芪生膠囊中芍藥苷的含量測定

石小鵬，繆珊，畢琳琳，李捷，苗青，黨碧艷，栗艷

(1.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科，西安 710032;2.第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系天然藥物學(xué)教研室，西安 710032)

芪生膠囊是由白芍、生地、黃芪、延胡索等8味中藥組成的復(fù)方制劑［醫(yī)院制劑批準(zhǔn)文號:蘭制字(2011)F68138］，具有滋陰清熱、益氣活血的功效，主要用于治療萎縮性胃炎。白芍是方中君藥，有鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用，其中芍藥苷對平滑肌有解痙和抑制作用，并有良好的抗炎及抗?jié)冏饔茫?-3］。因此，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測定其含量［4-10］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 20AT型高效液相色譜儀(日本島津公司);LC-20AT型二元高壓梯度泵;SPD-M20A型紫外檢測器;LC-solution工作軟件;SB5200型超聲波提取器(上海必能信超聲儀器有限公司);R200D型電子分析天平(德國Sartorius公司)。

1.2 試藥 芍藥苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，含量＞97%，批號:110713-200910);甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純;芪生膠囊由第四軍醫(yī)大學(xué)藥物研究所提供(批號:120801，120802，120803)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性實驗 Kromasil C18色譜柱(4.6mm ×250mm，5 μm)，甲醇-水(15∶85)為流動相，流速1.0mL·min－1，檢測波長230 nm，柱溫:室溫，進樣量20 μL，理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算不低于3 000。

2.2 對照品溶液的制備 取芍藥苷對照品6.25 mg精密稱定，加甲醇溶解，用甲醇稀釋定容至25mL，制成濃度為0.25 mg·mL－1對照品溶液，作為對照品溶液貯備液備用。

2.3 供試品溶液的制備 取芪生膠囊內(nèi)容物約0.3 g，精密稱定，加75%甲醇20mL，搖勻，室溫放置過夜，次日超聲 20min，2 500 r·min－1離心 10min(r=6.5 cm)，分取上清液，藥渣再加75%甲醇20mL，搖勻，超聲20min，離心10min，分取上清液，合并2次上清液并濾過(濾膜孔徑0.45 μm)，濾液置50mL量瓶，用75%甲醇定容至刻度，作為供試品貯備液，精密量取供試品貯備液1mL，加甲醇稀釋至2mL，作為供試品溶液。

2.4 陰性對照實驗 按處方制備缺白芍的芪生膠囊陰性對照樣品。取陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液，精密吸取對照品溶液、缺白芍陰性對照溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀測定。芍藥苷對照品溶液與芪生膠囊樣品溶液在同一保留時間檢出色譜吸收峰，而陰性對照溶液在此保留時間未檢出色譜吸收峰(圖1)，表明處方中其他藥材不干擾芍藥苷的含量，說明芍藥苷專屬性較強。

2.5 線性范圍考察 精密吸取對照品貯備液10，20，30，40，50 μL，分別移入1mL 量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別吸取20 μL注入液相色譜儀，按以上色譜條件測定，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，濃度為橫坐標(biāo)(X)進行線性回歸，得回歸方程Y=30 604X－7 263，r=0.999 9。結(jié)果表明，芍藥苷在濃度為 2.5 ～12.5 μg·mL－1時，線性關(guān)系良好。

2.6 精密度考察 取芪生膠囊(批號:120802)供試品溶液和芍藥苷對照品溶液(7.5 μg·mL－1)，重復(fù)進樣5次，按以上色譜條件測定峰面積，測得供試品溶液峰面積RSD=0.42%(n=5)，對照品溶液峰面積RSD=0.67%(n=5)，結(jié)果表明精密度符合測定要求。

2.7 穩(wěn)定性考察 取芪生膠囊(批號:120801)供試品溶液和芍藥苷對照品溶液(5.0 μg·mL－1)，按以上色譜條件，每隔2 h進樣一次，共進5次，測得供試品溶液峰面積RSD=0.81%(n=5)，對照品溶液峰面積RSD=0.56%(n=5)，結(jié)果表明芍藥苷在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

A.陰性對照品;B.對照品;C.供試品;1.芍藥苷圖1 芍藥苷高效液相色譜圖A.negative control;B.control substance;C.sample;1.paeoniflorinFig.1 HPLC chromatogram of paeoniflorin

2.8 重復(fù)性考察 取芪生膠囊同一批號內(nèi)容物(批號:120803)約0.3 g，精密稱定，共稱5份樣品，按供試品溶液制備方法制備，作為供試品溶液，精密吸取供試品液20 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定含量，結(jié)果平均含量為 3.68 mg·g－1，RSD=0.44%(n=5)。

2.9 加樣回收率考察 精密稱取已知含量的同一批號樣品，置圓底燒瓶，分別加入0.5 mg·mL－1芍藥苷對照品2，2，3，3，4 和4mL，按供試品溶液項下的制備方法制成供試品溶液，再按上述色譜條件進行測定，計算芍藥苷回收率，測定結(jié)果平均回收率99.97%，RSD=0.94%，說明此方法具有良好的準(zhǔn)確性，結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收率測定結(jié)果Tab.1 Determination results of paeoniflorin recovery

2.10 樣品測定 取3批芪生膠囊，按供試品溶液制備方法制成供試品溶液，再按上述色譜條件注入液相儀中，測定芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 芪生膠囊中芍藥苷含量測定結(jié)果Tab.2 Determination results of paeoniflorin content in Qisheng Capsule

3 討論

本復(fù)方制劑中，白芍作為方中君藥，具有鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜作用，而芍藥苷作為其含量最高的有效成分，具有抗炎和抗?jié)冏饔?，故選用芍藥苷含量作為本制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。

參考相關(guān)文獻，對芍藥苷進行200～400 nm全波長掃描，結(jié)果在230 nm時芍藥苷的吸收值最大，故選用230 nm波長為檢測波長。經(jīng)過反復(fù)考察，最終選擇甲醇-水(15∶85)為流動相，流速為 1.0mL·min－1，檢測波長為230 nm，其分離效果最好。

研究表明，本實驗采用HPLC法測定芍藥苷含量，該檢測方法準(zhǔn)確可靠，不僅可作為芪生膠囊的質(zhì)量評價方法，還為其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的建立提供了實驗依據(jù)。

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