西南三地區(qū)野生香菇ISSR遺傳多樣性分析

張婉潔+何德+李翠新+李季+

摘要：采用ＩＳＳＲ分子標(biāo)記技術(shù)對云南省大姚縣、瑞麗市和四川省木里縣的４１株野生香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）菌株進行ＤＮＡ聚類分析，利用ＮＴＳＹＳ軟件對其遺傳多樣性進行聚類分析。結(jié)果表明，利用１８個引物對４１個野生香菇菌株的ＤＮＡ進行ＩＳＳＲ－ＰＣＲ擴增，共擴增出１６２條清晰的ＤＮＡ片段。聚類分析結(jié)果表明，相似水平在６２％左右時，４１株野生香菇菌株分為３個類群，各地香菇資源存在較豐富的遺傳多樣性且與地域無明顯相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）；ＩＳＳＲ；遺傳多樣性；ＤＮＡ聚類分析

中圖分類號：Ｓ６４６．１＋２；Ｑ５０３文獻標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０14）09－2093-04

Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｌd Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ ｆｒｏｍ Ｔｈｒｅｅ Ｐｌａｃｅｓ ｏｆ

Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔern Ｃｈｉｎａ Based on ＩＳＳＲ-PCR

ＺＨＡＮＧ Ｗａｎ－ｊｉｅ， ＨＥ Ｄｅ， ＬＩ Ｃｕｉ－ｘｉｎ， ＬＩ Ｊｉ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２２４， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Tｈｅ ＤＮＡ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｏｆ ４１ ｗｉｌｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｒｅｅ ｐｌａｃｅｓ Ｄａｙａｏ ｃｏｕｎｔｒｙ， Ｒｕｉｌｉ ｃｏｕｎｔｒｙ ｏｆ Ｙｕｎｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ａｎｄ Ｍｕｌｉ ｃｏｕｎｔｒｙ ｏｆ Ｓｉｃｈｕａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｗere ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ with ISSR-POR. Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＮＴＳＹＳ－ＰＣ ｓｏｆｔｗａｒｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １６２ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ＤＮＡ ｂａｎｄｓ were produced from 18 pairs of primers． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔs ｏｆ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ４１ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｒｏｕｐｓ ａｔ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｏｆ ６２％， ｉｍｐｌying ｔｈａｔ ｔｈｅ ｗｉｌｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｌ．ｅｄｏｄｅｓ ｈａｄ ｇｒｅａｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｏｂｖｉｏｕｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｌｏｃａｔｉｏｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ；ＩＳＳＲ；ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＤＮＡ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ

香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）是一種可食用的大型木腐擔(dān)子菌［１］，具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值。含有高蛋白、多糖、低脂肪等諸多的營養(yǎng)［２，３］，這使得香菇成為世界上產(chǎn)業(yè)發(fā)展速度最快的菇類［３］。我國幅員遼闊、氣候復(fù)雜、地形多變、香菇野生品種繁多，但是由于分化程度低、形態(tài)差異小，要以形態(tài)特征為依據(jù)難以對品種進行有效鑒定；栽培規(guī)模的迅速擴大和自然生境的逐漸減少，迫切需要加快香菇種質(zhì)資源的研究，加緊對野生香菇進行遺傳多樣性研究。

ＩＳＳＲ分子標(biāo)記技術(shù)（Ｉｎｔｅｒ－ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔ， ＩＳＳＲ）于１９９４年由Ｚｉｅｔｋｉｅｗｉｃｚ等［４］提出，利用在真核生物基因組中經(jīng)常出現(xiàn)的簡單重復(fù)序列本身來設(shè)計引物進行ＰＣＲ擴增［５］。ＩＳＳＲ分子標(biāo)記己應(yīng)用于研究植物種內(nèi)遺傳變異、種間遺傳變異［６］、品種鑒定［７，８］、遺傳作圖［９］和居群遺傳學(xué)［１０］等研究中，在遺傳多樣性和親緣關(guān)系［１１］研究中的應(yīng)用更為廣泛。本研究利用ＩＳＳＲ分子標(biāo)記技術(shù)對西南地區(qū)的云南省瑞麗市、大姚縣和四川省木里縣的野生香菇進行了遺傳多樣性分析，以期能客觀反映香菇屬真菌的親緣關(guān)系和地理變遷情況。

