淺談磷的檢測(cè)原理方法和臨床意義

杜海龍

摘要：目的：探討磷的檢測(cè)的原理、方法和臨床意義。方法：是基于磷酸鹽離子和鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸鹽復(fù)合物，然后用光度法測(cè)定。結(jié)論：直接測(cè)定磷鉬酸鹽復(fù)合方法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單、快速和穩(wěn)定。但缺點(diǎn)是受溶血、黃疸、脂血的干擾較大。酶學(xué)測(cè)定方法的優(yōu)點(diǎn)是不受膽紅素干擾，在中性pH環(huán)境中反應(yīng)，可減少有機(jī)磷酸酯的水解；缺點(diǎn)是酶法試劑昂貴，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用不多。

關(guān)鍵詞：血漿;無(wú)機(jī)磷酸鹽; 磷檢測(cè)【中圖分類號(hào)】R446.11【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1672-8602(2014)04-0210-01

通常測(cè)定的血磷是指血漿中無(wú)機(jī)磷酸鹽所含的磷，正常人僅有0．6～1．6 mmol／L，兒童稍高。磷元素符號(hào)為P；其原子量力30．97。磷酸鹽形式為H2PO4、HPO42+；其分子量分別為96．98，95．97。人體內(nèi)含磷17 mol(530 g)，其中87％存在骨骼中，其余在軟組織中、細(xì)胞內(nèi)。血液的磷可分為4部分：無(wú)機(jī)磷，以H2PO4-及HPO42-的形式存在。其中H2PO4-占20％，HPO42-占80％；②有機(jī)磷或磷酸酯亭如甘油磷酸酯、磷酸核苷酸、磷酸己糖等；③含磷脂類：如卵磷脂、腦磷脂、鞘磷脂等；④少量的其他磷化物。測(cè)定無(wú)機(jī)磷酸鹽的最古老、最常用的方法是基于磷酸鹽離子和鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸鹽復(fù)合物，然后用光度法測(cè)定。磷鉬酸鹽復(fù)合物可以用紫外吸收(340 nm)直接測(cè)定；也可以用還原劑將磷鉬酸鹽復(fù)合物還原成有色的鉬藍(lán)，然后用比色法測(cè)定。直接測(cè)定磷鉬酸鹽復(fù)合方法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單、快速和穩(wěn)定。但缺點(diǎn)是受溶血、黃疸、脂血的干擾較大。酶學(xué)測(cè)定方法的優(yōu)點(diǎn)是不受膽紅素干擾，在中性pH環(huán)境中反應(yīng)，可減少有機(jī)磷酸酯的水解；缺點(diǎn)是酶法試劑昂貴，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用不多。下面將磷的檢測(cè)原理、方法和臨床意義分析匯報(bào)如下。

1硫酸亞鐵鉬藍(lán)比色法

1.1原理:以三氯醋酸沉淀蛋白，在無(wú)蛋白濾液中加入鉬酸銨試劑，與無(wú)機(jī)磷結(jié)合成磷鉬酸鹽復(fù)合物，再以硫酸亞鐵為還原劑，還原成藍(lán)色化合物，進(jìn)行比色測(cè)定。與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較求得血清中磷含量。反應(yīng)式如下：(NH4)6Mo7O24+3H2SO4→7H2MoO4+3(NH4)2SO412H2MoO4+H3PO4→12MoO3?H3PO4+12H2O12MoO3?H2PO4+還原劑→鉬藍(lán)(MB)

1.2試劑:(1)三氯醋酸-硫酸亞鐵溶液：稱取硫脲10g硫酸亞鐵(FeSO4?7H2O)10．6 g和三氯醋酸100g，以去離子水溶解并稀釋至l L，置冰箱保存。(2)鉬酸銨溶液：稱取鉬銨4．4g溶解于約40ml去離子水中，取濃硫酸9ml，滴加入約40ml去離子水中，將兩液合并，以去離子水稀釋至100ml。(3)無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)貯存液(32．29 mmol／L)：稱取無(wú)水磷酸二氫鉀(KH2PO4，AR)4．39 g，用去離子水溶解后移入1 L容量瓶中，并稀釋至刻度，再加入氯仿2ml防腐，置冰箱中保存。(4)無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(1．29 mmol／L)：取無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)貯存液4 ml加入100 ml容量瓶中，以去離子水稀釋至刻度，加人1 ml氯仿防腐，置冰箱中保存。

1.3操作:取血清0．2 ml，加入三氯醋酸-硫酸亞鐵液4．8 ml，充分混勻，放置10分鐘后，離心沉淀。無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)也同樣處理。

