銀杏內(nèi)酯對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用

劉紅美+李紅月+王清

【摘要】 目的：探討銀杏內(nèi)酯對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用。方法：將40只SD小鼠隨機(jī)分為五組，分別為空白組、模型組及銀杏內(nèi)酯低、中、高劑量組。采用一次大劑量酒精灌胃制作小鼠肝損傷模型。檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）來(lái)評(píng)估銀杏內(nèi)酯對(duì)小鼠肝臟的作用。結(jié)果：模型組血清ALT及AST水平高于空白組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說明動(dòng)物模型復(fù)制成功。銀杏內(nèi)酯中、高劑量組AST、ALT水平低于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）；模型組肝組織MDA明顯高于空白組，SOD明顯低于空白組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；銀杏內(nèi)酯中、高劑量組肝組織MDA均低于模型組，SOD均高于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：銀杏內(nèi)酯對(duì)小鼠急性酒精性肝臟氧化損傷有保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】 銀杏內(nèi)酯； 酒精； 氧化損傷； 保護(hù)作用

中圖分類號(hào) R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2016）24-0160-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.24.091

酒精性肝損傷已成為繼病毒性肝炎后主要肝損傷病因，過量飲酒嚴(yán)重威脅人類健康。銀杏內(nèi)酯是銀杏葉中一類重要的活性成分，銀杏內(nèi)酯是強(qiáng)效的特異性PAF拮抗劑，可與PAF競(jìng)爭(zhēng)受體，發(fā)揮保肝的作用[1]，銀杏內(nèi)酯具有抗炎、抗氧化、抗過敏等藥理作用[2]。本實(shí)驗(yàn)通過觀察銀杏內(nèi)酯對(duì)小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平和肝組織肝臟丙二醛（MDA）、肝臟超氧化物歧化酶（SOD）的影響，以明確銀杏內(nèi)酯對(duì)肝臟的保護(hù)作用，初步探討其作用機(jī)制，為應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：40只SD雄性小鼠，體重18～22 g，購(gòu)自三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。主要試劑：銀杏內(nèi)酯購(gòu)自宜昌康正藥業(yè)有限公司（規(guī)格：2 ml/支，批號(hào)：1408143），酒精度42%（V/V）稻花香白酒，湖北稻花香酒業(yè)股份有限公司，ALT、AST檢測(cè)試劑盒，MDA、SOD試劑盒購(gòu)自上海科華生物工程股份有限公司，全自動(dòng)生化分析儀（邁瑞B(yǎng)S-350，中國(guó)邁瑞公司），離心機(jī)（TG16-WS，上海盧湘儀公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 將40只SD雄性小鼠按體重隨機(jī)分為五組：空白組、模型組、銀杏內(nèi)酯低、中、高劑量組，每組8只。

1.2.2 給藥方法 空白組、模型組用生理鹽水灌胃10 d，銀杏內(nèi)酯低、中、高劑量組小鼠分別采用銀杏內(nèi)酯0.4、0.8、1.6 g/kg灌胃，連續(xù)10 d，第11天隔夜禁食后，模型組和銀杏內(nèi)酯各組小鼠白酒灌胃0.016 L/kg（6.72 g/kg），空白組灌胃相同劑量的蒸餾水，3 h后處死。

1.2.3 血清AST、ALT及肝臟MDA、SOD測(cè)定 小鼠斷頭處死后，迅速心臟采血與分離肝臟，-80 ℃保存?zhèn)溆谩Ｐ呐K采血后，13 000 r/min，離心15 min，取血清，在全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)ALT、AST。取肝組織0.3 g，觀察其病理變化，將剪碎的肝組織在玻璃勻漿管中勻漿，再將勻漿液離心13 000 r/min，離心10 min取上清液，分裝待用，分別按MDA、SOD試劑盒說明書操作，采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定肝組織蛋白含量，通過計(jì)算可求出樣品中的MDA的含量及SOD的活力。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SSPS 11.0進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠血清AST、ALT水平比較

模型組血清ALT及AST水平高于空白組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說明動(dòng)物模型復(fù)制成功。銀杏內(nèi)酯各組小鼠血清中ALT和AST水平均低于模型組，隨銀杏內(nèi)酯劑量增加，小鼠ALT、AST水平降低。銀杏內(nèi)酯中、高劑量組AST、ALT水平低于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），見表1。

