高效液相色譜法測(cè)定14種人參皂苷的研究

陳書華+樸文香+白龍律+遲美麗+金恩華+馬正赫+武倫鵬

摘要：為準(zhǔn)確可靠的定量分析14種人參皂苷，本文通過對(duì)高效液相色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，確定了測(cè)定人參皂苷的HPLC條件，結(jié)果表明，最佳分析條件流動(dòng)相為乙氰和水；C18柱；檢測(cè)波長：203納米；流速：1.0 毫升/分。該分析方法可以達(dá)到很好的分離效果，通過精密度、穩(wěn)定性和回收率的計(jì)算，證明該方法具有良好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，是一種簡單、高效的多種人參皂苷分析方法。

關(guān)鍵詞：人參皂苷；高效液相色譜；檢測(cè)方法

中圖分類號(hào)： R49 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-12-22-2

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑

人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD，三七皂苷標(biāo)準(zhǔn)品R1均購自成都曼思特生物科技有限公司；乙氰、甲醇為色譜純均購自美國TEDIA公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀購自美國安捷倫公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：BDS HYPERSIL C18柱（250 毫米×4.6毫米，5微米）；柱溫：25℃；檢測(cè)波長：203納米；流動(dòng)相：水（A）和乙氰（B）；流速：1.0 毫升/分；梯度洗脫條件見表2.1。上述條件下標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的分離效果見圖1.1。

表1.1 高效液相色譜流動(dòng)相梯度洗脫條件

圖1.1 13種人參皂苷和1種三七皂苷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC圖

（1, R1; 2, Rg1; 3, Re; 4, Rh1; 5, Rb1; 6, Rc; 7, F1; 8, Rb2;

9, Rd; 10, F2; 11, Rg3; 12, C-K; 13, Rh2; 14, PPD.）

1.3.2 溶液的配制 分別稱取人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.1毫克），溶解于甲醇，得到14種皂苷的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取不同濃度的人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混標(biāo)溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，各單體皂苷濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取稀釋后的人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混標(biāo)溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定含量，記錄皂苷峰面積，計(jì)算平均值。

1.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取稀釋后的人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混標(biāo)溶液，分別于0、2、4、8、10小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定含量，記錄皂苷峰面積，計(jì)算平均值。

1.3.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量的人參根總皂苷，分別精密加入人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品，按照樣品溶液制備方法制備，在相同色譜條件下，測(cè)定含量并計(jì)算回收率。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、檢出限（LOD）與定量限（LOQ）

以13種人參皂苷和1種三七皂苷的色譜峰面積對(duì)濃度作線性回歸，由表1.2可看出，呈良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)r2值均大于0.998。以峰強(qiáng)度與噪聲比（S/N）為3確定最低檢出限（LOD），該方法測(cè)定14種皂苷的檢出限為0.0015~0.006 毫克/毫升；以S/N為10確定最低定量限（LOQ），本方法的定量限為0.005~0.02毫克/毫升。

表1.2 回歸分析、檢出限和定量限

2.2 精密度

精密吸取稀釋后的14種皂苷混標(biāo)溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算，14種皂苷峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于2%，結(jié)果見表1.3。

2.3 穩(wěn)定性

精密吸取吸取稀釋后的14種皂苷混標(biāo)溶液，每隔2小時(shí)測(cè)定1次，以峰面積計(jì)算，14種皂苷峰面積的RSD均小于4%，結(jié)果見表1.4。

