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    銀杏達(dá)莫注射液對急性肺損傷的實(shí)驗(yàn)及分析

    2014-07-29 16:39:19肖望廖秀清劉燕君謝曉玲
    中國醫(yī)藥科學(xué) 2014年6期
    關(guān)鍵詞:保護(hù)作用急性肺損傷

    肖望+廖秀清+劉燕君+謝曉玲

    [摘要] 目的 探討銀杏達(dá)莫注射液對急性肺損傷的保護(hù)作用。方法 健康家兔24只,采用完全隨機(jī)分為3組:對照組、模型組和實(shí)驗(yàn)組,每組8只。觀察三組的MDA、SOD、肺干濕比、IL-10及TNF-a變化。結(jié)果 三組MDA比較,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);模型組SOD與其他兩組比較,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組與對照組SOD比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。三組肺干濕比比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。三組IL-10比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);三組TNF-a比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 銀杏達(dá)莫注射液對急性肺損傷具有明顯的保護(hù)作用。

    [關(guān)鍵詞] 銀杏達(dá)莫注射液;急性肺損傷;保護(hù)作用

    [中圖分類號] R541.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616(2014)06-27-03

    急性肺損傷(ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、休克等打擊后常見的外科危急并發(fā)癥,死亡率極高,目前仍無十分有效的治療方法和藥物[1-2]。本項(xiàng)目通過建立急性肺損傷動物模型,觀察銀杏達(dá)莫對組織形態(tài)學(xué)和生物學(xué)的影響,同時(shí)研究心率、呼吸、頻率、血?dú)夥治龊拖嚓P(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的動態(tài)變化[3],探討銀杏達(dá)莫注射液對急性肺損傷的保護(hù)作用和可能機(jī)制,以期為ALI/ARDS的臨床治療提供一個可能的新途徑,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    健康家兔24只,體重2.5~3.5kg,雌雄各半。

    采用完全隨機(jī)分3組:對照組、模型組和實(shí)驗(yàn)組,每組8只。動物許可證號:SYXK2006007。三組動物的體重、性別比等一般資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

    1.2 動物造模

    乙醚吸入麻醉至家兔軀體變軟,四肢活動減少,家兔頭頸部后仰并以血管鉗向外輕拉家兔舌頭使口咽部充分暴露,以耳鏡快速置入家兔口腔并暴露其聲門,當(dāng)聲門打開時(shí)迅速以注射軟管滴入LPS溶液(2mg/kg),豎立并左右晃動家兔身體以使藥物在兩肺內(nèi)分布均勻每天1次,連續(xù)2d。

    1.3 方法

    術(shù)前禁食12h,所有動物經(jīng)耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉(30mg/kg),麻醉成功后,行頸動脈置管,連接多導(dǎo)生理監(jiān)測儀,連續(xù)記錄心率、呼吸頻率等變化。實(shí)驗(yàn)組與模型組:耳緣靜脈緩慢推注油酸(0.1mL/kg),10min后靜脈注射生理鹽水30mL。對照組:耳緣靜脈注射生理鹽水30mL。

    1.4 觀察指標(biāo)

    記錄各組動物在傷前和傷后1、2、3、4h的心率、呼吸頻率,并通過動脈插管抽取血標(biāo)本,測定各時(shí)點(diǎn)血?dú)夥治鲋岛脱錞NF-a、IL-10。4h后處死動物,取左肺下葉背段1cm×1cm×1cm大小肺組織,用10%甲醛固定,石蠟包埋,切片,HE染色,光鏡下觀察其組織形態(tài)學(xué)變化。按Naokiis介紹的方法肺損傷進(jìn)行評分:把肺損傷程度分為5分:0=無損傷,1=輕度損傷,2=中度損傷,3=重度損傷,4=極重度損傷。在左下肺相同的部位取1g大小的肺組織做出勻漿液,用硫代巴比妥酸法測定丙二醛含量和超氧化物歧化酶的活性;剩余肺組織稱重后置80℃烤箱,烘烤72h至恒重,計(jì)算肺濕/干(W/D)比。肺干濕比(W/D)=濕重/干重;肺系數(shù)=100×肺濕重/體重[4]。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件,方差齊時(shí)兩兩比較采用LSD聯(lián)合SNK法;計(jì)量資料用()表示,采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料用x2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 三組上清液中MDA檢測及SOD活性結(jié)果比較

    三組MDA比較,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);模型組SOD與其他兩組比較,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組與對照組SOD比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    2.2 三組肺干濕比比較

    對照組肺干濕比為4.35±0.21,模型組為5.26±0.55,實(shí)驗(yàn)組為4.97±0.51,三組肺干濕比比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.167,P<0.05)。

