HSP90和P23蛋白量和細(xì)胞亞定位在多發(fā)性骨髓瘤患者中的臨床價(jià)值

薛軍　謝曉競(jìng)　高應(yīng)東

[摘要] 目的 尋找預(yù)測(cè)MM患者GC敏感性指標(biāo)。 方法 以MM患者作為研究對(duì)象，采用ELISA法檢測(cè)MM患者血清HSP90濃度，Western Blot檢測(cè)MM患者PBMNC中P23蛋白表達(dá)，探討其與GC抵抗的關(guān)系。 結(jié)果 （1）MM患者血清HSP90含量明顯比正常人高（P<0.05），且GC敏感組患者較GC抵抗組患者高（P<0.05），但各組P23血清濃度之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；（2）P23蛋白低表達(dá)患者和P23蛋白高表達(dá)患者治療有效率分別為86%和33%，二者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在5年隨訪中，前者生存率高于后者（P<0.05）；（3）HSP90和P23蛋白在MM1.S、MM1.R細(xì)胞株以及GC敏感和抵抗的MM患者均位于胞漿內(nèi)，無(wú)定位意義。 結(jié)論 血清HSP90和P23蛋白表達(dá)能預(yù)測(cè)MM患者對(duì)GC的敏感性和生存情況，可用此指標(biāo)指導(dǎo)臨床用藥。

[關(guān)鍵詞] 多發(fā)性骨髓瘤；糖皮質(zhì)激素；熱體克蛋白90；輔分子伴侶P23

[中圖分類號(hào)] R733.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）13-20-04

[Abstract] Objective To find the predicitive indicators of GC sensitivity in the patients with multiple myeloma （MM）. Methods The patients with MM were selected as the study subjects. The ELISA was used to detect the serum heat-shock protein 90 （HSP90） concentraion in the patients with MM and the Western Blot was used to detect the P23 protein expression in PBMNC in the patients with MM， and their relationship with GC resistance was explored. Results （1） The patients with MM had significantly higher HSP90 content than normal people （P<0.05）， and the GC sensitive group was higher than the GC resistant group （P<0.05）， but the P23 serum concentration was not different between each group （P>0.05）； （2） The effective treatment rates of the patients with low P23 protein expression and the patietns with high P23 protein expression were 86% and 33% respectively， with significant difference between the two groups （P<0.05）， and in the 5-year follow-up visit， the former had higher survival rate than the latter （P<0.05）； （3） Both HSP90 and P23 protein existed in the cytoplasm of MM1.S and MM1.R cell strains as well as the the patients with MM who were sensitive and resistant to GC， and had no locating value. Conclusion Serum HSP90 and P23 protein expression can predict the MM patients' sensitivity to GC and survival situation， thus can be used to guide clinical drug use.

[Key words] Multiple myeloma； Glucocorticoids； Heat-shock protein 90； Auxiliary chaperone P23

前期研究顯示[1]：HSP90輔分子伴侶蛋白P23在MM1.S、MM1.R、正常人和MM患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中表達(dá)存在著明顯的差異性，在此基礎(chǔ)之上，我們進(jìn)一步探討多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）患者血清HSP90和P23蛋白含量，以及它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)亞定位水平在糖皮質(zhì)激素抵抗（glucocorticoid resistance）中的作用，以便找到更加簡(jiǎn)便易行的判斷糖皮質(zhì)激素（glucocorticoid，GC）敏感性的實(shí)驗(yàn)方法。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

Western Blot試劑盒購(gòu)自Bio-Rad公司，鼠抗人P23、鼠抗人HSP90及鼠抗人GAPDH單克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz公司。HSP90和P23蛋白ELISA法檢測(cè)試劑盒購(gòu)于上海西康生物科技有限公司。酶標(biāo)儀（美國(guó)BIO-RAD伯樂(lè)680型全自動(dòng)酶標(biāo)儀）。

