HPLC-ELSD法測(cè)定不同產(chǎn)地小茴香中亞油酸含量

錢生勇，顧湘

南通市腫瘤醫(yī)院藥劑科，江蘇南通　226000

HPLC-ELSD法測(cè)定不同產(chǎn)地小茴香中亞油酸含量

錢生勇，顧湘

南通市腫瘤醫(yī)院藥劑科，江蘇南通226000

摘要目的：建立小茴香中亞油酸含量的HPLC-ELSD測(cè)定方法并測(cè)定不同產(chǎn)地小茴香的亞油酸含量。方法：采用Cosmosil 5 C18-MS-Ⅱ柱，甲醇-水-冰醋酸（95∶5∶0.1%），流速1.0 mL· min-1，柱溫35℃，漂移管溫度40℃，霧化氣N2，載氣流速3.0 L·min-1。結(jié)果與結(jié)論：本法測(cè)定小茴香中亞油酸含量簡(jiǎn)便可靠。測(cè)得4個(gè)產(chǎn)地小茴香中亞油酸含量最高為8.73 mg·g-1，最低為1.70 mg·g-1。不同產(chǎn)地小茴香中亞油酸含量差異明顯。

關(guān)鍵詞亞油酸；小茴香；HPLC-ELSD；含量測(cè)定

小茴香始載于《唐本草》，為傘形科植物茴香（Foeniculu vulgareMill.）的干燥成熟果實(shí)。味辛，性溫，具有散寒止痛、理氣和胃的功能。小茴香被國(guó)家衛(wèi)生部正式確定為“既是藥品，又是食品”的極具開(kāi)發(fā)潛力的資源之一，受到人們的廣泛關(guān)注[1]。

小茴香主要成分為脂肪油（約18%）、揮發(fā)油（3%～6%）、甾醇及糖苷、氨基酸等[2]。亞油酸是人營(yíng)養(yǎng)中必須的脂肪酸，具有降低血脂、血壓，軟化血管，促進(jìn)微循環(huán)的作用。然而，目前國(guó)內(nèi)關(guān)于小茴香化學(xué)成分的研究中僅對(duì)其揮發(fā)油進(jìn)行了分析，歷版《中國(guó)藥典》[3]未對(duì)小茴香脂肪油含量測(cè)定提出要求。本文建立了HPLC-ELSD色譜測(cè)定法，對(duì)不同產(chǎn)地小茴香脂肪油中的亞油酸含量進(jìn)行測(cè)定，為其質(zhì)量控制提供參考。

1　儀器與試藥

日本島津LC-20AB高效液相色譜儀，ELSD-Ⅱ低溫型檢測(cè)器。

小茴香藥材購(gòu)自不同產(chǎn)地，安徽、山西、河南、廣西各1批；為傘形科植物茴香Foeniculu vulgareMill.的干燥成熟果實(shí)。亞油酸對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度高于99.1%；甲醇為色譜純；冰醋酸為分析純；水為純化水。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱NACALAI公司，Cosmosil 5 C18-MS-Ⅱ柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸（95∶5∶0.1%）；柱溫：35℃；流速1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量10 μL。漂移管溫度40℃，霧化氣N2，載氣流速3.0 L·min-1。對(duì)照品和樣品色譜分離見(jiàn)圖1。

圖1　亞油酸對(duì)照品（A）和樣品（B）蒸發(fā)光散射圖

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取亞油酸25.20 mg，用甲醇溶于10 mL量瓶中定容至刻度，搖勻，作為亞油酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度為2.52 mg·mL-1。分別精密量取儲(chǔ)備液5.0、2.5、0.75、0.25、0.125 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻作為亞油酸的對(duì)照品溶液，濃度分別為1260.0、630.0、189.0、63.0、31.5μg·mL-1。

2.3供試品溶液的制備

精密稱定本品粉末（過(guò)24目篩）2.0 g，置50 mL具塞三角錐形瓶中，加入石油醚（60～90℃）30 mL，密塞，搖勻，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）2次，每次30 min，濾過(guò)，減壓回收石油醚得總脂肪油，用甲醇復(fù)溶，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶?jī)?nèi)，甲醇定容，0.45 μm濾膜過(guò)濾，取濾液，即得。

2.4線性關(guān)系考察

分別精密吸取亞油酸對(duì)照品系列溶液10 μL，在上述色譜條件下，直接注入色譜儀進(jìn)行分析，分析并記錄結(jié)果（色譜峰面積）。以峰面積積分值A(chǔ)的對(duì)數(shù)值對(duì)對(duì)照品進(jìn)樣濃度C（μg·mL-1）的對(duì)數(shù)值進(jìn)行回歸分析，得回歸方程Y=1.548X+1.979，r= 0.9995。結(jié)果表明，亞油酸在31.5～1260.0 μL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

