油酸二次靜脈注射法復制家兔ARDS模型的效果評析

白宗江+許鐵+杜葉平

【摘要】目的：觀察油酸（oleic acid，OA）二次靜脈注射法復制ARDS家兔模型的效果。方法：采用OA二次靜脈注射方法復制ARDS家兔模型。經(jīng)耳緣靜脈分2次緩慢注射OA（0.1ml/kg），第一次注射0.1ml，間隔10min后給予剩余量。健康成年雌性家兔12只，應(yīng)用隨機數(shù)字表法將實驗動物隨機分為空白對照組（CON），ARDS組（OA），每組6只家兔。光學顯微鏡觀察肺組織病理切片變化，觀察CON組干預5h和OA組干預1h、5h后家兔血氣分析結(jié)果，觀察各組肺干濕重比。結(jié)果：肺組織HE染色病理切片示，CON組肺泡壁結(jié)構(gòu)基本正常。OA組肺組織病理變化基本符合ARDS肺組織病理變化，可見肺組織出血、炎性細胞浸潤、肺泡內(nèi)滲出液以及肺泡內(nèi)透明膜形成。與CON組比較，OA組在1h及5h檢測PaO2、PaO2/FiO2均顯著降低，差異統(tǒng)計學意義（P<0.05）。OA組于5h復測血氣分析示較1h測量PaO2、PaO2/FiO2升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。CON組與OA組各時間點所測PaCO2無統(tǒng)計學差異。與CON組比較，OA組D/W顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：OA二次靜脈注射法可在短時間內(nèi)成功復制ARDS家兔模型，并較傳統(tǒng)給藥方法家兔存活率提高。

【關(guān)鍵詞】急性呼吸窘迫綜合征；油酸；氧合指數(shù)

靜脈注射OA是復制ARDS模型的經(jīng)典方法之一，它具有可重復性高、操作簡便等優(yōu)點。然而，應(yīng)用動物復制傳統(tǒng)給藥方法的油酸型ARDS模型具有約15%～30%的死亡率[1-3]。本實驗旨在觀察改良后的OA二次靜脈注射法所復制ARDS家兔模型肺組織病理變化、血氣分析結(jié)果和肺干濕重比，評價OA二次靜脈注射法復制ARDS家兔模型的效果。

資料與方法

實驗試劑：OA（Purity>98%）購自生工生物工程（上海）股份有限公司；戊巴比妥鈉粉劑購自徐州醫(yī)學院（德國分裝，分子式C11H17O3N2Na，分子量246.26，Lot.No.WS20080810）。

實驗動物及分組：健康成年雌性家兔12只，體重2.0～3.0kg。徐州醫(yī)學院實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（蘇）2011-0037。所有動物飼養(yǎng)和實驗操作程序符合徐州醫(yī)學院實驗動物福利倫理委員會相關(guān)規(guī)定，并經(jīng)徐州醫(yī)學院動物倫理委員會批準。應(yīng)用隨機數(shù)字表法將實驗動物隨機分為空白對照組（CON組），ARDS組（OA組），每組6只家兔。

實驗方法：家兔稱重后耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉（30mg/kg），麻醉穩(wěn)定后將家兔仰臥位固定在兔臺上。OA組經(jīng)耳緣靜脈分2次緩慢注射OA（0.1ml/kg），第一次注射0.1ml，間隔10min后給予剩余量；CON組經(jīng)耳緣靜脈分2次緩慢注射生理鹽水（0.1ml/kg），第一次注射0.1ml，間隔10min后給予剩余量。

標本的采集及檢測：OA組于干預1h和5h后經(jīng)頸動脈抽取動脈血檢測氧分壓和二氧化碳分壓。CON組于干預5h后動脈抽取動脈血檢測氧分壓和二氧化碳分壓。過量麻醉法處死家兔，開胸取左上肺4%甲醛固定，石蠟包埋，切片行HE染色觀察肺組織病理變化。取右下肺用冷生理鹽水沖去殘血，測量肺濕重（W）后放入80℃烤箱中7天后取出測量干重（D），計算肺干濕重比（D/W）。

統(tǒng)計學方法：SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以 ±s表示，組間比較采用單因素方差分析，方差齊則用SNK法檢測，方差不齊則用Dunnett's T3法檢測。檢驗水準：α=0.05，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

關(guān)于ARDS模型制備：根據(jù)ARDS“柏林定義”[4]，OA組于干預1h后血氣分析檢測示家兔氧合指數(shù)均已達到ARDS診斷標準，即PaO2/FiO2≤300。本實驗選擇健康成年家兔，且實驗過程中嚴格限制靜脈入水量，可排除心功能不全及液體過量負荷所導致的肺水腫。故可認為ARDS家兔模型復制成功。在干預5h過程中OA組家兔均存活下來。

