神經(jīng)肽Ghrelin與Nesfatin—1在海人酸致癇大鼠血清中的表達(dá)變化及意義

褚旭 孔慶霞

【摘 要】目的：分析神經(jīng)肽Ghrelin與Nesfatin-1在海人酸致癇大鼠血清中的表達(dá)變化及意義。方法：隨機(jī)將海人酸致癇后的生理鹽水灌注動(dòng)物胃內(nèi)（觀察1組），海人酸致癇后的丙戊灌注動(dòng)物胃內(nèi)（觀察2組），規(guī)定兩組分貝以3h、6h、12h、 24h及3d、7d、14d為時(shí)點(diǎn)亞組；同時(shí)建立空白組（對(duì)照1組）、假手術(shù)組（對(duì)照2組），然后用放射免疫法、ELISA以及免疫組化法來(lái)檢測(cè)其血清變化情況。結(jié)果：Ghrelin、Nesfatin-1的陽(yáng)性表達(dá)是細(xì)胞質(zhì)里面有橢圓形/圓形棕黃色顆粒，和對(duì)照1組、對(duì)照2組相比，觀察1組、觀察2組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的Ghrelin表達(dá)都明顯降低（P<0.05）；同時(shí)觀察1組與觀察2組相比，觀察2組的Ghrelin表達(dá)水平高，特別在灌胃1天、7天后差異很明顯（P<0.05），但<對(duì)照1組。觀察1組、觀察2組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的Nesfatin-1表達(dá)水平均提高（P<0.05），但兩組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的Nesfatin-1表達(dá)水平相比，觀察2組有一定程度的降低（P<0.05），但>對(duì)照1組。結(jié)論：通過(guò)檢測(cè)血清?；疓hrelin、Nesfatin-1的水平，能夠了解下丘腦中對(duì)應(yīng)神經(jīng)肽的變化方向，進(jìn)而為臨床診治癲癇疾病、評(píng)價(jià)療效提供有效參考指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】神經(jīng)肽類；Ghrelin；Nesfatin-1；大鼠；血清

【文章編號(hào)】1004-7484（2014）06-3434-01

Ghrelin、Nesfatin-1是人們攝食過(guò)程中，能夠調(diào)節(jié)平衡能量的兩條重要神經(jīng)肽。現(xiàn)階段醫(yī)學(xué)界的專家們通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)這兩條神經(jīng)肽和癲癇疾病發(fā)作程度、治療效果有緊密聯(lián)系[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

用清潔級(jí)別為（6～8）周齡的雄性Sprague—Dawley大鼠作為本地實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，其體重為（250～280）g，用單籠飼養(yǎng)。隨機(jī)將海人酸致癇后的生理鹽水灌注動(dòng)物胃內(nèi)（觀察1組），海人酸致癇后的丙戊灌注動(dòng)物胃內(nèi)（觀察2組），規(guī)定兩組分貝以3h、6h、12h、 1d及3d、7d、14d為時(shí)點(diǎn)亞組，每個(gè)時(shí)點(diǎn)6只。同時(shí)建立空白組（對(duì)照1組）、假手術(shù)組（對(duì)照2組），每組都是6只。

將海人酸融入無(wú)菌生理鹽水中，達(dá)到1mg/ml的濃度，用65mg/kg濃度為0.5%的戊巴比妥鈉麻醉大鼠，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顱骨水平位固定好大鼠頭部，并參照大鼠腦立體定位圖譜，再用微量注射器與杏仁核保持垂直水平，在硬膜下8.5mm位置，在15分鐘之內(nèi)注射1.0ul的海人酸，大約過(guò)了5分鐘后拔針。林對(duì)對(duì)照2組注入1ul的生理鹽水，按照Racine分級(jí)來(lái)評(píng)定癲癇發(fā)作程度，當(dāng)大鼠出現(xiàn)>Ⅴ級(jí)且連續(xù)5次發(fā)作說(shuō)明模型成功。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