2.2 各組肝組織MDA、SOD水平比較

模型組肝組織MDA明顯高于空白組，SOD明顯低于空白組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；銀杏內(nèi)酯中、高劑量組肝組織MDA均低于模型組，SOD均高于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），見表2。

2.3 肝組織病理學(xué)觀察

光鏡觀察空白組肝組織形態(tài)學(xué)正常；而模型組可見紊亂的肝細(xì)胞索，肝細(xì)胞腫脹變性，胞質(zhì)疏松，胞質(zhì)內(nèi)可見大小不一的脂肪空泡和水樣變性，小葉內(nèi)片狀壞死，毛細(xì)血管及匯管區(qū)內(nèi)膽管膽汁淤積，匯管區(qū)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，以中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主，門管區(qū)有不同程度的小膽管增生，與正常組有明顯差異；銀杏內(nèi)酯低劑量組與模型組無(wú)明顯差異，而銀杏內(nèi)酯中、高劑量組表現(xiàn)為肝細(xì)胞點(diǎn)狀或灶狀壞死，甚至有的僅有肝細(xì)胞變性和點(diǎn)狀壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，與模型組比較有明顯差異。

3 討論

肝臟是酒精吸收后的主要代謝場(chǎng)所，對(duì)酒精發(fā)生生物轉(zhuǎn)化作用。正常情況下，機(jī)體內(nèi)存在活性氧和自由基清除抗氧化系統(tǒng)，自由基清除劑對(duì)維持機(jī)體的正常生命活動(dòng)起著重要的作用。乙醇導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷的機(jī)制較復(fù)雜，普遍認(rèn)為抗氧化損傷、脂質(zhì)過氧化損傷及免疫損傷等起主要作用[3]。乙醇作為一種強(qiáng)烈的氧化應(yīng)激源，在代謝過程中誘生出大量的自由基，許多疾病的發(fā)生都與自由基的氧化破壞有關(guān)，是造成多器官、多系統(tǒng)損傷的重要機(jī)制之一[4-5]。過量飲酒，當(dāng)超過機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的清除能力時(shí)，氧化損傷難以避免，其中以肝臟的損傷最為嚴(yán)重[6]。

本研究采用酒精急性肝損傷模型，一次大劑量酒精沖擊（42% V/V，0.016 L/kg）和禁食聯(lián)合造模，其機(jī)制除與乙醇早期干擾肝脂質(zhì)代謝外，還與禁食引起肝脂肪動(dòng)員有關(guān)，引起糖原含量降低，加速糖異生合成脂肪[7-8]。ALT與AST主要分布在肝臟的肝細(xì)胞內(nèi)，其升高的程度與肝細(xì)胞受損的程度相一致，在一定程度上可以反映肝細(xì)胞的損傷程度。本研究發(fā)現(xiàn)，預(yù)先給予銀杏內(nèi)酯進(jìn)行干預(yù)，銀杏內(nèi)酯中、高劑量組和模型組比較，血清ALT和AST水平明顯降低，可見銀杏內(nèi)酯對(duì)急性酒精性肝氧化損傷具有較強(qiáng)的保護(hù)作用。MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的主要產(chǎn)物之一，MDA也是反映肝損傷程度的有效指標(biāo)，其含量越高說明肝細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化越強(qiáng)，受損越嚴(yán)重[9]。SOD為自由基清除劑，是生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)，減弱機(jī)體的氧化應(yīng)激狀態(tài)。本研究預(yù)先給予銀杏內(nèi)酯進(jìn)行干預(yù)，銀杏內(nèi)酯中、高劑量組和模型組比較，肝組織MDA明顯較低，肝組織SOD明顯較高，說明銀杏內(nèi)酯可提高肝組織SOD水平，降低MDA水平，從而有防治酒精性肝損傷的作用。

綜上所述，不同劑量的銀杏內(nèi)酯可以降低小鼠血清中ALT、AST和肝組織MDA水平，并能提高SOD水平，結(jié)合光鏡觀察結(jié)果，說明銀杏內(nèi)酯起到抗脂質(zhì)過氧化作用，對(duì)小鼠酒精性肝損傷有保護(hù)作用，為臨床上銀杏內(nèi)酯用于防治酒精性肝細(xì)胞氧化損傷提供科學(xué)依據(jù)。

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（收稿日期：2016-04-21）