表1.3 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 14種皂苷的回收率為85.0%~118.8%，結(jié)果見表1.5。表1.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 注：回收率（%）=（實(shí)際測(cè)得含量-樣品含量）/加入標(biāo)準(zhǔn)品含量×100% ND：Not detected.3 結(jié)語 本文通過對(duì)高效液相色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，確定了測(cè)定人參皂苷及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的HPLC條件為：色譜柱：BDS HYPERSIL C18柱（250毫米×4.6毫米，5微米）；柱溫：25℃；檢測(cè)波長：203納米；流動(dòng)相：水（A）和乙氰（B），梯度洗脫；流速：1.0毫升/分。通過精密度、穩(wěn)定性和回收率的計(jì)算，證明該方法具有良好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，是一種簡單、高效的多種人參皂苷分析方法。參考文獻(xiàn) [1] Kim HS, Lee JH, Goo YS, Nah SY. Effect of ginsenosides on Ca2+ channels and membrane capacitance in rat adrenal chromaffin cells[J]. Brain Res Bull, 1998, 46(3): 245-251. [2] 張崇禧,鄭友蘭,張春紅,羅維瑩,鮑建材,劉剛.不同方法提取人參總皂苷工藝的優(yōu)化研究[J].人參研究,2003,4：5-8. [3] Akao T, Kida H, Kanaoka M, Hattori M, Kobashi K. Intestinal bacterial hydrolysis is required for the appearance of compound K in rat plasma after oral administration of ginsenoside Rb1 from Panax ginseng [J]. J Pbarm Pharmacol, 1998, 50(10): 1155-1160. [4] 馬吉?jiǎng)?周秋麗,費(fèi)曉方,孫曄,王本祥.真菌對(duì)人參皂苷Rb1及人參二醇系皂苷的代謝作用[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2001,36(8)：603-605. [5] Suda K, Murakami K, Murata J, Hasegawa H, Saiki I. An intestinal bacterial metabolite (M1) of ginseng protopanaxadiol saponins inhibits tumor-induced neovascularization [J]. Journal of Traditional Medicines,2000,17(4): 144-150. [6] 董淑華,陳波,馬忠澤,侯秀云,陳英杰.人參皂苷的體內(nèi)代謝反應(yīng)研究[J].人參研究,2003,15(1)：2-6. [7] 閻天午,宋承吉,杜秀娟.人參首烏精中人參皂甙含量測(cè)定[J].中成藥,1993,15(11)：14-16. [8] 王林,趙春杰,王書華.比色法測(cè)定君春樂膠囊中人參皂甙的含量[J].中國藥學(xué)雜志,1995,30(6)：364-367. [9] 劉高峰,張麗梅.薄層掃描法測(cè)定肝適寧膠囊人參皂甙Rg1的含量[J].中國中藥雜志,1996,21(9)：542. [10] Cui J,et al.Analysis of ginsenosides by chromatography and mass spectrometry,release of 20s-protopanadiol and 20s-protopanaxatriol for quantitation.Anal Biochem,1993,210(2):411. [11] Petersen T G,et al. Utilizing column selectivity in developing a high-performance liquid chromatographic method for ginsenoside assay.J Chromatogr,1990,504:139. [12] Wu C C,et al. Determination of ginsenosides in ginseng crude extracts by high-performance liquid chromatography.J Chromatogr,A 1994,685(2):243. [13] 馬鵬,林濤,黃靜.古方生脈散制劑中人參皂甙的反相高效液相色譜分離和含量測(cè)定[J].華西藥學(xué)雜志,1995,10(1)：21. 作者簡介：陳書華，本科學(xué)歷，延邊朝鮮族自治州產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所中心實(shí)驗(yàn)室，副主任，高級(jí)工程師，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化；樸文香，碩士學(xué)歷，延邊大學(xué)，講師，研究方向：化學(xué)工程與工藝；白龍律，碩士學(xué)歷，延邊州產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所，工程師，研究方向：參茸等產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)；遲美麗，本科學(xué)歷，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，副主任，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化；金恩華，本科學(xué)歷，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，工程師，研究方向：參茸等產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)；馬正赫，大專學(xué)歷，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，助理工程師，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化。 通訊作者：武倫鵬，博士，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，主任，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化。 網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2014-6-12 13:25:58 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140612.1325.003.html

摘要：為準(zhǔn)確可靠的定量分析14種人參皂苷，本文通過對(duì)高效液相色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，確定了測(cè)定人參皂苷的HPLC條件，結(jié)果表明，最佳分析條件流動(dòng)相為乙氰和水；C18柱；檢測(cè)波長：203納米；流速：1.0 毫升/分。該分析方法可以達(dá)到很好的分離效果，通過精密度、穩(wěn)定性和回收率的計(jì)算，證明該方法具有良好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，是一種簡單、高效的多種人參皂苷分析方法。

關(guān)鍵詞：人參皂苷；高效液相色譜；檢測(cè)方法

中圖分類號(hào)： R49 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-12-22-2

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑

人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD，三七皂苷標(biāo)準(zhǔn)品R1均購自成都曼思特生物科技有限公司；乙氰、甲醇為色譜純均購自美國TEDIA公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀購自美國安捷倫公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：BDS HYPERSIL C18柱（250 毫米×4.6毫米，5微米）；柱溫：25℃；檢測(cè)波長：203納米；流動(dòng)相：水（A）和乙氰（B）；流速：1.0 毫升/分；梯度洗脫條件見表2.1。上述條件下標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的分離效果見圖1.1。

表1.1 高效液相色譜流動(dòng)相梯度洗脫條件

圖1.1 13種人參皂苷和1種三七皂苷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC圖

（1, R1; 2, Rg1; 3, Re; 4, Rh1; 5, Rb1; 6, Rc; 7, F1; 8, Rb2;