1.4計(jì)算:血清無(wú)機(jī)磷(mmol／L)=×1．292

1.5參考值:(1)血清無(wú)機(jī)磷：成人0．96～1．62 mmol／L，兒童1.45～2．10 mmol／L。(2)尿磷排泄量：成人16．14～41．98 mmol／24 h。(3)腦脊液無(wú)機(jī)磷：0．29～O．65 mmol／L。

2紫外分光光度法

2.1原理:血清中無(wú)機(jī)磷在酸性溶液中與鉬酸銨作用所形成的復(fù)合物，直接用340 nm或325 nm波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度。

2.2試劑 :(1)360 mmol／L硫酸：準(zhǔn)確吸取濃硫酸(AR)2ml加至98 ml丑水中，混勻即可。 (2)0．15mmol／L鉬酸銨：稱取鉬酸銨(AR)111．2mg、NaN350mg至小燒杯中，加50ml蒸餾水溶解并轉(zhuǎn)入加Triton X-100 0．2 ml，然后加水至刻度。 (3)應(yīng)用液：應(yīng)用前根據(jù)標(biāo)本的數(shù)量，將上述100 ml容量瓶中，"(1)"液和"(2)"液等量混合。 (4)無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液：1 ml=C=0．04 mg P或1．292 mmoL／L，配制方法見前法。

2.3操作:取試管3支，標(biāo)明測(cè)定管、標(biāo)準(zhǔn)管和空白管。

2.4計(jì)算: 血清無(wú)機(jī)磷(mmol／L)=×1．，292

2.5參考值0．9～1．34 mmol／L(2．78～4．15 mg／d1)。

3米吐爾直接顯色法

3.1原理:利用磷在酸性溶液中與鉬銨起反應(yīng)生成磷酸鉬酸絡(luò)合物，用對(duì)甲氨基酚硫酸鹽(米吐爾)還原生成鉬藍(lán)。在試劑中加吐溫80以抑制蛋白質(zhì)的干擾。

3.2試劑:(1)鉬酸銨溶液：在50ml去離子水中加濃硫酸3．3ml，再加鉬酸銨0．2g，溶解后加吐溫-800．5ml，最后加去離子水至100ml。(2)對(duì)甲氨基酚硫酸鹽(米吐爾)溶液：稱取對(duì)甲氨基酚硫酸鹽2 g，溶于80 ml去離子水中，加無(wú)水硫酸鈉5 g，最后加去離子水至100ml。(3)顯色應(yīng)用液：取l液10 ml，2液1．1 ml混合即可應(yīng)用。 (4)磷標(biāo)準(zhǔn)液配制方法同前法。

3.3操作: 取試管3支，標(biāo)明測(cè)定、標(biāo)準(zhǔn)和空白管。

3.4計(jì)算: 血清無(wú)機(jī)磷(mmol／L)=測(cè)定管吸光度／標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×1．292。

4臨床意義

4.1血清無(wú)機(jī)磷增高：（1）甲狀旁腺功能減退癥由于激素分泌減少，使腎小管對(duì)磷的重吸收失去控制而增強(qiáng)吸收，因而使血磷增高。 （2）假性甲狀旁腺功能減退癥也伴有血清磷增高。（3）維生素D過多癥時(shí)維生素D促進(jìn)腸道吸收鈣磷，血清鈣磷均可增高。（4）腎功能不全或衰竭，尿毒癥或慢性腎炎晚期等磷酸鹽排泄障礙，而使血磷潴留。（5）多發(fā)性骨髓瘤血磷可輕度增高。（6）骨折愈合期。

4.2血清無(wú)機(jī)磷減低：（1）甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥腎小管重吸收磷受抵制而減弱，尿磷排泄增多，血磷常見減低，可低至0．8 mmol／L以下。（2）維生素D缺乏病或軟骨病由于維生素D吸收不足，或魂少日光照射，伴有繼發(fā)性甲狀旁腺增生，使尿磷排泄增多而血磷減低。（3）連續(xù)靜脈注射葡萄糖同時(shí)注射胰島素的治療措施，或患胰腺癌，伴有胰島素過多癥，使糖的利用增加，而糖代謝必須經(jīng)過磷酸化作用，需用大量無(wú)機(jī)磷酸鹽，而使血磷下降。（4）腎小管變性病變，使腎小管重吸收功能發(fā)生障礙，使尿中丟失大量無(wú)機(jī)磷，血磷偏低，如Fanconi綜合征。（5）乳糜瀉等由于腸內(nèi)有多量脂肪存在，抵制鈣磷的吸收，使血磷減低。

4.3尿磷排泄增多：見于甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥、方氏綜合征、代謝性堿中毒。

4.4尿磷排泄減少：見于甲狀旁腺減退癥、維生素D缺乏病、乳糜瀉、腎衰竭，伴有酸中毒的腎炎、糖利用增加等情況。

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