１材料與方法

１．１供試菌株

供試４１個香菇菌株的編號、采集地點等詳見表１。

１．２方法和步驟

１．２．１基因組ＤＮＡ的提取將低溫保存的４１個野生香菇菌種接種于ＰＤＡ斜面培養(yǎng)基上，２６ ℃培養(yǎng) ７～１０ ｄ?；罨笥媒臃N針挑取試管斜面培養(yǎng)基上邊緣處生長較旺盛的菌塊，接種到液體培養(yǎng)基中，于室溫下靜置培養(yǎng)１個月后，用濾紙收集香菇菌絲體，用吸水紙吸干，參照 ＣＴＡＢ法［１２］并作改良以提取其ＤＮＡ，于－２０ ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

１．２．２ ＩＳＳＲ－ＰＣＲ擴增擴增反應(yīng)的體系為１５ μＬ，包含ＰＣＲ緩沖液１．５ μＬ、２５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ２ １．２ μＬ、２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰｓ １．２ μＬ、１０ μｍｏｌ／Ｌ引物０．３ μＬ、Ｅｘ－Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶（大連寶生物工程有限公司）０．０７５ μＬ、０．００１ μｇ／ｍＬ模板１ μＬ，最后用去離子水將總體積補至１５ μＬ。

ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反應(yīng)程序為：９４ ℃預(yù)變性４ ｍｉｎ；９４ ℃變性３０ ｓ，４８～５５ ℃范圍內(nèi)退火３０ ｓ，７２ ℃延伸１０８ ｓ，３３個循環(huán)；最后７２ ℃延伸１０ ｍｉｎ，４ ℃保存。

１）引物篩選。以４１株野生香菇菌株為ＤＮＡ模板，通過ＴＭ值比較，對Ｐ１～Ｐ２７號引物進行分組和初篩選，ＴＭ值相近的為一組，篩選出清晰、重復(fù)性好、多態(tài)性高的ＰＣＲ擴增引物。

２）ＩＳＳＲ－ＰＣＲ 條件優(yōu)化。由于ＩＳＳＲ 標(biāo)記易受 ＰＣＲ 條件的影響，因此需對ＰＣＲ擴增反應(yīng)進行優(yōu)化。

退火溫度的優(yōu)化：使用引物Ｐ１４和Ｐ２０對８１０４菌株模板進行ＰＣＲ擴增，篩選最佳退火溫度。擴增反應(yīng)在梯度 ＰＣＲ 儀（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ公司）上進行，設(shè)最小溫度為 ４７．３ ℃，最大溫度為５５．３ ℃，自動形成８個溫度梯度，分別為５５．３、５４．９、５４．０、５２．４、５０．５、４８．９、４７．９、４７．３ ℃。

鎂離子濃度的優(yōu)化：使用引物Ｐ１４對８１０４菌株模板進行ＰＣＲ擴增來優(yōu)化鎂離子濃度，Ｍｇ２＋濃度的優(yōu)化范圍為１．６～２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ（即ＭｇＣｌ２的用量為 ０．９６～１．５ μＬ），Ｍｇ２＋濃度設(shè)１０個梯度，分別為１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ 。

３）ＰＣＲ擴增及產(chǎn)物檢測。用優(yōu)化后的反應(yīng)體系（表２）和篩選出來的１８個引物（表３）進行ＩＳＳＲ－ＰＣＲ擴增。ＰＣＲ 擴增后，?。?μＬ的ＰＣＲ 擴增產(chǎn)物加少量６×Ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ，于濃度為１．０％的瓊脂糖凝膠（含０．５ μｇ／ｍＬ的ＥＢ）上電泳，并于ＢＩＯ ＲＡＤ Ｇｅｌ ＤｏｃＴＭ ＸＲ＋凝膠成像系統(tǒng)成像。

１．２．３數(shù)據(jù)分析利用凝膠系統(tǒng)成像軟件把條帶信息轉(zhuǎn)化為０－１矩陣。即對所有引物的電泳條帶進行記錄，在相同位置出現(xiàn)條帶的記為１，無條帶的記為０。然后采用ＮＴＳＹＳ軟件進行遺傳相似性聚類分析，繪制樹狀聚類圖。

２結(jié)果與分析

２．１ＤＮＡ的提取

將所采４１個野生香菇菌株用ＣＴＡＢ法進行ＤＮＡ的提取，結(jié)果見圖１。如圖１所示，得到的野生香菇菌株ＤＮＡ約２３ １３０ ｂｐ，且ＤＮＡ電泳條帶清晰，ＤＮＡ的純度、濃度及產(chǎn)率都比較高，無降解，適用于ＩＳＳＲ分子標(biāo)記分析。

