飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿內(nèi)毒素和代謝產(chǎn)物含量的影響

章 森 董國(guó)忠 周 俊 王 璽 邱 敏 雷春龍 靳 露

(西南大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，重慶市牧草與草食家畜重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400716)

瘤胃酸中毒是奶牛飼養(yǎng)過(guò)程中最常見(jiàn)的營(yíng)養(yǎng)代謝病。在現(xiàn)代奶牛生產(chǎn)中，為了提高奶牛產(chǎn)奶量，養(yǎng)殖者往往在奶牛飼糧中使用大量精料，這會(huì)導(dǎo)致瘤胃酸中毒的發(fā)生率大大提高。瘤胃酸中毒分為急性瘤胃酸中毒(ARA)和亞急性瘤胃酸中毒(SARA)。在實(shí)際生產(chǎn)中，SARA更為常見(jiàn)。在SARA條件下，瘤胃內(nèi)會(huì)產(chǎn)生大量?jī)?nèi)毒素(即脂多糖)。瘤胃中的內(nèi)毒素通過(guò)消化道轉(zhuǎn)運(yùn)到血漿中，可引起一系列與之相關(guān)的負(fù)面反應(yīng)，如引起奶牛免疫活化狀態(tài)升高、影響奶牛的營(yíng)養(yǎng)代謝、容易暴發(fā)某些特定疾病或并發(fā)其他營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病，從而影響奶牛的生產(chǎn)性能和健康狀況。研究表明，在SARA條件下，血漿內(nèi)毒素可以使血漿非脂化脂肪酸(NEFA)、葡萄糖和乳酸含量升高，使血漿膽固醇、β-羥丁酸含量降低［1-3］。血漿內(nèi)毒素還可以對(duì)血漿中鈣、鐵、鋅、磷含量產(chǎn)生影響［4-5］，也可使血漿中游離氨基酸含量產(chǎn)生變化［6-7］。但是，關(guān)于SARA條件下，內(nèi)毒素對(duì)奶牛代謝的影響尚缺乏全面的系統(tǒng)研究。本研究針對(duì)現(xiàn)階段我國(guó)奶牛規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)中優(yōu)質(zhì)粗飼料缺乏、精粗比普遍較高的實(shí)際情況，模擬國(guó)內(nèi)常見(jiàn)飼糧模式配制奶牛泌乳高峰期飼糧，研究飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿內(nèi)毒素和代謝產(chǎn)物含量的影響，同時(shí)進(jìn)一步研究血漿內(nèi)毒素與代謝產(chǎn)物含量變化的關(guān)系，為SARA及相關(guān)疾病的機(jī)理研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因素隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，選用經(jīng)產(chǎn)(第2胎)、體況良好及泌乳天數(shù)［(193±21)d］、產(chǎn)奶量和體重相近的荷斯坦奶牛30頭，分為3組，分別為單一秸稈高精料(HCS)組、單一秸稈低精料(LCS)組、混合粗飼料低精料(LMF)組，每組10頭。試驗(yàn)期56 d。

1.2 試驗(yàn)飼糧與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。3組飼糧精飼料種類(lèi)相同。HCS和LMF組飼糧參照NRC(2001)進(jìn)行設(shè)計(jì)，這2組飼糧營(yíng)養(yǎng)水平相同(纖維素水平除外)，但精粗比和粗飼料組成不同。LCS與HCS組粗飼料組成相同，但精粗比和營(yíng)養(yǎng)水平不同。LCS與LMF組精粗比相同，但LCS組的粗飼料品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)水平低于LMF組。

試驗(yàn)期每天定時(shí)(08:30和17:30)飼喂全混合日糧(TMR)，保證每頭牛都有足夠的TMR，且剩料量不超過(guò)投料量的5%。奶牛自由飲水，自由運(yùn)動(dòng)，每天定時(shí)(08:00和19:00)趕至擠奶廳擠奶2次。擠奶設(shè)備為利拉伐擠奶系統(tǒng)，對(duì)設(shè)備每天清洗消毒，擠奶程序嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(DM basis) %