①采集標(biāo)本，首先采集2ml大鼠尾靜脈血，端頭取鬧，當(dāng)血液在室溫條件下凝固約（10～20

）分、以300r/mim的速度離心20min之后收集起來(lái)，放置在零下20度的環(huán)境中保存。用常規(guī)石蠟包埋腦組織，實(shí)施連續(xù)冠狀切片，厚度為6um，并將其放置在經(jīng)防脫片劑處理后的載玻片上面。在溫度為60℃的烤箱中過(guò)夜。

②用放射免疫法（RIA）檢測(cè)Ghrelin、用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè)Nesfatin-1，同時(shí)用免疫組華發(fā)檢測(cè)下丘腦Ghrelin、Nesfatin-1。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

Ghrelin、Nesfatin-1的陽(yáng)性表達(dá)是細(xì)胞質(zhì)里面有橢圓形/圓形棕黃色顆粒，和對(duì)照1組、對(duì)照2組相比，觀察1組、觀察2組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的Ghrelin表達(dá)都明顯降低（P<0.05）；同時(shí)觀察1組與觀察2組相比，觀察2組的Ghrelin表達(dá)水平高，特別在灌胃1天、7天后差異很明顯（P<0.05），但<對(duì)照1組。觀察1組、觀察2組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的Nesfatin-1表達(dá)水平均提高（P<0.05），但兩組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的Nesfatin-1表達(dá)水平相比，觀察2組有一定程度的降低（P<0.05），但高于對(duì)照1組。

3 討論

癲癇作為臨床常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一，嚴(yán)重威脅著人類健康，當(dāng)前診斷癲癇、評(píng)價(jià)治療該疾病的效果主要借助神經(jīng)影像學(xué)技術(shù)、患者臨床特征等。隨著對(duì)癲癇疾病和神經(jīng)肽類物質(zhì)之間聯(lián)系研究的深入，大多數(shù)醫(yī)學(xué)專家們認(rèn)為，當(dāng)患者癲癇發(fā)作時(shí)，其機(jī)體內(nèi)神經(jīng)肽水平會(huì)發(fā)生短暫、明顯的變化，這可以當(dāng)做評(píng)價(jià)影響腦功能代謝、神經(jīng)興奮性變化的重要方法[2]。

全部海人酸致癇大鼠都誘發(fā)了癲癇，致癇組大鼠給藥以后處于麻醉未清醒期，待（82～86）分之后出現(xiàn)節(jié)律性咀嚼，但在其前肢抬起，發(fā)生抽搐之后又迅速跌倒，以抖動(dòng)狀態(tài)結(jié)束，疾病發(fā)作時(shí)間為（2.01～2.73）分。給藥后（6～8）小時(shí)間斷性發(fā)生點(diǎn)頭、前肢陣攣以及面部肌肉抽搐情況，給藥后（8～10）h大多數(shù)大鼠恢復(fù)正?；顒?dòng)，無(wú)顯著性癲癇行為，（1～10）天后發(fā)生反復(fù)自發(fā)性發(fā)作，每隔7天約（1～3）次。本研究表明，海人酸致癇大鼠模型能夠較好地模擬出人類顳葉癲癇疾病的發(fā)生、傳播、形成過(guò)程。定量、定性檢測(cè)下丘腦旁核范圍內(nèi)分泌的Ghrelin、Nesfatin-1，然后和對(duì)照1組、對(duì)照2組進(jìn)行比較可知，致癇組的Ghrelin表達(dá)降低，Nesfatin-1表達(dá)升高，這說(shuō)明了癲癇發(fā)作時(shí)神經(jīng)肽表達(dá)會(huì)產(chǎn)生明顯的變化。

總之，通過(guò)檢測(cè)血清酰基化Ghrelin、Nesfatin-1的水平，能夠了解下丘腦中對(duì)應(yīng)神經(jīng)肽的變化方向，進(jìn)而為臨床診治癲癇疾病、評(píng)價(jià)療效提供有效參考指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 劉諍，王峰.海人酸致癇大鼠神經(jīng)肽Ghrelin和Nesfatin-1的表達(dá)[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2011，5（7）：102-103.