    2.3 三組血清TNF-a、IL-10比較

    三組IL-10比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);三組TNF-a比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    2.4 三組HE染色圖片

    對照組:未見明顯改變,肺泡結(jié)構(gòu)多數(shù)保持完整,肺泡壁無水腫,肺間質(zhì)少見炎性細(xì)胞浸潤。模型組:肺間質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤,肺泡腔內(nèi)少量炎性細(xì)胞,肺間質(zhì)水腫,肺泡間隔增寬,肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞、融合,肺泡腔及肺間質(zhì)內(nèi)炎性出血。實(shí)驗(yàn)組:肺間質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤,肺泡腔內(nèi)少量炎性細(xì)胞,肺間質(zhì)水腫,肺泡間隔增寬,肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞、融合,肺泡腔及肺間質(zhì)內(nèi)炎性出血。與模型組相差不多。見圖1。

    A 正常對照組肺組織

    B 油酸損傷組肺組織

    C 實(shí)驗(yàn)組肺組織

    3 討論

    急性肺損傷(ALI)是由多種肺內(nèi)外致病因素引起的,以急性呼吸困難為主要臨床表現(xiàn)的全身炎癥反應(yīng)綜合征,其發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,若不能得到及時(shí)有效的治療,往往會發(fā)展成急性呼吸窘迫綜合癥(ARDS),甚至危及患者生命。至今ALI確切的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,目前認(rèn)為除有些致病因素對肺泡膜的直接損傷外,更重要的是多種效應(yīng)細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、巨唾細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等在肺內(nèi)聚集、激活導(dǎo)致氧化應(yīng)激及TNF-a、IL-10等促炎介質(zhì)增加,使肺內(nèi)抗炎介質(zhì)增加,促發(fā)過度炎癥反應(yīng),是ALI發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[5-6]。

    銀杏達(dá)莫注射液含有雙嘧達(dá)莫和銀杏葉提取制劑,銀杏葉提取制劑有效成分為銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯,是具有多種藥理作用的血管擴(kuò)張劑。具有抑制血小板活化因子,防止血栓形成,擴(kuò)張毛細(xì)血管、增加組織血流量、抑制脂質(zhì)過氧化,抑制OFR對組織的損傷,降低血中膽固醇及改善微循環(huán)等作用。而銀杏內(nèi)酯是目前被認(rèn)為最有臨床應(yīng)用前景的天然PAF受體拮抗劑[7]。其可清除氧自由基,防止自由基對神經(jīng)細(xì)胞的損傷,抑制自由基誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡;雙嘧達(dá)莫可抑制血小板的第一相聚集和第二相聚集[8],因而具有抗血栓形成作用,與銀杏內(nèi)酯聯(lián)合應(yīng)用能協(xié)同改善腦組織供血流量。而銀杏黃酮苷是氧自由基的捕捉劑和清除劑,參與清除超氧陰離子,抑制脂質(zhì)氧化反應(yīng),從而起到保護(hù)腦細(xì)胞的作用[9-10]。endprint

    MDA是OFR與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物,測定MDA可反映OFR水平從而反映內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度。SOD是機(jī)體內(nèi)抗氧化酶之一,主要清除O2-,使脂質(zhì)過氧化反應(yīng)受抑[11-12]。機(jī)體清除OFR的能力可以間接以SOD活性來衡量,SOD能清除OFR,從而抵抗細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。本研究中,三組MDA比較,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;模型組SOD與其他兩組比較,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組與對照組SOD比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明銀杏達(dá)莫具有保護(hù)損傷的肺組織得功能。IL-10是體內(nèi)最重要的抗炎因子。但是,由于其作用比較復(fù)雜,因此在ALI中的作用研究的不多,并且根據(jù)各研究實(shí)驗(yàn)條件不同結(jié)果也各異。在本課題實(shí)驗(yàn)條件下,IL-10含量在各組間并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;三組TNF-a比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    綜上所述,銀杏達(dá)莫能夠抑制血漿TNF-a含量升高,減輕PMN浸潤,清除氧自由基,減輕肺組織水腫程度而對ALI起到了有效的保護(hù)作用。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] 曹慧玲,呂士杰,姜艷霞,等.急性肺損傷家兔氧自由基變化及不同中藥治療作用的對比[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志,2006,13(3):146-149.

    [2] 馬希剛,張珍祥,徐永建.火把花根片對急性肺損傷的保護(hù)作用研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志,2007,14 (3):176-180.

    [3] 朱珊珊,劉功檢.內(nèi)毒素急性肺損傷與中性粒細(xì)胞凋亡研究現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2012,9(4):11-13.