1.3 血液采集及前處理

在試驗(yàn)期第8周的第5天早上飼喂前從尾動(dòng)脈采取血樣10 mL。采集的血樣裝入肝素鈉抗凝管中，經(jīng)3 000 r/min離心10 min，小心吸取血漿分裝入1.5 mL的多支試管，然后保存于-20℃的冰箱中待測(cè)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及測(cè)定方法

1.4.1 血漿內(nèi)毒素含量的測(cè)定

采用顯色基質(zhì)鱟試劑法測(cè)定，測(cè)定用試劑盒購(gòu)自廈門(mén)市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司。

1.4.2 血漿代謝產(chǎn)物含量的測(cè)定

用雙縮脲比色法測(cè)定血漿總蛋白含量，溴甲酚綠比色法測(cè)定血漿白蛋白含量，GOD/HK法測(cè)定血漿葡萄糖含量，膽固醇氧化酶法測(cè)定血漿總膽固醇含量，最后用總蛋白含量減去白蛋白含量得出血漿球蛋白含量，檢測(cè)所用儀器為GF-2280全自動(dòng)生化分析儀(山東高密彩虹分析儀器有限公司)。血漿D-乳酸和NEFA含量利用試劑盒來(lái)測(cè)定，測(cè)定用試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。血漿β-羥丁酸含量采用比色法在日立7160全自動(dòng)生化儀上測(cè)定，測(cè)定用試劑盒購(gòu)自寧波瑞源生物科技有限公司。

血漿游離氨基酸包括賴氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)、異亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)、絲 氨 酸 (Ser)、甘 氨 酸 (Gly)、色 氨 酸(Trp)、谷氨酸(Glu)、纈 氨 酸 (Val)、蘇氨酸(Thr)、鳥(niǎo) 氨 酸(Orn)、胱 氨 酸 (Cys)、組 氨 酸(His)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、脯氨酸(Pro)、丙氨酸(Ala)含量及血漿總游離氨基酸含量采用日立L-8800型氨基酸自動(dòng)分析儀進(jìn)行測(cè)定。操作過(guò)程如下:準(zhǔn)確取血漿樣品0.8 mL于5 mL塑料離心管中，加入0.8 mL 4%磺基水楊酸溶液，振蕩搖勻。將離心管于12 000 r/min離心5 min，用0.22μm濾膜過(guò)濾上機(jī)分析。1個(gè)樣品分析周期為53 min，分析儀有2個(gè)流路和2根柱子。分離柱(4.6 mm×60 mm):洗脫液流經(jīng)此柱，流速0.40 mL/min，柱溫70℃，柱壓13.798 MPa;反應(yīng)柱:茚三酮及茚三酮緩沖液流經(jīng)此柱，流速0.35 mL/min，柱溫135℃，柱壓為0.780 MPa。

1.4.3 血漿礦物元素含量的測(cè)定

用二甲苯胺藍(lán)比色法測(cè)定血漿鎂含量，偶氮砷Ⅲ比色法測(cè)定血漿鈣含量，紫外分光光度法測(cè)定血漿磷含量，所用儀器為GF-2280全自動(dòng)生化分析儀(山東高密彩虹分析儀器有限公司)。血漿鈉、鉀、銅、錳、鋅、鐵、硒含量采用TAS-990FG石墨爐原子吸收分光光度計(jì)(北京普析儀器有限公司)測(cè)定，測(cè)定時(shí)采用自吸扣背景方式。按照儀器系統(tǒng)推薦程序進(jìn)行加熱。血漿樣品用含1 mg/L硝酸鈀的硝酸溶液(1%的硝酸溶液)進(jìn)行稀釋。用標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后算出各個(gè)樣品的元素含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)先用Excel 2003進(jìn)行初步整理分析，再用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件線性模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，考慮的影響因素為試驗(yàn)處理。采用LSD法進(jìn)行多重比較，以 P＜0.01表示差異極顯著，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.10表示有差異趨勢(shì)。所有結(jié)果數(shù)據(jù)以最小二乘均值±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示。最后選取差異顯著的指標(biāo)，用GraphPad Prim 5軟件將其與血漿內(nèi)毒素含量進(jìn)行線性回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿內(nèi)毒素含量的影響