1.2 臨床資料

取42例MM患者靜脈血5mL，分離血清和單個(gè)核細(xì)胞存于-80℃冰箱備用。42例MM患者來(lái)自南京醫(yī)科大學(xué)南京市第一醫(yī)院血液科，所有患者均符合MM診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。MM患者42例，男性18例，女性24例，年齡53～85歲（平均年齡69歲），初診21例，緩解期13例，復(fù)發(fā)8例，IgG型21例，IgA型13例，輕鏈型6例，末定型2例，選取10名年齡和男女比例相仿的健康人作對(duì)照組?；煼桨赴╒AD（長(zhǎng)春新堿，阿霉素，地塞米松），萬(wàn)珂+地塞米松，MP（馬法蘭，尼松），自體造血干細(xì)胞移植術(shù)。endprint

1.3 療效判斷標(biāo)準(zhǔn)

按國(guó)內(nèi)多發(fā)性骨髓瘤療效判定指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)[3]，達(dá)到完全緩解、部分緩解和進(jìn)步者為糖皮質(zhì)激素敏感，無(wú)效者為糖皮質(zhì)激素抵抗。

1.4 Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)

收集5×106個(gè)細(xì)胞，用蛋白裂解液裂解細(xì)胞后，離心去細(xì)胞碎片，取上清液，經(jīng)Bradford分析方法定量細(xì)胞總蛋白，各組取60mg總蛋白進(jìn)行12% SDS-PAGE，并轉(zhuǎn)印到PVDF膜上，用1%牛血清白蛋白（BSA）和0.05% Tween20封閉非特異性抗原后，一抗4℃溫育過(guò)夜。次日TBST洗膜后，二抗羊抗小鼠IgG-HRP 1∶5000稀釋，37℃溫育1h，TBST洗膜后ECL熒光顯色。蛋白質(zhì)條帶用掃描儀進(jìn)行掃描，以GAPDH條帶作為參照Imagaquent5.1軟件對(duì)蛋白質(zhì)條帶灰度進(jìn)行相對(duì)定量分析。以目的蛋白條帶與GAPDH灰度比值表示蛋白相對(duì)表達(dá)水平（重復(fù)3次）。

1.5 ELISA法檢測(cè)MM患者血清HSP90和P23蛋白質(zhì)含量

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明操作，簡(jiǎn)述如下，激活：首先標(biāo)本激活；加樣：酶標(biāo)板各孔加入待測(cè)已激活血清100μL，混勻后置37℃40min，洗板；加一抗：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4～6次，在濾紙上印干，各孔加入蒸餾水和第一抗體工作液各50μL，充分混勻后置37℃20min，洗板同前；加二抗：各孔加入酶標(biāo)工作液100μL，置37℃暗處反應(yīng)10min，洗板同前；顯色：各孔加入底物工作液100μL，置37℃暗處反應(yīng)15min；終止反應(yīng)：各孔加入100μL終止液混勻，30min內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值，根據(jù)吸光值計(jì)算相應(yīng)HSP90和P23含量（靈敏度：最小的HSP90和P23檢測(cè)濃度分別小于65pg/mL和8pg/mL）。

1.6 細(xì)胞免疫熒光亞細(xì)胞定位

4%多聚甲醛固定細(xì)胞，用PBS溶液洗滌3次，1% triton室溫下通透5min，再用PBS洗滌4～5次；每張切片滴加2滴1% H2O2-甲醇溶液，室溫15～25℃封閉10min，PBS浸洗3次；滴加即用型山羊血清50～100μL，室溫孵育20min；滴加一抗（1∶200稀釋）50～100μL，37℃，濕盒孵育2h，PBS浸洗3次。PBS洗4～5次，滴加熒光二抗，避光反應(yīng)1h，PBS洗4～5次；配置DAPI復(fù)染液，室溫避光孵育5min，防萃滅的熒光封片劑封片，熒光顯微鏡下觀察。