２．２ＩＳＳＲ－ＰＣＲ擴增結(jié)果

用篩選得到的１８個引物對所有供試菌株進行ＩＳＳＲ－ＰＣＲ擴增，擴增產(chǎn)物用１．０％的瓊脂糖凝膠電泳檢測，所測結(jié)果見圖２、３。如圖２、３所示，可以看到同一引物對不同的香菇菌株擴增后所得到的ＤＮＡ條帶清晰度和多態(tài)性均很高，說明所建立的ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反應(yīng)體系適合野生香菇菌株的ＰＣＲ擴增，可用于遺傳多樣性分析。經(jīng)統(tǒng)計，１８個引物對４１個野生香菇菌株擴增后，共檢測到１６２條條帶，多態(tài)性條帶為１６２條，多態(tài)率為１００％。

２．３聚類分析結(jié)果

根據(jù)ＩＳＳＲ－ＰＣＲ分析結(jié)果，采用ＮＴＳＹＳ軟件進行聚類分析，得到４１個野生香菇菌株的ＩＳＳＲ聚類分析圖（圖４），供試的４１個野生香菇菌株相似系數(shù)為０．６０～０．８５。其中８０４１和８０４３號野生香菇菌株的相似系數(shù)達到了０．８５以上，說明它們的遺傳背景極為相似，而且兩者的采集地都來自云南省大姚縣，因此可能是相同的菌株，存在同物異名的可能性。在相似系數(shù)０．６２左右，４１個野生香菇菌株可以分為三大類，其中８１２７、８１１０、８１３５號３個野生香菇菌株聚為一類（Ⅲ），都來源于四川省木里縣，８１１０號野生香菇來自于木里縣列瓦鄉(xiāng)三村，８１２７和８１３５號野生香菇都來自木里縣集市；聚為第二類（Ⅱ）的菌株有４個：８０８０、８０７７、８１３９、８０７９號野生香菇菌株，除了８１３９號野生香菇來自四川省木里縣集市，其余３個均來自云南省瑞麗市；其他３４個野生香菇菌株聚為第一類（Ⅰ），其中云南省的香菇有９個，四川省的香菇有２５個，說明這些菌株的遺傳背景相似，親緣關(guān)系比較近。

聚類結(jié)果還表明，地理位置來源相同的野生香菇菌株分布在不同的ＩＳＳＲ聚類中，比如第一類中包含了來自木里縣、大姚縣和瑞麗市的菌株，反映出這３個地方的菌株不同地理群體間差異不大，而第二類中包含了瑞麗市和木里縣的菌株，和第一類情況相同，說明ＩＳＳＲ聚類分析與菌株的不同地理來源之間無明顯的相關(guān)性。

３討論

遺傳多樣性一般是指種內(nèi)的遺傳差異水平，反映一個物種適應(yīng)環(huán)境的能力以及其被改造和利用的潛力［１３］。本試驗中，４１個野生香菇菌株的遺傳相似系數(shù)為０．６０～０．８５，在不同的聚類分組中，遺傳相似系數(shù)也存在一定的差異，這些差異可能是野生香菇對環(huán)境的適應(yīng)所造成的，分析表明同一地區(qū)不同的野生香菇菌株間遺傳差異很大，反映出了豐富的群體內(nèi)的遺傳多樣性。這與王子迎等［１４］、趙曉清等［１５］的研究結(jié)論一致。

Ｘｕ等［１６］的研究結(jié)果表明，作為香菇的起源地之一，我國是重要的野生香菇種質(zhì)資源中心，不同區(qū)域的菌株間存在著較大的遺傳差異。本研究對四川省木里縣和云南省瑞麗市、大姚縣３個地區(qū)４１個野生香菇菌株的ＩＳＳＲ遺傳多樣性分析表明，３個地區(qū)間野生香菇菌株存在混雜現(xiàn)象，不同地理位置的群體并沒有表現(xiàn)出地理隔離的差異。

參考文獻：

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［１６］ ＸＵ Ｘ Ｆ，ＬＩＮ Ａ Ｚ，ＣＨＥＮ Ｓ Ｍ，ｅｔ ａ１． Ｒｅａｐｐｒａｉｓａｌ ｏｆ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｓｉａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ［Ｊ］． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，１６（３）：２７４－２８０．

２結(jié)果與分析

２．１ＤＮＡ的提取

將所采４１個野生香菇菌株用ＣＴＡＢ法進行ＤＮＡ的提取，結(jié)果見圖１。如圖１所示，得到的野生香菇菌株ＤＮＡ約２３ １３０ ｂｐ，且ＤＮＡ電泳條帶清晰，ＤＮＡ的純度、濃度及產(chǎn)率都比較高，無降解，適用于ＩＳＳＲ分子標(biāo)記分析。