由表2可知，HCS組血漿內(nèi)毒素含量顯著高于LCS組(P＜0.05)，同時(shí)也有高于LMF組的趨勢(shì)(P＞0.05)。

2.2 飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿代謝產(chǎn)物含量的影響

由表3可知，3組奶牛血漿總蛋白、白蛋白、球蛋白、總膽固醇、葡萄糖、D-乳酸含量均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。HCS組血漿NEFA含量分別極顯著高于 LCS和 LMF組(P＜0.01)，而 LCS和LMF組血漿NEFA含量基本一致(P＞0.05)。LCS和LMF組血漿β-羥丁酸含量極顯著高于HCS組(P＜0.01)，而LCS和LMF組血漿β-羥丁酸含量無(wú)顯著差異(P＞0.05)。由圖2可知，血漿內(nèi)毒素和NEFA含量呈極顯著的正相關(guān)(P＜0.01)。由圖3可知，血漿內(nèi)毒素和β-羥丁酸含量呈負(fù)相關(guān)趨勢(shì)(P＜0.10)。

由表4可知，LCS組血漿總游離氨基酸含量顯著低于HCS和LMF組(P＜0.05)。LMF組血漿Lys、Cys和 Asp含量顯著高于 HCS組(P＜0.05)。

表2 飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿內(nèi)毒素含量的影響Table 2 Effects of dietary roughage composition and nutrient levels on plasma endotoxin content in dairy cows

表3 飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿代謝產(chǎn)物含量的影響Table 3 Effects of dietary roughage composition and nutrient levels on plasma metabolite contents in dairy cows

圖1 血漿內(nèi)毒素和NEFA含量的關(guān)系Fig.1 Relationship between plasma contents of endotoxin and EFA

2.3 飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿礦物元素含量的影響

由表5可知，HCS組血漿銅含量極顯著高于LCS和LMF組(P＜0.01)，而 LCS和 LMF組血漿銅含量無(wú)顯著差異(P＞0.05)。LCS和LMF組血漿鐵含量極顯著高于HCS組(P＜0.01)，而LMF組血漿鐵含量顯著高于LCS組(P＜0.05)。LMF組血漿錳含量極顯著高于HCS組(P＜0.01)，也顯著高于LCS組高(P＜0.05)，而LCS組血漿錳含量顯著高于HCS組(P＜0.05)。HCS組血漿鈣含量顯著高于LCS和LMF組(P＜0.05)，而LCS和LMF組血漿鈣含量無(wú)顯著差異(P＞0.05)。HCS組血漿磷含量顯著高于LCS和LMF組(P＜0.05)，而LCS和LMF組血漿磷含量無(wú)顯著差異(P＞0.05)。如圖3所示，血漿內(nèi)毒素與銅含量呈顯著的正相關(guān)(P＜0.05)。如圖4所示，血漿內(nèi)毒素與錳含量呈極顯著的負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。

圖2 血漿內(nèi)毒素和β-羥丁酸含量的關(guān)系Fig.2 Relationship between plasma endotoxin and β-hydroxybutyric acid contents

表4 飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿游離氨基酸含量的影響Table 4 Effects of dietary roughage composition and nutrient levels on plasma free amino acid contents in dairy cows μmol/L

表5 飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿礦物元素含量的影響Table 5 Effects of dietary roughage composition and nutrient levels on plasma mineral element contents in dairy cows

3 討論

3.1 飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿內(nèi)毒素含量的影響

本研究結(jié)果表明，HCS組血漿內(nèi)毒素含量顯著 高 于 LCS 組，與 Andersen 等［8］、Dougherty等［9］、Khafipour 等［1］、張瑞陽(yáng)等［10］、吳永霞［11］的研究結(jié)果一致。在精粗比相同而粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平不同的LCS和LMF組之間，血漿內(nèi)毒素含量的差異不顯著。因此，血漿內(nèi)毒素含量主要受到飼糧精粗比的影響，而飼糧粗飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平的不同對(duì)血漿內(nèi)毒素含量的影響不大。