1.7 隨訪

所有患者均采用電話隨訪隨訪，隨訪時(shí)間5年，生存期為患者確診時(shí)間至死亡或最后隨訪的時(shí)間，失訪患者生存期計(jì)算至末次隨訪日。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，生存分析采用Kaplan-Meier法計(jì)算生存率，log-rank法進(jìn)行各組間的生存比較。計(jì)量資料比較用（），組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料統(tǒng)計(jì)分析采用x2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MM患者血清HSP90和P23蛋白質(zhì)含量檢測(cè)結(jié)果

在正常以及應(yīng)急情況下，HSP90大多位于胞漿內(nèi)，然而，細(xì)胞外也存在分泌型HSP90，采用ELISA法檢測(cè)42例MM患者血清HSP90和P23蛋白濃度，結(jié)果顯示：MM患者HSP90血清濃度明顯比正常人增高（23682.73±15834.96） vs（4209.70±890.69），P=0.001<0.05，而且GC敏感組患者較GC抵抗組患者高（34372.64±9050.07）vs（11247.64±10654.64），P=0.01<0.05，但是，各組P23血清濃度沒(méi)有明顯差異（37.37±0.10）vs（43.36±25.10），P=0.38>0.05。這提示MM患者血清HSP90蛋白濃度升高具有特異性，可作為生物標(biāo)記物。見(jiàn)圖1。

2.2 HSP90和P23蛋白在MM1.S，MM1.R細(xì)胞株以及GC敏感和抵抗的MM患者亞細(xì)胞定位

采用細(xì)胞免疫熒光分析方法，檢測(cè)了HSP90和P23蛋白在MM1.S，MM1.R細(xì)胞株以及GC敏感和抵抗MM患者亞細(xì)胞定位，結(jié)果顯示：MM1.S，MM1.R細(xì)胞株以及GC敏感和抵抗的MM患者外周血細(xì)胞單個(gè)核細(xì)胞中，HSP90和P23蛋白都定位于胞漿，核內(nèi)無(wú)此蛋白表達(dá)。見(jiàn)圖2。

2.3 P23蛋白表達(dá)與MM患者對(duì)GC治療療效的關(guān)系

在原先研究的基礎(chǔ)上，擴(kuò)大病例數(shù)，采用Western Blot方法檢測(cè)了40例MM患者PBMNC中HSP90和P23蛋白表達(dá)。P23蛋白低表達(dá)28例，含GC聯(lián)合方案治療有效者24例，有效率為86%，無(wú)效者4例，無(wú)效率為14%；P23蛋白高表達(dá)者12例，含GC聯(lián)合方案治療有效者2例，有效率為33%，無(wú)效者10例，無(wú)效率為67%，二者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這提示P23蛋白表達(dá)量能預(yù)測(cè)GC敏感性。見(jiàn)圖3。

2.4 P23蛋白表達(dá)與患者生存率的關(guān)系

隨訪40例MM患者，隨訪時(shí)間最長(zhǎng)60個(gè)月，中位隨訪時(shí)間27.5個(gè)月（5～60個(gè)月），部分患者失訪，P23蛋白低表達(dá)和P23蛋白高表達(dá)MM患者平均生存時(shí)間分別為55.8個(gè)月和44.4個(gè)月，log-rank檢驗(yàn)結(jié)果顯示P23蛋白低表達(dá)MM患者5年生存率明顯高于P23蛋白高表達(dá)的MM患者（78.6% vs 42.9%，P=0.007<0.05）。見(jiàn)圖4。

3 討論

VAD方案是治療MM最主要方案之一，其反應(yīng)率50%～60%，地塞米松（Dex）在此方案的貢獻(xiàn)率80%，其他聯(lián)合化療方案中大多數(shù)也有Dex，因此能預(yù)測(cè)MM患者對(duì)GC的敏感性就顯得尤其重要。我們?cè)谇捌隗w外實(shí)驗(yàn)中觀察到Dex敏感細(xì)胞株MM1.S和Dex抵抗細(xì)胞珠MM1.R對(duì)Dex敏感性有明顯的差異性[1]，GRα，IkB-α和HSP90蛋白表達(dá)無(wú)差異性，但是P23蛋白表達(dá)在MM1.S、MM1.R細(xì)胞珠、MM患者和正常人中存在明顯的差異性，而且從Brian Freeman和Keith Yamamoto[4]兩位學(xué)者研究報(bào)告也給了我們重要的啟發(fā)，即HSP90以及輔分子伴侶P23是否是調(diào)控GC抵抗的另一種主要分子呢？因此，順此思路，觀察是否MM患者HSP90和P23蛋白分子有可能作為預(yù)測(cè)GC敏感性指標(biāo)。endprint

