氣相色譜法同時測定小兒感冒顆粒中百秋李醇、薄荷腦、α-蒎烯、β-蒎烯的含量

江蘇省連云港市藥品檢驗所 （222006） 張小龍

江蘇省連云港市第一人民醫(yī)院 （222002）孫曉

南京中醫(yī)藥大學(xué) （210023）馬新飛 孫思

小兒感冒顆粒是純中藥制劑，處方成分為廣藿香、菊花、連翹、大青葉、板藍(lán)根、地黃、地骨皮、白薇、石膏。具有疏風(fēng)解表，清熱解毒的功效，用于小兒風(fēng)熱感冒、癥見發(fā)熱、頭脹痛、咳嗽痰黏、咽喉腫痛。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對靛藍(lán)進(jìn)行薄層色譜鑒別，無有效成分或指標(biāo)成分的含量測定[1]。廣藿香、薄荷、連翹是小兒感冒顆粒的有效成分，不可或缺。我們?yōu)榭刂飘a(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床療效，對其含有的α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷腦、百秋李醇這四種揮發(fā)性成分的含量進(jìn)行了測定。結(jié)果表明，采用氣相色譜法（GC）分析，靈敏度高，重現(xiàn)性好，便于對小兒感冒顆粒進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 7890B氣相色譜儀；α-蒎烯對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號110897-200502）；β-蒎烯對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號111827-201202）；薄荷腦對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號110728-200506）；百秋李醇對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號110772-200404）；小兒感冒顆粒（廠家提供，規(guī)格6g/袋，批號：1312283，1401121，1402203），氮氣為高純氮，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：HP-5柱（30m×0.32mm×0.25μm）；柱溫采用程序升溫：起始40℃，保持5min，8℃/min升至180℃，保持2.5 min；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測器（FID）溫度：300℃；載氣為氮氣，流速為2.0ml/min；進(jìn)樣量為1μl,分流比為20∶1。

2.2 對照品溶液制備 分別精密稱取α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷腦、百秋李醇對照品適量，用乙酸乙酯溶解制成101.2μg/ml、201.1μg/ml、100.7μg/ml、382.1μg/ml的儲備液；分別精密量取上述儲備液適量，加甲醇稀釋成30.36μg/ml、60.33μg/ml、30.21μg/ml、114.63μg/ml的對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 稱取本品30g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入乙酸乙酯40ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率80KHz）30分鐘，放冷，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液。

2.4 線性范圍 各精密量取上述四種對照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、8.0ml，分別置10ml量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取1μl注入氣相色譜儀進(jìn)行測定，測量峰面積。以對照品濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，經(jīng)線性回歸。結(jié)果表明：α-蒎烯在5.060～80.96μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，其回歸方程為：Y=1.1287X+0.0698，r=0.9999；β-蒎烯在10.06～160.9μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，其回歸方程為：Y=1.0056X+0.6105，r=0.9997；薄荷腦在5.035～80.56μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，其回歸方程為：Y=0.8889X+1.8609，r=0.9997；百秋李醇在19.10～305.7μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，其回歸方程為：Y=0.8872X+29.036，r=0.9998。

2.5 干擾試驗 將除去連翹、薄荷、廣藿香的其它幾味藥按處方所述方法制成陰性供試品，照“2.3”項下操作，精密量取對照品溶液，供試品溶液及陰性對照溶液各1μl，在相同色譜條件下進(jìn)樣測定。色譜圖見附圖。

附圖 小兒感冒顆粒色譜圖 A.對照品 B.供試品 C.陰性對照

2.6 精密度試驗 精密吸取上述同一供試品溶液1μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果α-蒎烯峰面積RSD=1.2%（n=6）；β-蒎烯峰面積RSD=1.4%（n=6）；薄荷腦峰面積RSD=0.8%（n=6）；百秋李醇峰面積RSD=1.1%（n=6）。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一樣品溶液（批號：1312283）溶液1μl，分別在0、3、6、12、18、24h進(jìn)樣，結(jié)果24h內(nèi)升麻素苷峰面積RSD=1.5%（n=7）；β-蒎烯峰面積RSD=0.8%（n=7）；薄荷腦峰面積RSD=1.1%(n=7)；百秋李醇峰面積RSD=1.3%(n=7)。結(jié)果表明，供試液待測組分在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗 取同一樣品（批號：1312283）6份，按樣品測定法操作，測定α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷腦、百秋李醇的含量。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好，α-蒎烯含量RSD=1.5%（n=6）；β-蒎烯含量RSD=1.2%（n=6）；薄荷腦含量RSD=1.0%（n=6）；百秋李醇含量RSD=1.2%（n=6）。

2.9 加樣回收率試驗 取同一樣品（批號：1312283）6份，每份15g，分別加入α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷腦、百秋李醇對照品適量，按“2.3”項操作，進(jìn)樣，測得回收率。結(jié)果表明：α-蒎烯平均回收率為101.75%，RSD為1.3%（n=6）；β-蒎烯平均回收率為102.26%，RSD為1.1%（n=6）；薄荷腦平均回收率為98.32%，RSD為0.8%（n=6）；百秋李醇平均回收率為99.69%，RSD為1.5%（n=6）。

2.10 樣品測定按“2.3”項下條件，分別測定3批小兒感冒顆粒樣品含量，結(jié)果見附表。

3 討論

3.1 提取方法的選擇 在樣品前處理時，參照相關(guān)文獻(xiàn)[2][3][4][5]，分別考察了提取方法和提取時間對于樣品含量的影響。經(jīng)過測定比較，超聲提取所用的提取時間較短，且超聲提取的時間不宜過長，以30min為宜，超聲1h、2h的樣品中α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷腦、百秋李醇的含量均有所下降，故采取超聲處理30min的提取方法。

附表 樣品含量測定（n=6）

考慮到α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷腦、百秋李醇是揮發(fā)性成分，故樣品超聲過濾后濾液的處理方法對其含量有著直接影響，比較濾液自然揮干、水浴蒸干后加乙酸乙酯溶解及直接取續(xù)濾液作為供試品溶液這三種不同方法，發(fā)現(xiàn)自然揮干后α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷腦、百秋李醇的損失量分別為22%、16%、5%、0.7%，僅百秋李醇損失較少；水浴蒸干后四種成分的損失量分別為97%、93%、55%、14%，α-蒎烯和β-蒎烯的含量極少，故為了減少供試品溶液制備過程中的損失，直接采用超聲處理后的續(xù)濾液作為供試品溶液。

3.2 色譜條件的選擇 柱溫是氣相色譜分離的重要參數(shù), 在色譜條件的摸索過程中發(fā)現(xiàn)百秋李醇出峰時間較晚, α-蒎烯和β-蒎烯出峰時間又較接近, 比較多種恒溫和程序升溫方法,在滿足系統(tǒng)適應(yīng)性試驗要求下, 盡可能使樣品中各種成分不在色譜柱中殘留和縮短分析時間，結(jié)果表明，設(shè)定較低的初始溫度可保證α-蒎烯和β-蒎烯色譜峰達(dá)到分離, 采用程序升溫方式可促使百秋李醇較快出峰。因此，本實驗采用起始40℃，保持5min，8℃/min升至180℃，保持2.5 min的程序升溫方式，分離效果較好。