3.2 飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿代謝產(chǎn)物含量的影響

Zebeli等［2］用高精料飼糧飼喂奶牛，發(fā)現(xiàn)血漿NEFA和葡萄糖含量增高與瘤胃內(nèi)毒素含量升高有很強(qiáng)的一致性，而血漿總膽固醇、β-羥丁酸含量卻隨著瘤胃內(nèi)毒素含量的降低而降低。Ametaji等［3］報(bào)道，增加奶牛飼糧中大麥比例(0、15%、30%、45%)使血漿中葡萄糖和NEFA含量升高，使血漿中β-羥丁酸、總膽固醇含量下降。另外，Waldron等［12］對(duì)泌乳期奶牛靜脈注射內(nèi)毒素，同樣發(fā)現(xiàn)血漿葡萄糖和NEFA含量上升，而血漿中β-羥丁酸含量下降。本研究中，HCS組血漿內(nèi)毒素含量最高，其血漿NEFA含量也是最高，而血漿β-羥丁酸含量最低，與上述研究結(jié)果一致。本研究中，血漿內(nèi)毒素和NEFA含量呈極顯著的正相關(guān)，血漿內(nèi)毒素和β-羥丁酸含量呈負(fù)相關(guān)趨勢(shì)，這也驗(yàn)證了上述研究結(jié)果。盡管3組奶牛血漿葡萄糖和總膽固醇含量差異不顯著，但是它們的變化趨勢(shì)仍然與上述研究結(jié)果相符。

圖3 血漿內(nèi)毒素和銅含量的關(guān)系Fig.3 Relationship between plasma endotoxin and Cu contents

圖4 血漿內(nèi)毒素和錳含量的關(guān)系Fig.4 Relationship between plasma endotoxin and Mn contents

對(duì)于NEFA來(lái)說(shuō)，HCS組飼糧中精料比例高，瘤胃發(fā)酵速度快，所以血漿中NEFA含量會(huì)增高［3］。另外，HCS組血漿內(nèi)毒素含量較高，引起機(jī)體免疫活化，為了滿足機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)能量的需求，奶牛動(dòng)用體脂，因此血漿 NEFA含量升高［3］。另外，LCS和LMF組的血漿NEFA含量無(wú)顯著差異，這說(shuō)明血漿NEFA含量與飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平關(guān)系不大。對(duì)于β-羥丁酸來(lái)說(shuō)，HCS組β-羥丁酸含量低的原因有2個(gè):第一，飼糧中精料比例較高，所發(fā)酵產(chǎn)生的丁酸含量降低，而丁酸是β-羥丁酸的重要前體物質(zhì)，因此β-羥丁酸含量下降。第二，外周血液中的內(nèi)毒素使血漿葡萄糖和胰島素含量升高，而葡萄糖和胰島素繼而刺激肝細(xì)胞，使其生酮作用減弱，因此產(chǎn)生的β-羥丁酸含量減少［3］。在對(duì)奶牛灌注外源內(nèi)毒素的試驗(yàn)中，同樣發(fā)現(xiàn)血漿 β-羥丁酸含量降低［12］。因此，在這2種原因中，可能以第2種為主要原因。另外，LCS和LMF組血漿NEFA和β-羥丁酸含量均無(wú)顯著差異，這說(shuō)明血漿β-羥丁酸含量與飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平關(guān)系不大?？傊?，血漿NEFA和β-羥丁酸含量主要受到飼糧精粗比的影響，并與血漿內(nèi)毒素含量關(guān)系密切，而與飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平關(guān)系不大。

Waggoner等［6-7］在人工注射內(nèi)毒素引起肉牛免疫反應(yīng)的試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)牛血漿中的Lys、Met、Ile、Leu、Phe、Ser、Gly、Trp、Asp、Glu、Val、Thr 和 Orn含量下降，而Cys、His、Gln和Asn含量基本不受影響。張石蕊等［13］用不同精粗比飼糧飼喂南方奶牛時(shí)發(fā)現(xiàn)，高精料組(精粗比為60∶40)的奶牛血漿中Asp、Glu、Ser、Gly、Tyr、His、Met、Val、Phe、Lys 含量比低精料組(精粗比為40∶60)低，同時(shí)高精料組血漿中Ala、Thr、Arg、Leu含量比低精料組高。本研究中，LCS組血漿總游離氨基酸含量同時(shí)低于HCS和LMF組，這是因?yàn)長(zhǎng)CS組營(yíng)養(yǎng)水平低于HCS和LMF組。LCS組粗蛋白質(zhì)含量為13.9%(干物質(zhì)基礎(chǔ))，而HCS和LMF組分別為16.9%和16.8%。因此，LCS組各游離氨基酸含量普遍偏低。HCS和LMF組營(yíng)養(yǎng)水平相近，且HCS組血漿內(nèi)毒素含量比LMF組高，2組間血漿Lys和Asp含量的差異與 Waggoner等［6-7］和張石蕊等［13］的研究結(jié)果一致。2組間血漿Cys含量的差異與 Waggoner等［6-7］和張石蕊等［13］的研究結(jié)果不一致。