近來(lái)研究顯示細(xì)胞胞外也有HSP90分子存在[5-6]，Xiaofeng Wang等[7]發(fā)現(xiàn)荷瘤鼠HSP90血清濃度較正常鼠增高，而且HSP90是由腫瘤細(xì)胞分泌的，檢測(cè)6例肝癌患者血清HSP90濃度后發(fā)現(xiàn)顯著高于正常人，并證實(shí)絕大多數(shù)其他種類腫瘤患者HSP90血清濃度都高于設(shè)定的閾值（50ng/mL），而良性腫瘤患者HSP90血清濃度與正常人沒(méi)有差異。Anjian Xu等[8-9]觀察小細(xì)胞肺癌患者血清HSP90水平也升高，而且隨著腫瘤分期級(jí)別增高而增高，采用Western Blot法檢測(cè)人肺腺癌細(xì)胞珠CL1-0和CL1-5無(wú)血清培養(yǎng)介質(zhì)中HSP90α蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)CL1-5培養(yǎng)介質(zhì)中HSP90α蛋白表達(dá)量明顯高于CL1-0細(xì)胞珠的HSP90α蛋白表達(dá)量，作者認(rèn)為HSP90可作為肺癌患者診斷和預(yù)后判斷的血清生物標(biāo)記物。但也有相悖的研究結(jié)果，F(xiàn)lorazagouri等[10-11]發(fā)現(xiàn)血清HSP90水平與乳腺管和腺體損害程度無(wú)相關(guān)性。那么MM患者血清中是否也能檢測(cè)到HSP90，它的臨床意義如何？我們采用ELISA法檢測(cè)MM患者血清HSP90濃度，結(jié)果顯示MM患者HSP90血清濃度明顯高于正常對(duì)照組，GC敏感組患者高于GC抵抗組患者，然而，各組血清P23濃度無(wú)差異性。

P23在腫瘤中的作用是多方面的，研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者P23蛋白高表達(dá)[12-14]，而且腫瘤轉(zhuǎn)移患者的P23蛋白表達(dá)增高，此外，P23使哺乳動(dòng)物細(xì)胞對(duì)HSP90抑制劑和化療藥物格爾德霉素不敏感，從而使得HSP90蛋白及其他復(fù)合物結(jié)構(gòu)功能穩(wěn)定[15-16]。P23蛋白高表達(dá)乳腺癌患者其腫瘤細(xì)胞易轉(zhuǎn)移，易產(chǎn)生耐藥性，患者生存期短，P23蛋白既存在于乳腺癌細(xì)胞珠MCF-7的細(xì)胞核內(nèi)，也存在于細(xì)胞漿，胞漿P23高表達(dá)患者其生存期較短，以上說(shuō)明P23分子在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展中起著一定作用[17]。我們?cè)噲D通過(guò)觀察HSP90和P23蛋白在細(xì)胞定位來(lái)間接判斷MM患者對(duì)GC的敏感性，但遺憾的是MM1.S，MM1.R細(xì)胞株以及GC敏感和抵抗的MM患者外周血細(xì)胞單個(gè)核細(xì)胞中，HSP90和P23蛋白都定位于胞漿，核內(nèi)無(wú)此蛋白表達(dá)，細(xì)胞免疫熒光法是否粗略，采用共聚焦顯微鏡成像法可能更精密，這有待以后實(shí)驗(yàn)證明。我們還觀察了P23蛋白表達(dá)與臨床相關(guān)性，結(jié)果顯示P23蛋白表達(dá)與GC敏感性和疾病生存期長(zhǎng)短有相關(guān)性，盡管病例數(shù)不多，但它首次提出了可用HSP90和P23兩項(xiàng)指標(biāo)預(yù)測(cè)MM患者GC敏感性。