9, Rd; 10, F2; 11, Rg3; 12, C-K; 13, Rh2; 14, PPD.）

1.3.2 溶液的配制 分別稱取人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.1毫克），溶解于甲醇，得到14種皂苷的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取不同濃度的人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混標(biāo)溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，各單體皂苷濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取稀釋后的人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混標(biāo)溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定含量，記錄皂苷峰面積，計(jì)算平均值。

1.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取稀釋后的人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混標(biāo)溶液，分別于0、2、4、8、10小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定含量，記錄皂苷峰面積，計(jì)算平均值。

1.3.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量的人參根總皂苷，分別精密加入人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品，按照樣品溶液制備方法制備，在相同色譜條件下，測(cè)定含量并計(jì)算回收率。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、檢出限（LOD）與定量限（LOQ）

以13種人參皂苷和1種三七皂苷的色譜峰面積對(duì)濃度作線性回歸，由表1.2可看出，呈良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)r2值均大于0.998。以峰強(qiáng)度與噪聲比（S/N）為3確定最低檢出限（LOD），該方法測(cè)定14種皂苷的檢出限為0.0015~0.006 毫克/毫升；以S/N為10確定最低定量限（LOQ），本方法的定量限為0.005~0.02毫克/毫升。

表1.2 回歸分析、檢出限和定量限

2.2 精密度

精密吸取稀釋后的14種皂苷混標(biāo)溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算，14種皂苷峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于2%，結(jié)果見表1.3。

2.3 穩(wěn)定性

精密吸取吸取稀釋后的14種皂苷混標(biāo)溶液，每隔2小時(shí)測(cè)定1次，以峰面積計(jì)算，14種皂苷峰面積的RSD均小于4%，結(jié)果見表1.4。

表1.3 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 14種皂苷的回收率為85.0%~118.8%，結(jié)果見表1.5。表1.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 注：回收率（%）=（實(shí)際測(cè)得含量-樣品含量）/加入標(biāo)準(zhǔn)品含量×100% ND：Not detected.3 結(jié)語 本文通過對(duì)高效液相色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，確定了測(cè)定人參皂苷及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的HPLC條件為：色譜柱：BDS HYPERSIL C18柱（250毫米×4.6毫米，5微米）；柱溫：25℃；檢測(cè)波長：203納米；流動(dòng)相：水（A）和乙氰（B），梯度洗脫；流速：1.0毫升/分。通過精密度、穩(wěn)定性和回收率的計(jì)算，證明該方法具有良好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，是一種簡單、高效的多種人參皂苷分析方法。參考文獻(xiàn) [1] Kim HS, Lee JH, Goo YS, Nah SY. Effect of ginsenosides on Ca2+ channels and membrane capacitance in rat adrenal chromaffin cells[J]. Brain Res Bull, 1998, 46(3): 245-251. [2] 張崇禧,鄭友蘭,張春紅,羅維瑩,鮑建材,劉剛.不同方法提取人參總皂苷工藝的優(yōu)化研究[J].人參研究,2003,4：5-8. [3] Akao T, Kida H, Kanaoka M, Hattori M, Kobashi K. Intestinal bacterial hydrolysis is required for the appearance of compound K in rat plasma after oral administration of ginsenoside Rb1 from Panax ginseng [J]. J Pbarm Pharmacol, 1998, 50(10): 1155-1160. [4] 馬吉?jiǎng)?周秋麗,費(fèi)曉方,孫曄,王本祥.真菌對(duì)人參皂苷Rb1及人參二醇系皂苷的代謝作用[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2001,36(8)：603-605. [5] Suda K, Murakami K, Murata J, Hasegawa H, Saiki I. An intestinal bacterial metabolite (M1) of ginseng protopanaxadiol saponins inhibits tumor-induced neovascularization [J]. Journal of Traditional Medicines,2000,17(4): 144-150. [6] 董淑華,陳波,馬忠澤,侯秀云,陳英杰.人參皂苷的體內(nèi)代謝反應(yīng)研究[J].人參研究,2003,15(1)：2-6. [7] 閻天午,宋承吉,杜秀娟.人參首烏精中人參皂甙含量測(cè)定[J].中成藥,1993,15(11)：14-16. [8] 王林,趙春杰,王書華.比色法測(cè)定君春樂膠囊中人參皂甙的含量[J].中國藥學(xué)雜志,1995,30(6)：364-367. [9] 劉高峰,張麗梅.薄層掃描法測(cè)定肝適寧膠囊人參皂甙Rg1的含量[J].中國中藥雜志,1996,21(9)：542. [10] Cui J,et al.Analysis of ginsenosides by chromatography and mass spectrometry,release of 20s-protopanadiol and 20s-protopanaxatriol for quantitation.Anal Biochem,1993,210(2):411. [11] Petersen T G,et al. Utilizing column selectivity in developing a high-performance liquid chromatographic method for ginsenoside assay.J Chromatogr,1990,504:139. [12] Wu C C,et al. Determination of ginsenosides in ginseng crude extracts by high-performance liquid chromatography.J Chromatogr,A 1994,685(2):243. [13] 馬鵬,林濤,黃靜.古方生脈散制劑中人參皂甙的反相高效液相色譜分離和含量測(cè)定[J].華西藥學(xué)雜志,1995,10(1)：21. 作者簡介：陳書華，本科學(xué)歷，延邊朝鮮族自治州產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所中心實(shí)驗(yàn)室，副主任，高級(jí)工程師，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化；樸文香，碩士學(xué)歷，延邊大學(xué)，講師，研究方向：化學(xué)工程與工藝；白龍律，碩士學(xué)歷，延邊州產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所，工程師，研究方向：參茸等產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)；遲美麗，本科學(xué)歷，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，副主任，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化；金恩華，本科學(xué)歷，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，工程師，研究方向：參茸等產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)；馬正赫，大專學(xué)歷，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，助理工程師，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化。 通訊作者：武倫鵬，博士，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，主任，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化。 網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2014-6-12 13:25:58 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140612.1325.003.html