事實(shí)上，在動(dòng)物體內(nèi)，Cys參與合成谷胱甘肽和一些自由基清除劑［14］，Asp普遍存在于生物合成作用中，Lys是急性期蛋白的重要組成成分，當(dāng)機(jī)體發(fā)生免疫反應(yīng)時(shí)，它被免疫細(xì)胞吸收并合成急性期蛋白［15］。本研究中，HCS組血漿內(nèi)毒素含量高，機(jī)體免疫狀態(tài)較高，Cys參與抗氧化作用，Asp廣泛參與各種生物合成作用，Lys也參與急性期蛋白的合成，可能導(dǎo)致了HCS組血漿中的這3種氨基酸含量低于LMF組。另外，盡管差異不顯著，但是 HCS 和 LMF 組血漿 Thr、Ser、Glu、Val、Met、Ile、Leu、Tyr、Phe 含量的變化趨勢(shì)與 Waggoner等［6-7］研究結(jié)果一致。綜上所述，飼糧營(yíng)養(yǎng)水平是影響血漿游離氨基酸含量的重要因素，在營(yíng)養(yǎng)水平基本一致的情況下，飼糧精粗比對(duì)奶牛血漿游離氨基酸含量有一定的影響。

3.3 飼糧粗飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)奶牛血漿礦物元素含量的影響

Zebeli等［4］用大麥含量分別為 0、15%、30%和45%的飼糧來(lái)飼喂4組奶牛時(shí)，發(fā)現(xiàn)血漿中鈣、鐵和鋅含量隨著精料含量的升高而呈曲線變化。血漿中鈣、鐵和鋅含量最高的是采食大麥含量為15%飼糧的奶牛;血漿中鈣、鐵和鋅含量最低的是采食大麥含量為45%飼糧的奶牛。Waldron等［5］對(duì)泌乳期的奶牛靜脈灌注大腸桿菌內(nèi)毒素后，發(fā)現(xiàn)血漿鈣、磷含量與內(nèi)毒素含量呈負(fù)相關(guān)性，鎂含量不受內(nèi)毒素含量的影響。本研究中，血漿鐵、鎂和鋅含量變化規(guī)律符合以上研究結(jié)果，而血漿鈣和磷含量不符合以上研究結(jié)果。鞏慶亮［16］用精料含量不同(30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、70%、100%)的飼糧飼喂奶牛時(shí)，發(fā)現(xiàn)血漿鈣、磷、鉀、鐵、銅、錳含量均呈現(xiàn)二次曲線變化，在50%或55%精料組出現(xiàn)拐點(diǎn)，其中45%精料組的血漿鉀、銅、錳、鋅含量均高于 70%精料組，而45%精料組的血漿鈣、磷、鐵含量卻低于70%精料組。本研究中的血漿鈣、磷、鉀、鋅、錳含量變化規(guī)律符合此研究結(jié)果，而血漿鐵、銅含量變化與此研究結(jié)果不符合。

對(duì)于血漿鐵來(lái)說(shuō)，有研究表明，鐵主要參與C反應(yīng)蛋白(CRP)的合成，與機(jī)體的急性期反應(yīng)有關(guān)［17］。本研究中，HCS組精料比例大，血漿內(nèi)毒素含量高，可能導(dǎo)致急性期反應(yīng)強(qiáng)烈，最終可能導(dǎo)致HCS組血漿鐵含量降低。對(duì)于血漿銅來(lái)說(shuō)，銅在某些免疫相關(guān)酶的激活過(guò)程中起著重要作用，在內(nèi)毒素誘導(dǎo)的急性期反應(yīng)中，銅和鋅的相互配合共同穩(wěn)定急性期蛋白的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)［18］。本研究中，HCS組血漿內(nèi)毒素含量高，可能急性期反應(yīng)較強(qiáng)，血漿銅大量用于免疫反應(yīng)，可能導(dǎo)致大量組織內(nèi)儲(chǔ)存的銅進(jìn)入血漿，使血漿銅含量升高。目前，關(guān)于血漿錳和內(nèi)毒素的關(guān)系的報(bào)道還很少，有待于進(jìn)行深入的研究。由圖4和圖5可知，血漿銅和錳含量與內(nèi)毒素含量的關(guān)系密切。另外，LCS和LMF組血漿鐵、錳含量也有顯著的差異，這可能是由于粗飼料組成不同所造成的。