總之，我們的研究結(jié)果顯示血清HSP90濃度和P23蛋白表達(dá)可預(yù)測(cè)MM患者GC敏感性和疾病生存期，尋求降低P23蛋白表達(dá)的藥物從而為逆轉(zhuǎn)GC抵抗，進(jìn)一步提高M(jìn)M患者的化療療效是非常重要的，因此，以P23為靶向治療有望逆轉(zhuǎn)化療藥物抵抗，預(yù)防疾病復(fù)發(fā)，提高M(jìn)M患者生存期。

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（收稿日期：2014-03-27）endprint

近來(lái)研究顯示細(xì)胞胞外也有HSP90分子存在[5-6]，Xiaofeng Wang等[7]發(fā)現(xiàn)荷瘤鼠HSP90血清濃度較正常鼠增高，而且HSP90是由腫瘤細(xì)胞分泌的，檢測(cè)6例肝癌患者血清HSP90濃度后發(fā)現(xiàn)顯著高于正常人，并證實(shí)絕大多數(shù)其他種類腫瘤患者HSP90血清濃度都高于設(shè)定的閾值（50ng/mL），而良性腫瘤患者HSP90血清濃度與正常人沒(méi)有差異。Anjian Xu等[8-9]觀察小細(xì)胞肺癌患者血清HSP90水平也升高，而且隨著腫瘤分期級(jí)別增高而增高，采用Western Blot法檢測(cè)人肺腺癌細(xì)胞珠CL1-0和CL1-5無(wú)血清培養(yǎng)介質(zhì)中HSP90α蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)CL1-5培養(yǎng)介質(zhì)中HSP90α蛋白表達(dá)量明顯高于CL1-0細(xì)胞珠的HSP90α蛋白表達(dá)量，作者認(rèn)為HSP90可作為肺癌患者診斷和預(yù)后判斷的血清生物標(biāo)記物。但也有相悖的研究結(jié)果，F(xiàn)lorazagouri等[10-11]發(fā)現(xiàn)血清HSP90水平與乳腺管和腺體損害程度無(wú)相關(guān)性。那么MM患者血清中是否也能檢測(cè)到HSP90，它的臨床意義如何？我們采用ELISA法檢測(cè)MM患者血清HSP90濃度，結(jié)果顯示MM患者HSP90血清濃度明顯高于正常對(duì)照組，GC敏感組患者高于GC抵抗組患者，然而，各組血清P23濃度無(wú)差異性。

P23在腫瘤中的作用是多方面的，研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者P23蛋白高表達(dá)[12-14]，而且腫瘤轉(zhuǎn)移患者的P23蛋白表達(dá)增高，此外，P23使哺乳動(dòng)物細(xì)胞對(duì)HSP90抑制劑和化療藥物格爾德霉素不敏感，從而使得HSP90蛋白及其他復(fù)合物結(jié)構(gòu)功能穩(wěn)定[15-16]。P23蛋白高表達(dá)乳腺癌患者其腫瘤細(xì)胞易轉(zhuǎn)移，易產(chǎn)生耐藥性，患者生存期短，P23蛋白既存在于乳腺癌細(xì)胞珠MCF-7的細(xì)胞核內(nèi)，也存在于細(xì)胞漿，胞漿P23高表達(dá)患者其生存期較短，以上說(shuō)明P23分子在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展中起著一定作用[17]。我們?cè)噲D通過(guò)觀察HSP90和P23蛋白在細(xì)胞定位來(lái)間接判斷MM患者對(duì)GC的敏感性，但遺憾的是MM1.S，MM1.R細(xì)胞株以及GC敏感和抵抗的MM患者外周血細(xì)胞單個(gè)核細(xì)胞中，HSP90和P23蛋白都定位于胞漿，核內(nèi)無(wú)此蛋白表達(dá)，細(xì)胞免疫熒光法是否粗略，采用共聚焦顯微鏡成像法可能更精密，這有待以后實(shí)驗(yàn)證明。我們還觀察了P23蛋白表達(dá)與臨床相關(guān)性，結(jié)果顯示P23蛋白表達(dá)與GC敏感性和疾病生存期長(zhǎng)短有相關(guān)性，盡管病例數(shù)不多，但它首次提出了可用HSP90和P23兩項(xiàng)指標(biāo)預(yù)測(cè)MM患者GC敏感性。