摘要：為準(zhǔn)確可靠的定量分析14種人參皂苷，本文通過對(duì)高效液相色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，確定了測(cè)定人參皂苷的HPLC條件，結(jié)果表明，最佳分析條件流動(dòng)相為乙氰和水；C18柱；檢測(cè)波長：203納米；流速：1.0 毫升/分。該分析方法可以達(dá)到很好的分離效果，通過精密度、穩(wěn)定性和回收率的計(jì)算，證明該方法具有良好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，是一種簡單、高效的多種人參皂苷分析方法。

關(guān)鍵詞：人參皂苷；高效液相色譜；檢測(cè)方法

中圖分類號(hào)： R49 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-12-22-2

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑

人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD，三七皂苷標(biāo)準(zhǔn)品R1均購自成都曼思特生物科技有限公司；乙氰、甲醇為色譜純均購自美國TEDIA公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀購自美國安捷倫公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：BDS HYPERSIL C18柱（250 毫米×4.6毫米，5微米）；柱溫：25℃；檢測(cè)波長：203納米；流動(dòng)相：水（A）和乙氰（B）；流速：1.0 毫升/分；梯度洗脫條件見表2.1。上述條件下標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的分離效果見圖1.1。

表1.1 高效液相色譜流動(dòng)相梯度洗脫條件

圖1.1 13種人參皂苷和1種三七皂苷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC圖

（1, R1; 2, Rg1; 3, Re; 4, Rh1; 5, Rb1; 6, Rc; 7, F1; 8, Rb2;

9, Rd; 10, F2; 11, Rg3; 12, C-K; 13, Rh2; 14, PPD.）

1.3.2 溶液的配制 分別稱取人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.1毫克），溶解于甲醇，得到14種皂苷的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取不同濃度的人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混標(biāo)溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，各單體皂苷濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取稀釋后的人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混標(biāo)溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定含量，記錄皂苷峰面積，計(jì)算平均值。

1.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取稀釋后的人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1混標(biāo)溶液，分別于0、2、4、8、10小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定含量，記錄皂苷峰面積，計(jì)算平均值。

1.3.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量的人參根總皂苷，分別精密加入人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品，按照樣品溶液制備方法制備，在相同色譜條件下，測(cè)定含量并計(jì)算回收率。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、檢出限（LOD）與定量限（LOQ）

以13種人參皂苷和1種三七皂苷的色譜峰面積對(duì)濃度作線性回歸，由表1.2可看出，呈良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)r2值均大于0.998。以峰強(qiáng)度與噪聲比（S/N）為3確定最低檢出限（LOD），該方法測(cè)定14種皂苷的檢出限為0.0015~0.006 毫克/毫升；以S/N為10確定最低定量限（LOQ），本方法的定量限為0.005~0.02毫克/毫升。

表1.2 回歸分析、檢出限和定量限

2.2 精密度

精密吸取稀釋后的14種皂苷混標(biāo)溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算，14種皂苷峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于2%，結(jié)果見表1.3。