對(duì)于血漿鈣、磷來(lái)說(shuō)，本研究的研究結(jié)果與Zebeli等［4］和 Waldron 等［5］的研究結(jié)果不一致。研究表明，血鈣可以通過(guò)穩(wěn)定急性期蛋白的構(gòu)型以達(dá)到協(xié)助機(jī)體消除內(nèi)毒素的目的［4］，特別是可以促進(jìn)淀粉樣蛋白-A單體聚合成淀粉樣大分子來(lái)發(fā)揮消除內(nèi)毒素的作用［18］。血漿磷能緩沖血液pH。血漿鈣、磷含量可能受到很多因素調(diào)控。Petzl等［19］給奶牛注射內(nèi)毒素(每15 min注射1次)，發(fā)現(xiàn)奶牛會(huì)產(chǎn)生內(nèi)毒素耐受現(xiàn)象，受到240 h LPS刺激的奶牛其耐受性要高于受到70 h內(nèi)毒素刺激的奶牛。Petzl等［19］還指出，產(chǎn)生LPS耐受性的奶牛體內(nèi)的白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α等免疫相關(guān)因子的基因表達(dá)并不活躍。因此，若是長(zhǎng)期用高精料飼糧飼喂奶牛，盡管奶牛血漿內(nèi)毒素含量升高，但是部分奶牛有可能產(chǎn)生內(nèi)毒素耐受現(xiàn)象。另外，Goff等［20］指出，甲狀旁腺素、前列腺素以及造骨細(xì)胞分泌IL-6以刺激破骨細(xì)胞，使之加強(qiáng)破骨作用，從而提高血漿中鈣和無(wú)機(jī)磷含量。動(dòng)物體鈣和磷的平衡主要受2種激素影響:一種是由甲狀旁腺分泌的甲狀旁腺激素，它可促使骨鹽溶解以提高血鈣含量，血漿甲狀旁腺激素含量主要受到血漿鈣含量的調(diào)控;另一種是在腎臟內(nèi)產(chǎn)生的1，25-二羥維生素D3，它是維生素D3的活性形式。本研究是在飼喂奶牛8周后進(jìn)行的血樣采集，這個(gè)時(shí)候部分奶?？赡墚a(chǎn)生內(nèi)毒素耐受現(xiàn)象，加之奶牛自身體液調(diào)節(jié)影響，因此本研究中HCS組的血漿鈣和磷含量并未降低。

4 結(jié)論

①血漿內(nèi)毒素含量隨著飼糧精粗比的升高而升高，而與飼糧營(yíng)養(yǎng)水平及飼糧粗飼料組成關(guān)系不大。

②血漿NEFA、銅、鈣和磷含量隨著飼糧精粗比的升高而升高，血漿β-羥丁酸、錳含量隨著飼糧精粗比的升高而下降，且它們與血漿內(nèi)毒素含量有著密切關(guān)系。血漿游離氨基酸總體上受到飼糧營(yíng)養(yǎng)水平和精粗比的綜合影響。

③飼糧精粗比會(huì)影響血漿中內(nèi)毒素含量，后者進(jìn)而引起血漿部分代謝產(chǎn)物含量的變化。這種變化可能會(huì)對(duì)動(dòng)物健康狀況和生產(chǎn)性能產(chǎn)生影響，值得進(jìn)一步深入研究。

［1］KHAFIPOUR E，KRAUSE D O，PLAIZIER J C.A grain-based subacute ruminal acidosis challenge causes translocation of lipopolysaccharide and triggers inflammation［J］.Journal of Dairy Science，2009，92(3):1060-1070.