    [4] 崔蓉,孟憲麗,王平,等.黃零水提取物對急性肺損傷家兔的保護(hù)作用及其與膽堿能抗炎通路的相關(guān)性研究[J].中草藥,2012,43(2):321-326.

    [5] 崔蓉.黃芩和黃連對急性肺損傷家兔的保護(hù)作用及其與膽堿能抗炎通路的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究[D].成都:成都中醫(yī)藥大學(xué),2012.

    [6] 徐云潔,朱蕾.川芎嗪對急性肺損傷的保護(hù)作用[J].中國臨床醫(yī)學(xué),2006,13(6):916-917.

    [7] GR Sajitha,Regi Jose,A Andrews,et al.Garlic Oil and Vitamin E Prevent the Adverse Effects of Lead Acetate and Ethanol Separately as well as in Combination in the Drinking Water of Rats[J].Indian J Clin Biochem,2010,25(3):280-288.

    [8] MM Ghaisas,YS Ahire,PR Dandawate,et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci,2011,73(6):601-607.

    [9] 崔磊,矯春曉,李敬田,等.銀杏達(dá)莫在內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷中保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥指南,2010,8(26):11-13.

    [10] 林利,詹麗英.參附注射液對大蘭內(nèi)毒素性肺損傷的保護(hù)作用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2010,26(6):942-944.

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    [12] 馮建利,姚博,杜怡峰.銀杏達(dá)莫對急性腦梗死病人血漿氧化修飾低密度脂蛋白水平的影響[J].中國新藥與臨床雜志,2007,26(2):125-128.

    (收稿日期:2014-01-14)endprint

    MDA是OFR與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物,測定MDA可反映OFR水平從而反映內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度。SOD是機(jī)體內(nèi)抗氧化酶之一,主要清除O2-,使脂質(zhì)過氧化反應(yīng)受抑[11-12]。機(jī)體清除OFR的能力可以間接以SOD活性來衡量,SOD能清除OFR,從而抵抗細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。本研究中,三組MDA比較,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;模型組SOD與其他兩組比較,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組與對照組SOD比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明銀杏達(dá)莫具有保護(hù)損傷的肺組織得功能。IL-10是體內(nèi)最重要的抗炎因子。但是,由于其作用比較復(fù)雜,因此在ALI中的作用研究的不多,并且根據(jù)各研究實(shí)驗(yàn)條件不同結(jié)果也各異。在本課題實(shí)驗(yàn)條件下,IL-10含量在各組間并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;三組TNF-a比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    綜上所述,銀杏達(dá)莫能夠抑制血漿TNF-a含量升高,減輕PMN浸潤,清除氧自由基,減輕肺組織水腫程度而對ALI起到了有效的保護(hù)作用。

    [參考文獻(xiàn)]

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    MDA是OFR與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物,測定MDA可反映OFR水平從而反映內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度。SOD是機(jī)體內(nèi)抗氧化酶之一,主要清除O2-,使脂質(zhì)過氧化反應(yīng)受抑[11-12]。機(jī)體清除OFR的能力可以間接以SOD活性來衡量,SOD能清除OFR,從而抵抗細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。本研究中,三組MDA比較,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;模型組SOD與其他兩組比較,差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組與對照組SOD比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明銀杏達(dá)莫具有保護(hù)損傷的肺組織得功能。IL-10是體內(nèi)最重要的抗炎因子。但是,由于其作用比較復(fù)雜,因此在ALI中的作用研究的不多,并且根據(jù)各研究實(shí)驗(yàn)條件不同結(jié)果也各異。在本課題實(shí)驗(yàn)條件下,IL-10含量在各組間并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;三組TNF-a比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    綜上所述,銀杏達(dá)莫能夠抑制血漿TNF-a含量升高,減輕PMN浸潤,清除氧自由基,減輕肺組織水腫程度而對ALI起到了有效的保護(hù)作用。

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    [5] 崔蓉.黃芩和黃連對急性肺損傷家兔的保護(hù)作用及其與膽堿能抗炎通路的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究[D].成都:成都中醫(yī)藥大學(xué),2012.

    [6] 徐云潔,朱蕾.川芎嗪對急性肺損傷的保護(hù)作用[J].中國臨床醫(yī)學(xué),2006,13(6):916-917.

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    [8] MM Ghaisas,YS Ahire,PR Dandawate,et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci,2011,73(6):601-607.

    [9] 崔磊,矯春曉,李敬田,等.銀杏達(dá)莫在內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷中保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥指南,2010,8(26):11-13.

    [10] 林利,詹麗英.參附注射液對大蘭內(nèi)毒素性肺損傷的保護(hù)作用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2010,26(6):942-944.

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