總之，我們的研究結(jié)果顯示血清HSP90濃度和P23蛋白表達(dá)可預(yù)測(cè)MM患者GC敏感性和疾病生存期，尋求降低P23蛋白表達(dá)的藥物從而為逆轉(zhuǎn)GC抵抗，進(jìn)一步提高M(jìn)M患者的化療療效是非常重要的，因此，以P23為靶向治療有望逆轉(zhuǎn)化療藥物抵抗，預(yù)防疾病復(fù)發(fā)，提高M(jìn)M患者生存期。

[參考文獻(xiàn)]

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[16] G Elif， Karag， Afonso MS， et al. N-terminal domain of human Hsp90 triggers binding to the cochaperone p23[J].PNAS，2011，108（2）：580-585.

[17] Natalie ES， Marcus Lambert W， Renecia Watkins， et al.High levels of HSP90 cochaperone P23 Promotes tumor progression and poor prognosis in breast cancer by increasing lymph node metastases and drug resistance[J]. Cancer Res，2010，70（21）： 8446-8456.

（收稿日期：2014-03-27）endprint

近來(lái)研究顯示細(xì)胞胞外也有HSP90分子存在[5-6]，Xiaofeng Wang等[7]發(fā)現(xiàn)荷瘤鼠HSP90血清濃度較正常鼠增高，而且HSP90是由腫瘤細(xì)胞分泌的，檢測(cè)6例肝癌患者血清HSP90濃度后發(fā)現(xiàn)顯著高于正常人，并證實(shí)絕大多數(shù)其他種類腫瘤患者HSP90血清濃度都高于設(shè)定的閾值（50ng/mL），而良性腫瘤患者HSP90血清濃度與正常人沒(méi)有差異。Anjian Xu等[8-9]觀察小細(xì)胞肺癌患者血清HSP90水平也升高，而且隨著腫瘤分期級(jí)別增高而增高，采用Western Blot法檢測(cè)人肺腺癌細(xì)胞珠CL1-0和CL1-5無(wú)血清培養(yǎng)介質(zhì)中HSP90α蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)CL1-5培養(yǎng)介質(zhì)中HSP90α蛋白表達(dá)量明顯高于CL1-0細(xì)胞珠的HSP90α蛋白表達(dá)量，作者認(rèn)為HSP90可作為肺癌患者診斷和預(yù)后判斷的血清生物標(biāo)記物。但也有相悖的研究結(jié)果，F(xiàn)lorazagouri等[10-11]發(fā)現(xiàn)血清HSP90水平與乳腺管和腺體損害程度無(wú)相關(guān)性。那么MM患者血清中是否也能檢測(cè)到HSP90，它的臨床意義如何？我們采用ELISA法檢測(cè)MM患者血清HSP90濃度，結(jié)果顯示MM患者HSP90血清濃度明顯高于正常對(duì)照組，GC敏感組患者高于GC抵抗組患者，然而，各組血清P23濃度無(wú)差異性。