［2］ZEBELI Q，DUNN S M，AMETAJB N.Perturbations of plasma metabolites correlated with the rise of rumen endotoxin in dairy cows fed diets rich in easily degradable carbohydrates［J］.Journal of Dairy Science，2011，94(5):2374-2382.

［3］AMETAJ B N，EMMANUEL D G V，ZEBELI Q，et al.Feeding high proportions of barley grain in a total mixed ration perturbs diurnal patterns of plasma metabolites in lactating dairy cows［J］.Journal of Dairy Science，2009，92(3):1084-1091.

［4］ZEBELI Q，DUNN S M，AMETAJ B N.Strong associations among rumen endotoxin and acute phase proteins with plasma minerals in lactating cows fed graded amounts of concentrate［J］.Journal of Animal Science，2010，88(4):1545-1553.

［5］WALDRON M R，NONNECKE B J，ISHIDA T N，et al.Effect of lipopolysaccharide infusion on serum macromineral and vitamin D concentrations in dairy cows［J］.Journal of Dairy Science，2003，86(11):3440-3446.

［6］WAGGONER JW，L?EST C A，TURNER JL，et al.Effects of bacterial endotoxin and dietary protein on serum hormones and plasma amino acids in growing steers［J］.American Society of Animal Science，2007，58:348-351.

［7］WAGGONER JW，L?EST C A，MATHISC P，et al.Effects of rumen-protected methionine supplementation and bacterial lipopolysaccharide infusion on nitrogen metabolism and hormonal responses of growing beef steers［J］.Journal of Animal Science，2009，87(2):681-692.

［8］ANDERSEN P H，BERGELIN B，CHRISTENSEN K A.Effect of feeding regimen on concentration of free endotoxin in ruminal fluid of cattle［J］.Journal of Animal Science，1994，72(2):487-491.

［9］DOUGHERTY R W，COBURN K S，COOK H M，et al.Preliminary study of appearance of endotoxin in circulatory system of sheep and cattle after induced grain engorgement［J］.American Journal of Veterinary Research，1975，36(6):831-832.

［10］張瑞陽(yáng)，王東升，朱偉云，等.奶牛靜脈血內(nèi)毒素濃度及其與產(chǎn)奶量的相關(guān)性［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2012，24(5):822-827.

［11］吳永霞.不同日糧模式對(duì)奶山羊和奶牛血中內(nèi)毒素含量及免疫活化狀態(tài)的影響［D］.碩士學(xué)位論文.重慶:西南大學(xué)，2012:31-41.

［12］WALDRON M R，NISHIDA T，NONNECKE B J，et al.Effect of lipopolysaccharide on indices of peripheral and hepatic metabolism in lactating cows［J］.Journal of Dairy Science，2003，86(11):3447-3459.

［13］張石蕊，易學(xué)武，賀喜，等.不同精粗比全混合日糧飼養(yǎng)技術(shù)對(duì)南方奶牛采食行為、產(chǎn)奶性能和血清游離氨基酸的影響［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2008，17(3):23-30.

［14］WU G，F(xiàn)ANG Y Z，YANG S，et al.Glutathione metabolism and its implications for health［J］.The Journal of Nutrition，2004，134(3):489-492.

［15］REEDSPJ，JAHOOR F.The amino acid requirements of disease［J］.Clinical Nutrition，2001，20(Suppl.1):15-22.

［16］鞏慶亮.不同精料日糧對(duì)奶牛瘤胃需氧及兼性厭氧菌和礦物質(zhì)元素代謝的影響［D］.碩士學(xué)位論文.泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008:47-55.

［17］BLACK S，KUSHNER I，SAMOLSD.C-reactive protein［J］.Journal of Biological Chemistry，2004，279:48487-48490.

［18］WANG L M，COLóN W.Effect of zinc，copper，and calcium on the structure and stability of serum amyloid A［J］.Biochemistry，2007，46(18):5562-5569.

［19］PETZL W，GüNTHER J，PFISTER T，et al.Lipopolysaccharide pretreatment of the udder protects against experimental Escherichia coli mastitis［J］.Innate Immunity，2012，18(3):467-477.

［20］GOFF JP，REINHARDT T A，HORST R L.Enzymes and factors controlling vitamin D metabolism and action in normal and milk fever cows［J］.Journal of Dairy Science，1991，74(11):4022-4032.