精密吸取亞油酸對(duì)照品溶液（31.5 μg·mL-1）10 μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，分別測(cè)定亞油酸的峰面積，結(jié)果RSD為1.27%。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批小茴香6份（過(guò)24目篩），各約2.0g，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下操作，按上述色譜條件測(cè)定各樣品的峰面積，計(jì)算得亞油酸含量的RSD為1.25%。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取小茴香供試品溶液，分別于0、1、2、3、4 h在上述色譜條件下進(jìn)樣分析。計(jì)算亞油酸峰面積的RSD為0.74%，結(jié)果表明供試品在4 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

稱取已知含量的小茴香（編號(hào)1）藥材粉末約1.0 g，分別精密按相當(dāng)于藥材中亞油酸的80%、100%、120%的量加入對(duì)照品溶液，配制成高、中、低3個(gè)水平的加樣供試品溶液（各水平平行操作3份），在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，計(jì)算得亞油酸的平均回收率為98.02%，RSD為1.37%。

2.9樣品含量測(cè)定

按上述方法對(duì)各產(chǎn)地小茴香進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為10 μL，以外標(biāo)法計(jì)算亞油酸的含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

3　討論

3.1檢測(cè)器的選擇

文獻(xiàn)中關(guān)于亞油酸或其他中藥材中脂肪酸的化學(xué)成分研究多采用GC[4]或GC-MS，由于分析過(guò)程中柱溫過(guò)高，易使亞油酸雙鍵斷裂或產(chǎn)生雙鍵的異構(gòu)化現(xiàn)象。也有報(bào)道[5]，使用HPLC法測(cè)定火麻仁中α-亞麻酸、亞油酸和油酸含量，由于亞油酸分子結(jié)構(gòu)中僅含有非共軛雙鍵，選擇203 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，存在著末端吸收的問(wèn)題。本文選擇了更具通用性的蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。該方法具有簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。

表1　不同產(chǎn)地小茴香中亞油酸的檢測(cè)結(jié)果（n=3）

3.2含量差異的原因

本文的檢測(cè)結(jié)果表明不同產(chǎn)地小茴香中亞油酸含量有明顯差異，廣西產(chǎn)小茴香亞油酸含量較高，安徽次之，再次是河南和山西，可能與土壤、采收時(shí)間等有關(guān)，其原因有待進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)

[1] 付起鳳，張艷麗，許樹(shù)軍，等.小茴香化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥信息，2008，25（5）：24-6.

[2] 聶凌云，吳玫涵.小茴香的質(zhì)量分析研究進(jìn)展[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2001，17（4）：198-200.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：44.

[4] 韓娜，趙建邦，宋平順.氣相色譜法測(cè)定火麻仁中亞油酸及α-亞麻酸的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（3）：83-5.

[5] 秦建平，陸艷芹，羅雪磊，等.HPLC同時(shí)測(cè)定火麻仁中α-亞麻酸、亞油酸和油酸含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（7）：71-3.

中圖分類號(hào)R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號(hào)1673-7806（2014）05-422-02

作者簡(jiǎn)介錢生勇，男，副主任藥師E-mail:qianshengyong@126.com

收稿日期2014-04-10修回日期2014-05-15

Determination of Linoleic Acid in Foeniculum vulgare Mill.from Different Habitats by HPLC-ELSD

QIAN Sheng-yong,GU Xiang
Pharmacy Department of Nantong Tumor Hospital,Jiangsu Province,Nantong,226000,China

ABSTRACTObjective：To establish a quantitative HPLC-ELSD method for the determination of linoleic acid inFoeniculumvulgare Mill.fromdifferent habitats.Methods：A column of Cosmosil 5C18-MS-Ⅱwas used with the mobile phase of methanol and water and acetic acid(95∶5∶0.1%),the fIow rate was 1.0 mL· min-1,and the column temperature was set at 35℃.The temperature of drift tube was set at 40℃with an air fIow rate of 3.0 L·min-1for ELSD.Results and Conclusion：The established HPLC-ELSD method is simple and suitable for the quality control of Foeniculumvulgare Mill.The maximumcontent of linoleic acid inFoeniculumvulgareMill.fromfour habitats was 8.73 mg·g-1and the minimumcontent was 1.70 mg· g-1.Great difference of linoleic acid content is shown in Foeniculumvulgare Mill.fromdifferent habitats.

KEY WORDSLinoleic acid;FoeniculumvulgareMill.;HPLC-ELSD;Content determination