五麥黨黃口服液對(duì)輻射損傷小鼠臟器中自由基清除能力的影響

徐春紅 ，李 鵬 ，盧海波 ，謝 梅 ，楊曉燕

（1．中國人民解放軍第452醫(yī)院，四川 成都 610021； 2．中國人民解放軍78491部隊(duì)，四川 成都 610017)

電離輻射作用于機(jī)體會(huì)產(chǎn)生大量自由基，這些自由基成為傳遞輻射能的主要媒介，從而引發(fā)一系列的放射生物效應(yīng)。為了對(duì)抗電離輻射所引起的自由基損傷，多年來，中醫(yī)中藥以其低毒、易得成為抗輻射損傷研究的熱點(diǎn)。五麥黨黃口服液（WMDH）原為中醫(yī)專家呼永和根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)擬訂的中藥方劑，由五味子、麥冬、黨參、黃芪、陳皮、青皮、白術(shù)、蒼術(shù)、當(dāng)歸組方，具有益氣養(yǎng)陰、運(yùn)脾健胃之功效，用于部隊(duì)官兵大運(yùn)動(dòng)量訓(xùn)練后抗疲勞、恢復(fù)體能，提高機(jī)體在疲勞及高原缺氧環(huán)境的生存能力[1]。筆者擬觀察受照小鼠服用WMDH后其主要臟器中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、抑制羥自由基能力的變化，研究WMDH對(duì)輻射所致小鼠各臟器中自由基的清除作用，探討其抗輻射作用，為其臨床防輻射應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 藥物與試劑

WMDH（由中國人民解放軍第452醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)為20110701，規(guī)格為每支10 mL），臨用前按照各組給藥劑量濃縮至相應(yīng)濃度。SOD測(cè)試盒（測(cè)總SOD）、MDA測(cè)試盒、羥自由基（·OH-）測(cè)試盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1．2 試驗(yàn)動(dòng)物及處理

KM小鼠，體重 18～22 g，雌雄各半，6～8周齡，四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)為SCXK(川)2009-09，試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境3 d后進(jìn)行試驗(yàn)，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為（20±2）℃，自由進(jìn)食、飲水。隨機(jī)分成正常對(duì)照組，輻照模型組，WMDH低、中、高劑量組(7．3，14．6，29．2 g ／kg，相當(dāng)于 60 kg 成人日用藥量的 2．5，5，10倍)，共 5組，各 10只。輻照模型組和 WMDH低、中、高劑量組均接受1次全身γ射線輻射，總劑量為3 Gy。WMDH各劑量組于照射后即以相應(yīng)濃度的WMDH液灌胃給藥，連續(xù)7 d，每天1次；正常對(duì)照組與輻照模型組同法給予等容積的蒸餾水。各組均正常喂飼。

1．3 組織樣本制備

于試驗(yàn)第8天頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，取肝臟、脾臟、腎臟及肺。準(zhǔn)確稱取組織濕重，加0．9%氯化鈉注射液制成1→10的組織勻漿，以2 500 r／min的速率離心10 min，取上清液再用0．9%氯化鈉注射液稀釋成不同濃度的組織勻漿待測(cè)。

1．4 觀察指標(biāo)

制備好的組織勻漿稀釋成不同濃度，分別按試劑盒說明書測(cè)定肝、脾、腎及肺組織中SOD活力、MDA含量、抑制·OH-能力。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)軟件，組間比較采用 t檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1和表2。

表1 WMDH對(duì)60Co 射線照射小鼠主要臟器SOD和MDA的影響(±s，n＝10)

表1 WMDH對(duì)60Co 射線照射小鼠主要臟器SOD和MDA的影響(±s，n＝10)

注：與正常對(duì)照組比較， P ＜0．05， P ＜0．01；與輻照模型組比較， P ＜0．05， P ＜0．01。下表同。

組別 劑量（g ／kg）正常對(duì)照組輻照模型組WMDH低劑量組中劑量組高劑量組--7．3 14．6 29．2 SOD活力(U／mgport) MDA含量( mol／gport)肝脾腎肺肝脾腎肺262．26 ± 49．58 226．47 ± 29．49 235．84 ± 24．18 243．48 ± 42．52 244．10 ± 19．93 41．87 ± 11．54 34．66 ± 10．58 37．45 ± 6．33 40．89 ± 7．51 39．69 ± 7．18 175．26 ± 29．12 149．89 ± 26．78 153．45 ± 19．87 174．71 ± 29．45 186．63 ± 35．48 149．19 ± 21．44 114．58 ± 23．41 120．47 ± 22．55 139．29 ± 34．89 156．47 ± 36．63 2．65 ± 0．44 3．06 ± 0．67 2．86 ± 0．45 2．70 ± 0．52 2．71 ± 0．62 1．48 ± 0．26 1．72 ± 0．22 1．51 ± 0．17 1．52 ± 0．35 1．45 ± 0．39 2．93 ± 0．59 3．29 ± 0．72 3．04 ± 0．64 2．69 ± 0．57 2．57 ± 0．29 1．86 ± 0．31 2．45 ± 0．33 2．14 ± 0．40 1．72 ± 0．22 1．74 ± 0．20

