。通常所用的檢查方法中， 結(jié)核菌素試驗(yàn)， 其陽性僅表示受結(jié)核桿菌感染， 并不一定發(fā)病?？顾崛旧芷渌种U菌等的影響， 準(zhǔn)確度、靈敏度都受到一定程度的限制。本次實(shí)驗(yàn)陽性率僅23.4%。大量的病例僅憑這種方法會(huì)漏檢。培養(yǎng)法雖然對(duì)結(jié)核病的診斷比較可靠， 但結(jié)核桿菌生長緩慢， 通常需要2～4周才有菌落生長。另外， 有些病例經(jīng)抗癆藥物治療后， 結(jié)核桿菌受抑制， 需要6～8周甚至20周才出現(xiàn)菌落。更甚者由于抗癆藥物的影響導(dǎo)致細(xì)胞壁缺陷而使培養(yǎng)失敗。也就是說， 培養(yǎng)法準(zhǔn)確度、靈敏度雖可取， 本次實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)法陽性率28.3%， 但重要的一點(diǎn)是：培養(yǎng)法由于耗時(shí)長， 對(duì)臨床的早期診斷和治療基本上是沒有意義的。而PCR法是在特定的反應(yīng)體系中通過樣本中結(jié)核桿菌DNA， 對(duì)其進(jìn)行體外快速、高保真的復(fù)制增殖， 使標(biāo)本中極微量的結(jié)核桿菌DNA被迅速放大到巨大的信號(hào)而被檢測(cè)到， 具有高特異性、高靈敏度、快速簡便等特點(diǎn)。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果其拷貝數(shù)5.88×102～3.29×105 copy/ml足以說明這一點(diǎn)。其陽性率與抗酸染色法、培養(yǎng)法比較， 分別高出了29.8%、19.5%。并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標(biāo)本在PCR法中100%陽性。突顯了PCR法的高準(zhǔn)確度和高靈敏度。此特點(diǎn)已有報(bào)道[2， 3]。PCR法在定性分析中， 因?qū)U(kuò)增產(chǎn)物要進(jìn)行瓊脂電泳， 存在PCR污染問題?？梢蛭廴径霈F(xiàn)假陽性。但本次實(shí)驗(yàn)是定量分析， 整個(gè)反應(yīng)體系是邊擴(kuò)增邊檢測(cè)， 反應(yīng)體系是一個(gè)密閉的反應(yīng)體系。很少存在污染而呈現(xiàn)假陽性。因而在57例非肺外結(jié)核病例中， PCR法均為陰性。這也從另一方面說明了PCR法的高特異性和高靈敏性。

綜上所述， PCR法檢測(cè)結(jié)核桿菌， 其靈敏度和準(zhǔn)確度明顯高于其他檢測(cè)方法。具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點(diǎn)， 在肺外結(jié)核的早期診斷和治療中具有重要的應(yīng)用價(jià)值， 應(yīng)成為一種成熟的常規(guī)方法而大力推廣。使其在結(jié)核病的診治中發(fā)揮重要的作用。

參考文獻(xiàn)

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[2] 羅振元， 黃盛文， 吳嫻，等.1624例不同類型樣本結(jié)核桿菌DNA檢測(cè)結(jié)果分析.醫(yī)學(xué)信息（上旬刊）， 2010， 23（9）：3376-3378.

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[收稿日期：2014-07-16]endprint