肺組織病理學（見圖1，×400倍）：肺組織HE染色病理切片示，CON組肺泡壁結(jié)構(gòu)基本正常。OA組肺組織病理變化基本符合ARDS肺組織病理變化，可見肺組織出血、炎性細胞浸潤、肺泡內(nèi)滲出液以及肺泡內(nèi)透明膜形成。

PaO2、PaCO2、PaO2/FiO2及肺干濕重比：與CON組比較，OA組在1h及5h檢測PaO2、PaO2/FiO2均顯著降低，差異統(tǒng)計學意義（P<0.05）。OA組于5h復測血氣分析示較1h測量PaO2、PaO2/FiO2升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。CON組與OA組各時間點所測PaCO2無統(tǒng)計學差異。與CON組比較，OA組D/W顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

討論

自1968年由Ashbaugh DG等人首次報道用OA成功復制非心源性肺水腫動物模型后，將OA應(yīng)用于ARDS的研究報道逐漸增多[5]。靜脈注射OA通過刺激肺動脈血管收縮、直接損傷肺泡毛細血管內(nèi)皮細胞和抑制鈉離子通道從而促進ARDS的發(fā)生，其次OA通過刺激機體氧化應(yīng)激反應(yīng)、增高促凝血活性等機制加重肺損傷反應(yīng)[6-7]。研究表明OA導致動物模型死亡主要與血流動力學不穩(wěn)定相關(guān)[8]，注射OA的動物在1h內(nèi)出現(xiàn)低血壓和心輸出量降低。本實驗旨在通過改良OA給藥方法，以達到在復制ARDS模型的同時提高動物生存率的目的。

實驗結(jié)果示，OA組于干預1h后檢測血氣分析示氧合指數(shù)已達到ARDS診斷標準，OA組肺組織HE染色病理切片亦符合ARDS病理變化。與CON組比較，OA組各時間段PaO2、PaO2/FiO2、肺干濕重比均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。提示注射OA后，家兔出現(xiàn)低氧血癥、肺水腫，這符合ARDS的病理生理變化。證實OA二次靜脈注射法可成功復制ARDS模型。OA組家兔于干預5h后均存活，提示OA二次靜脈注射法較傳統(tǒng)給藥法有助于提高ARDS家兔存活率。必須指出，OA組于5h復測血氣分析比較1h測量PaO2、PaO2/FiO2升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），這可能是由于油酸作為一種有毒脂肪酸進入家兔體內(nèi)后，在急性毒理作用后家兔機體自我修復的結(jié)果。表明家兔作為一種實驗動物，可以一定程度上對抗OA的毒理作用，減少家兔死亡率。

綜上所述，OA二次靜脈注射法可在短時間內(nèi)成功復制ARDS家兔模型，并較傳統(tǒng)給藥方法家兔存活率提高。家兔性格溫馴，易于進行實驗。然而，本實驗為小樣本實驗，且持續(xù)時間短，需大樣本長期實驗進一步評估OA二次靜脈注射法在ARDS家兔模型中的效果。

參考文獻

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[3]Mutch WA，Harms S，Lefevre GR，et al.Biologically variable ventilation increases arterial oxygenation over that seen with positive end-expiratory pressure alone in a porcine model of acute respiratory distress syndrome[J].Crit Care Med.2000，28：2457-2464.

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[7]陸月明.油酸致急性肺損傷動物模型析評[J].中華急診醫(yī)學雜志，2005，14（1）：81-83.

[8]王強等.兩種用油酸誘導的幼豬急性肺損傷模型血流動力學變化的對比分析[J].心肺血管病雜志，2009，28（5）：351-355.

綜上所述，OA二次靜脈注射法可在短時間內(nèi)成功復制ARDS家兔模型，并較傳統(tǒng)給藥方法家兔存活率提高。家兔性格溫馴，易于進行實驗。然而，本實驗為小樣本實驗，且持續(xù)時間短，需大樣本長期實驗進一步評估OA二次靜脈注射法在ARDS家兔模型中的效果。

參考文獻

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綜上所述，OA二次靜脈注射法可在短時間內(nèi)成功復制ARDS家兔模型，并較傳統(tǒng)給藥方法家兔存活率提高。家兔性格溫馴，易于進行實驗。然而，本實驗為小樣本實驗，且持續(xù)時間短，需大樣本長期實驗進一步評估OA二次靜脈注射法在ARDS家兔模型中的效果。

參考文獻

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