表2 WMDH對(duì)60Co 射線照射小鼠主要臟器抑制羥自由基的影響(±s，n＝10)

表2 WMDH對(duì)60Co 射線照射小鼠主要臟器抑制羥自由基的影響(±s，n＝10)

組別 抑制羥自由基能力(U／mgport)劑量（g ／kg）肝脾腎肺正常對(duì)照組輻照模型組WMDH低劑量組中劑量組高劑量組- -7．3 14．6 29．2 536．42 ±92．45 378．87 ±102．64 426．65 ± 110．79 442．10 ± 82．49 476．31 ±93．02 124．96 ±29．56 89．41 ±17．95 92．15 ± 23．45 118．63 ± 20．45 129．65 ±31．25 236．12 ±42．12 167．16 ±33．44 172．64 ±45．77 184．32 ±26．71 198．51 ±32．52 259．11 ±52．45 175．78 ±41．26 215．98 ± 46．99 247．57 ± 55．68 239．35 ±54．59

3 討論

自由基是人體生命活動(dòng)中各種生化反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物，具有高度的化學(xué)活性，參與細(xì)胞分裂、分化等重要生理功能。但過多的自由基也作用于細(xì)胞膜上的脂質(zhì)，使其過氧化，從而破壞細(xì)胞膜的雙分子層結(jié)構(gòu)，還會(huì)導(dǎo)致DNA的堿基和脫氧核糖發(fā)生化學(xué)變化，引起堿基改變、破壞或脫落，脫氧核糖分解，磷酸二脂鍵斷裂，以及DNA核苷酸鏈的單鏈和雙鏈斷裂等；自由基對(duì)蛋白質(zhì)也會(huì)產(chǎn)生多種損傷，可引起蛋白質(zhì)分子發(fā)生交聯(lián)、聚合、肽鏈斷裂。此外，自由基還可引起細(xì)胞致死性突變及細(xì)胞癌變等生物學(xué)效應(yīng)[2]。

自由基和活性氧是電離輻射對(duì)生物系統(tǒng)作用的重要產(chǎn)物，在輻射效應(yīng)的發(fā)生機(jī)制中起重要作用，正常組織受到高劑量輻射后，自由基生成增加，清除能力下降，通過直接或間接作用對(duì)機(jī)體造成損害。自由基作用于生物膜引起膜的脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生MDA，造成生物膜功能和代謝的改變；SOD是機(jī)體主要清除自由基的抗氧化酶，其活力的高低可反映機(jī)體清除自由基的能力。因此，選取小鼠主要臟器的SOD活力、MDA含量、抑制·OH-能力為觀察指標(biāo)。

中醫(yī)認(rèn)為，輻射傷病機(jī)上屬于的熱邪侵犯機(jī)體致使陰傷和氣血不足所致病癥，為邪熱傷陰、氣血兩虛以及脾胃不和、肝腎虧損等原因所致[3-4]，治療原則以清熱生津、補(bǔ)益氣血為主。方中黨參可補(bǔ)中益氣、生津養(yǎng)血，為主藥；又因黨參補(bǔ)氣力之不足，故益之以黃芪。麥冬潤肺養(yǎng)陰，益胃生津，清心除煩；五味子斂肺滋腎，生津止汗，寧心安神，以佐參、芪溫補(bǔ)之偏，組方在黃芪生脈飲基礎(chǔ)方補(bǔ)中益氣、養(yǎng)陰生津的同時(shí)，以白術(shù)、大棗等益氣健脾為主，輔以青、陳皮、澤瀉燥濕除逆，幫助參、術(shù)健脾，生姜溫中下氣，當(dāng)歸行血和營，建曲導(dǎo)滯化積，甘草調(diào)和諸藥。全方旨在益氣養(yǎng)陰、運(yùn)脾健胃，提高機(jī)體免疫能力，對(duì)抗輻射損傷[5]。

本研究結(jié)果表明，WMDH對(duì)提高受照小鼠臟器組織的SOD活性、抑制·OH-能力，降低受損臟器 MDA含量均有一定作用，對(duì)肝、脾、肺組織影響尤為顯著，其量效關(guān)系需進(jìn)一步研究探明。

[1]李 鵬，胡 露，張 勇，等．五麥黨黃湯對(duì)小鼠抗疲勞、耐缺氧和抗寒熱能力的影響[J]．西南國防醫(yī)藥，2012，22（1）：16-18．

[2]王崇道，強(qiáng)亦忠．電離輻射所致自由基對(duì)機(jī)體的損傷與自由基清除劑的研究[J]．中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2002，22(6)：461-463．

[3]沈世林，張汝學(xué)，賈正平．具有抗輻射損傷作用的中藥復(fù)方研究進(jìn)展概述[J]．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13（11）：64-66．

[4]黃黎明，石 鵬，張琳靜，等．抗輻射復(fù)方中藥對(duì)輻射損傷小鼠的防護(hù)作用研究[J]．中國藥事，2011，25（2）：132-134．

[5]徐春紅，李 鵬，謝 梅，等．五麥黨黃口服液對(duì)輻射損傷小鼠防護(hù)作用的初步研究[J]．中國藥業(yè)，2013，22（15）：17-18．