P23在腫瘤中的作用是多方面的，研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者P23蛋白高表達(dá)[12-14]，而且腫瘤轉(zhuǎn)移患者的P23蛋白表達(dá)增高，此外，P23使哺乳動(dòng)物細(xì)胞對(duì)HSP90抑制劑和化療藥物格爾德霉素不敏感，從而使得HSP90蛋白及其他復(fù)合物結(jié)構(gòu)功能穩(wěn)定[15-16]。P23蛋白高表達(dá)乳腺癌患者其腫瘤細(xì)胞易轉(zhuǎn)移，易產(chǎn)生耐藥性，患者生存期短，P23蛋白既存在于乳腺癌細(xì)胞珠MCF-7的細(xì)胞核內(nèi)，也存在于細(xì)胞漿，胞漿P23高表達(dá)患者其生存期較短，以上說(shuō)明P23分子在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展中起著一定作用[17]。我們?cè)噲D通過(guò)觀察HSP90和P23蛋白在細(xì)胞定位來(lái)間接判斷MM患者對(duì)GC的敏感性，但遺憾的是MM1.S，MM1.R細(xì)胞株以及GC敏感和抵抗的MM患者外周血細(xì)胞單個(gè)核細(xì)胞中，HSP90和P23蛋白都定位于胞漿，核內(nèi)無(wú)此蛋白表達(dá)，細(xì)胞免疫熒光法是否粗略，采用共聚焦顯微鏡成像法可能更精密，這有待以后實(shí)驗(yàn)證明。我們還觀察了P23蛋白表達(dá)與臨床相關(guān)性，結(jié)果顯示P23蛋白表達(dá)與GC敏感性和疾病生存期長(zhǎng)短有相關(guān)性，盡管病例數(shù)不多，但它首次提出了可用HSP90和P23兩項(xiàng)指標(biāo)預(yù)測(cè)MM患者GC敏感性。

總之，我們的研究結(jié)果顯示血清HSP90濃度和P23蛋白表達(dá)可預(yù)測(cè)MM患者GC敏感性和疾病生存期，尋求降低P23蛋白表達(dá)的藥物從而為逆轉(zhuǎn)GC抵抗，進(jìn)一步提高M(jìn)M患者的化療療效是非常重要的，因此，以P23為靶向治療有望逆轉(zhuǎn)化療藥物抵抗，預(yù)防疾病復(fù)發(fā)，提高M(jìn)M患者生存期。

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[6] 王琪琳，劉相國(guó).抑制Hsp90誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究[D].山東：山東大學(xué)，2013：13-26.

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[8] Anjian Xu， Tian Tian， Jia Hao，et al. Elevation of Serum HSP90α Correlated with the Clinical Stage of Non-Small Cell Lung Cancer[J].J Cancer Mol，2007，3（4）： 107-112.

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[10] Flora Zagouri， Theodoros N.Sergentanis， Xeni Provato Poulou， et al. Serum Levels of HSP90 in the Continuum of Breast Ductal and Lobular Lesions[J].In Vivo，2011，25（4）： 669-672.

[11] 李詩(shī)杰，任學(xué)群. 胰腺癌組織中熱休克蛋白90α的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013（15）：66-68.

[12] 文忠，肖健云，郭夢(mèng)和.端粒酶催化亞單位在腫瘤特異基因治療作用中的研究[J].腫瘤防治研究，2005，32（2）：122-123.

[13] Oxelmark E， Roth JM， Brooks PC， et al. The cochaperone P23 differentially regulates estrogen receptor target genes and Promotes tumor cell adhesion and invasion[J].Mol Cell Biol，2006（26）： 5205-13.

[14] 滿曉輝，徐巖，王振寧，等.賁門癌中染色體8p21-p23雜合性丟失的研究[J].遺傳，2006，28（6）：641-645.

[15] Forafonov F， Toogun OA， Grad I， et al.P23/Sba1P protects against HSP90 inhibitors independently of its intrinsic chaperone activity[J].Mol Cell Biol，2008（28）： 3446-56.

[16] G Elif， Karag， Afonso MS， et al. N-terminal domain of human Hsp90 triggers binding to the cochaperone p23[J].PNAS，2011，108（2）：580-585.

[17] Natalie ES， Marcus Lambert W， Renecia Watkins， et al.High levels of HSP90 cochaperone P23 Promotes tumor progression and poor prognosis in breast cancer by increasing lymph node metastases and drug resistance[J]. Cancer Res，2010，70（21）： 8446-8456.

（收稿日期：2014-03-27）endprint