２．２ＩＳＳＲ－ＰＣＲ擴增結(jié)果

用篩選得到的１８個引物對所有供試菌株進行ＩＳＳＲ－ＰＣＲ擴增，擴增產(chǎn)物用１．０％的瓊脂糖凝膠電泳檢測，所測結(jié)果見圖２、３。如圖２、３所示，可以看到同一引物對不同的香菇菌株擴增后所得到的ＤＮＡ條帶清晰度和多態(tài)性均很高，說明所建立的ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反應(yīng)體系適合野生香菇菌株的ＰＣＲ擴增，可用于遺傳多樣性分析。經(jīng)統(tǒng)計，１８個引物對４１個野生香菇菌株擴增后，共檢測到１６２條條帶，多態(tài)性條帶為１６２條，多態(tài)率為１００％。

２．３聚類分析結(jié)果

根據(jù)ＩＳＳＲ－ＰＣＲ分析結(jié)果，采用ＮＴＳＹＳ軟件進行聚類分析，得到４１個野生香菇菌株的ＩＳＳＲ聚類分析圖（圖４），供試的４１個野生香菇菌株相似系數(shù)為０．６０～０．８５。其中８０４１和８０４３號野生香菇菌株的相似系數(shù)達到了０．８５以上，說明它們的遺傳背景極為相似，而且兩者的采集地都來自云南省大姚縣，因此可能是相同的菌株，存在同物異名的可能性。在相似系數(shù)０．６２左右，４１個野生香菇菌株可以分為三大類，其中８１２７、８１１０、８１３５號３個野生香菇菌株聚為一類（Ⅲ），都來源于四川省木里縣，８１１０號野生香菇來自于木里縣列瓦鄉(xiāng)三村，８１２７和８１３５號野生香菇都來自木里縣集市；聚為第二類（Ⅱ）的菌株有４個：８０８０、８０７７、８１３９、８０７９號野生香菇菌株，除了８１３９號野生香菇來自四川省木里縣集市，其余３個均來自云南省瑞麗市；其他３４個野生香菇菌株聚為第一類（Ⅰ），其中云南省的香菇有９個，四川省的香菇有２５個，說明這些菌株的遺傳背景相似，親緣關(guān)系比較近。

聚類結(jié)果還表明，地理位置來源相同的野生香菇菌株分布在不同的ＩＳＳＲ聚類中，比如第一類中包含了來自木里縣、大姚縣和瑞麗市的菌株，反映出這３個地方的菌株不同地理群體間差異不大，而第二類中包含了瑞麗市和木里縣的菌株，和第一類情況相同，說明ＩＳＳＲ聚類分析與菌株的不同地理來源之間無明顯的相關(guān)性。

３討論

遺傳多樣性一般是指種內(nèi)的遺傳差異水平，反映一個物種適應(yīng)環(huán)境的能力以及其被改造和利用的潛力［１３］。本試驗中，４１個野生香菇菌株的遺傳相似系數(shù)為０．６０～０．８５，在不同的聚類分組中，遺傳相似系數(shù)也存在一定的差異，這些差異可能是野生香菇對環(huán)境的適應(yīng)所造成的，分析表明同一地區(qū)不同的野生香菇菌株間遺傳差異很大，反映出了豐富的群體內(nèi)的遺傳多樣性。這與王子迎等［１４］、趙曉清等［１５］的研究結(jié)論一致。

Ｘｕ等［１６］的研究結(jié)果表明，作為香菇的起源地之一，我國是重要的野生香菇種質(zhì)資源中心，不同區(qū)域的菌株間存在著較大的遺傳差異。本研究對四川省木里縣和云南省瑞麗市、大姚縣３個地區(qū)４１個野生香菇菌株的ＩＳＳＲ遺傳多樣性分析表明，３個地區(qū)間野生香菇菌株存在混雜現(xiàn)象，不同地理位置的群體并沒有表現(xiàn)出地理隔離的差異。

參考文獻：

［１］ 徐學(xué)鋒，林范學(xué)，程水明，等．中國香菇自然種質(zhì)的ｒＤＮＡ遺傳多樣性分析［Ｊ］． 菌物學(xué)報，２００５，２４（１）：２９－３５．

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［５］ ＴＳＵＭＵＲＡ Ｙ，ＯＨＢＡ Ｋ，ＳＴＲＡＵＳＳ Ｓ Ｈ． Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒ－ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ repeat ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｉｎ Ｄｏｕｇｌａｓ－ｆｉｒ（Ｐｓｅｕｄｏｔａｕｇａ ｍｅｎｚｉｅｓｉｉ） ａｎｄ ｓｕｇｉ （Ｃｒｙｐｔｏｍｅｕｉａ ｊａｐｏｎｅｃａ） ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９６，９２（１）：４０－４５．