2.3 穩(wěn)定性

精密吸取吸取稀釋后的14種皂苷混標(biāo)溶液，每隔2小時(shí)測(cè)定1次，以峰面積計(jì)算，14種皂苷峰面積的RSD均小于4%，結(jié)果見表1.4。

表1.3 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 14種皂苷的回收率為85.0%~118.8%，結(jié)果見表1.5。表1.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 注：回收率（%）=（實(shí)際測(cè)得含量-樣品含量）/加入標(biāo)準(zhǔn)品含量×100% ND：Not detected.3 結(jié)語 本文通過對(duì)高效液相色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，確定了測(cè)定人參皂苷及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的HPLC條件為：色譜柱：BDS HYPERSIL C18柱（250毫米×4.6毫米，5微米）；柱溫：25℃；檢測(cè)波長：203納米；流動(dòng)相：水（A）和乙氰（B），梯度洗脫；流速：1.0毫升/分。通過精密度、穩(wěn)定性和回收率的計(jì)算，證明該方法具有良好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，是一種簡單、高效的多種人參皂苷分析方法。參考文獻(xiàn) [1] Kim HS, Lee JH, Goo YS, Nah SY. Effect of ginsenosides on Ca2+ channels and membrane capacitance in rat adrenal chromaffin cells[J]. Brain Res Bull, 1998, 46(3): 245-251. [2] 張崇禧,鄭友蘭,張春紅,羅維瑩,鮑建材,劉剛.不同方法提取人參總皂苷工藝的優(yōu)化研究[J].人參研究,2003,4：5-8. [3] Akao T, Kida H, Kanaoka M, Hattori M, Kobashi K. Intestinal bacterial hydrolysis is required for the appearance of compound K in rat plasma after oral administration of ginsenoside Rb1 from Panax ginseng [J]. J Pbarm Pharmacol, 1998, 50(10): 1155-1160. [4] 馬吉?jiǎng)?周秋麗,費(fèi)曉方,孫曄,王本祥.真菌對(duì)人參皂苷Rb1及人參二醇系皂苷的代謝作用[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2001,36(8)：603-605. [5] Suda K, Murakami K, Murata J, Hasegawa H, Saiki I. An intestinal bacterial metabolite (M1) of ginseng protopanaxadiol saponins inhibits tumor-induced neovascularization [J]. Journal of Traditional Medicines,2000,17(4): 144-150. [6] 董淑華,陳波,馬忠澤,侯秀云,陳英杰.人參皂苷的體內(nèi)代謝反應(yīng)研究[J].人參研究,2003,15(1)：2-6. [7] 閻天午,宋承吉,杜秀娟.人參首烏精中人參皂甙含量測(cè)定[J].中成藥,1993,15(11)：14-16. [8] 王林,趙春杰,王書華.比色法測(cè)定君春樂膠囊中人參皂甙的含量[J].中國藥學(xué)雜志,1995,30(6)：364-367. [9] 劉高峰,張麗梅.薄層掃描法測(cè)定肝適寧膠囊人參皂甙Rg1的含量[J].中國中藥雜志,1996,21(9)：542. [10] Cui J,et al.Analysis of ginsenosides by chromatography and mass spectrometry,release of 20s-protopanadiol and 20s-protopanaxatriol for quantitation.Anal Biochem,1993,210(2):411. [11] Petersen T G,et al. Utilizing column selectivity in developing a high-performance liquid chromatographic method for ginsenoside assay.J Chromatogr,1990,504:139. [12] Wu C C,et al. Determination of ginsenosides in ginseng crude extracts by high-performance liquid chromatography.J Chromatogr,A 1994,685(2):243. [13] 馬鵬,林濤,黃靜.古方生脈散制劑中人參皂甙的反相高效液相色譜分離和含量測(cè)定[J].華西藥學(xué)雜志,1995,10(1)：21. 作者簡介：陳書華，本科學(xué)歷，延邊朝鮮族自治州產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所中心實(shí)驗(yàn)室，副主任，高級(jí)工程師，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化；樸文香，碩士學(xué)歷，延邊大學(xué)，講師，研究方向：化學(xué)工程與工藝；白龍律，碩士學(xué)歷，延邊州產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所，工程師，研究方向：參茸等產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)；遲美麗，本科學(xué)歷，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，副主任，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化；金恩華，本科學(xué)歷，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，工程師，研究方向：參茸等產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)；馬正赫，大專學(xué)歷，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，助理工程師，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化。 通訊作者：武倫鵬，博士，國家參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，主任，研究方向：天然活性物質(zhì)生物轉(zhuǎn)化。 網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2014-6-12 13:25:58 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140612.1325.003.html