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２結(jié)果與分析

２．１ＤＮＡ的提取

將所采４１個野生香菇菌株用ＣＴＡＢ法進行ＤＮＡ的提取，結(jié)果見圖１。如圖１所示，得到的野生香菇菌株ＤＮＡ約２３ １３０ ｂｐ，且ＤＮＡ電泳條帶清晰，ＤＮＡ的純度、濃度及產(chǎn)率都比較高，無降解，適用于ＩＳＳＲ分子標(biāo)記分析。

２．２ＩＳＳＲ－ＰＣＲ擴增結(jié)果

用篩選得到的１８個引物對所有供試菌株進行ＩＳＳＲ－ＰＣＲ擴增，擴增產(chǎn)物用１．０％的瓊脂糖凝膠電泳檢測，所測結(jié)果見圖２、３。如圖２、３所示，可以看到同一引物對不同的香菇菌株擴增后所得到的ＤＮＡ條帶清晰度和多態(tài)性均很高，說明所建立的ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反應(yīng)體系適合野生香菇菌株的ＰＣＲ擴增，可用于遺傳多樣性分析。經(jīng)統(tǒng)計，１８個引物對４１個野生香菇菌株擴增后，共檢測到１６２條條帶，多態(tài)性條帶為１６２條，多態(tài)率為１００％。

２．３聚類分析結(jié)果

根據(jù)ＩＳＳＲ－ＰＣＲ分析結(jié)果，采用ＮＴＳＹＳ軟件進行聚類分析，得到４１個野生香菇菌株的ＩＳＳＲ聚類分析圖（圖４），供試的４１個野生香菇菌株相似系數(shù)為０．６０～０．８５。其中８０４１和８０４３號野生香菇菌株的相似系數(shù)達到了０．８５以上，說明它們的遺傳背景極為相似，而且兩者的采集地都來自云南省大姚縣，因此可能是相同的菌株，存在同物異名的可能性。在相似系數(shù)０．６２左右，４１個野生香菇菌株可以分為三大類，其中８１２７、８１１０、８１３５號３個野生香菇菌株聚為一類（Ⅲ），都來源于四川省木里縣，８１１０號野生香菇來自于木里縣列瓦鄉(xiāng)三村，８１２７和８１３５號野生香菇都來自木里縣集市；聚為第二類（Ⅱ）的菌株有４個：８０８０、８０７７、８１３９、８０７９號野生香菇菌株，除了８１３９號野生香菇來自四川省木里縣集市，其余３個均來自云南省瑞麗市；其他３４個野生香菇菌株聚為第一類（Ⅰ），其中云南省的香菇有９個，四川省的香菇有２５個，說明這些菌株的遺傳背景相似，親緣關(guān)系比較近。

聚類結(jié)果還表明，地理位置來源相同的野生香菇菌株分布在不同的ＩＳＳＲ聚類中，比如第一類中包含了來自木里縣、大姚縣和瑞麗市的菌株，反映出這３個地方的菌株不同地理群體間差異不大，而第二類中包含了瑞麗市和木里縣的菌株，和第一類情況相同，說明ＩＳＳＲ聚類分析與菌株的不同地理來源之間無明顯的相關(guān)性。

３討論

遺傳多樣性一般是指種內(nèi)的遺傳差異水平，反映一個物種適應(yīng)環(huán)境的能力以及其被改造和利用的潛力［１３］。本試驗中，４１個野生香菇菌株的遺傳相似系數(shù)為０．６０～０．８５，在不同的聚類分組中，遺傳相似系數(shù)也存在一定的差異，這些差異可能是野生香菇對環(huán)境的適應(yīng)所造成的，分析表明同一地區(qū)不同的野生香菇菌株間遺傳差異很大，反映出了豐富的群體內(nèi)的遺傳多樣性。這與王子迎等［１４］、趙曉清等［１５］的研究結(jié)論一致。

Ｘｕ等［１６］的研究結(jié)果表明，作為香菇的起源地之一，我國是重要的野生香菇種質(zhì)資源中心，不同區(qū)域的菌株間存在著較大的遺傳差異。本研究對四川省木里縣和云南省瑞麗市、大姚縣３個地區(qū)４１個野生香菇菌株的ＩＳＳＲ遺傳多樣性分析表明，３個地區(qū)間野生香菇菌株存在混雜現(xiàn)象，不同地理位置的群體并沒有表現(xiàn)出地理隔離的差異。

參考文獻：

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