劉洋 葛懷禮 于和水
摘 要:建立離子色譜法檢測(cè)牛奶中硫氰酸根的檢測(cè)方法,解決了雜峰對(duì)樣品峰的干擾。樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白,冷凍離心,取上清液過RP柱待測(cè)。優(yōu)化了色譜條件,以5%的丙酮和5.0 mmol/L的碳酸鈉為緩沖液,保留時(shí)間為12.5 min,回收率在94.51%~104.21%之間,RSD為1.95%。定量范圍為0.1~2.0 μg/mL,檢出限為0.02 μg/mL,本方法簡(jiǎn)單快速,重現(xiàn)性好,靈敏度、準(zhǔn)確度高,適用于牛奶中硫氰酸根的檢測(cè)。
關(guān)鍵詞:離子色譜;牛奶;硫氰酸根
Abstract:Detection method of thiocyanate by ion chromatography was established in milk, solve the interference peak to peak. Samples were first deproteined with acetonitrile, deproteinized by high-speed frozen centrifugation, purified with the RP column. Under the optimal conditions, with 5% of acetone and 5.0 mmol/L of sodium carbonate as the running buffer. Retention time was 12.5 min. The recoveries ranged from 94.51% to 104.21%, and average relative standard deviation was 1.95%. The liner range is 0.1~ 2.0 μg/mL with the detection limit of 0.02 μg/mL. The method is simple and rapid, reproducible, sensitive, accurate, suitable for the detection of thiocyanate in milk.
Key word:ion chromatography; milk; thiocyanate
我國1995年發(fā)布了GB/T15550—1995《活化乳中乳過氧化物酶體系保存生鮮牛乳實(shí)施規(guī)范》[1],添加硫氰酸鈉15 mg/kg利用乳過氧化物酶、硫氰酸根和過氧化氫組成了生鮮乳保存體系,防止牛奶變質(zhì)。但由于硫氰酸鈉的毒副作用及其濫用,2008年12月15日,衛(wèi)生部印發(fā)《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用食品添加劑品種名單(第一批)》。名單明確指出:硫氰酸鈉嚴(yán)禁用于乳與乳制品中。硫氰酸根的檢測(cè)方法有分光光度法[2]、點(diǎn)位滴定法[3]和離子色譜-質(zhì)譜分析法[4],但是沒有形成統(tǒng)一的國家標(biāo)準(zhǔn)。本人在硫氰酸根的日常檢測(cè)中,對(duì)檢測(cè)方法的一些細(xì)節(jié)進(jìn)行了調(diào)整和優(yōu)化,從而達(dá)到適應(yīng)本單位儀器設(shè)備的目的。
1 材料方法
1.1儀器和試劑
瑞士萬通離子色譜883型;超純水;乙腈(色譜純);硫氰酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品,純度99%,天津元力化工有限公司;冷凍離心機(jī);固相萃取小柱(RP柱 3mL)電子天平;鼓風(fēng)干燥箱。
1.2上機(jī)條件
色譜柱:Metrosep A supp 4 250/4.0
保護(hù)?。篗etrosep RP 2 Guard/3.5
流動(dòng)相:5 mmol/L Na2CO3以及5%的丙酮
流速:1.0 mL/min
定量環(huán)體積:100 μL
1.3標(biāo)準(zhǔn)品的制備
將硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)品于80℃烘箱內(nèi)烘干2 h。準(zhǔn)確稱取干燥后的硫氰酸鉀1.673 2 g于1 000 mL容量瓶中,定容,混勻。即得1 mg/mL硫氰酸根標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度:0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/mL。
1.4樣品的制備
移取8.0 mL生鮮乳樣品,加入10.0 mL乙腈沉淀蛋白5 min,冷凍離心,移取上清液過RP柱上機(jī)待測(cè)。
1.5計(jì)算公式
C —樣品中硫氰酸根的濃度(μg/mL)
C1—上機(jī)液體中硫氰酸根的濃度(μg/mL)
2 結(jié)果與分析
2.1碳酸鈉和碳酸氫鈉比例
緩沖液中碳酸鈉和碳酸氫鈉的濃度主要由所用色譜柱的型號(hào)決定,Metrosep A supp 4 250/4.0型色譜柱的通用的流動(dòng)相比例為1.7 mmol/L 碳酸鈉,1.8 mmol/L碳酸氫鈉,然而在實(shí)際檢測(cè)過程中會(huì)有雜峰的干擾,分離度不好,通過配置不濃度配比的碳酸鈉和碳酸氫鈉,檢測(cè)同一有雜峰的牛奶樣品,其對(duì)分離度結(jié)果見表1??梢娞妓徕c和碳酸氫鈉的濃度配比是分離度主要影響因素,當(dāng)只加5.0 mmol/L碳酸鈉時(shí)分離度最好,R=5.57。
2.2有機(jī)相的選擇
有機(jī)相文本選用5%丙酮,丙酮主要作用是改善峰型,提高了準(zhǔn)確性,縮短出峰時(shí)間,提高工作效率。圖1 為檢測(cè)不同濃度5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品的峰型圖,觀察保留時(shí)間,結(jié)果見表2,平均保留時(shí)間為12.64 min。
2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線線性
測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列為y = 0.195 1x - 0.000 7; y:峰面積,x:濃度;相關(guān)系數(shù)為0.999 86。
2.4加標(biāo)回收
按樣品處理方法制備了0.75、0.52和0.80 μg/mL 三種不同牛奶樣品溶液,用優(yōu)化后的方法分別測(cè)定樣品中的硫氰酸鈉根的含量回收率結(jié)果見表4,加標(biāo)回收在94.51%~104.21%之間。
2.5精密度
對(duì)硫氰酸根濃度為1.15μg/mL的樣品進(jìn)行精密度的測(cè)定,9次測(cè)定結(jié)果見表7精密度為1.99%。
2.6檢出限
依據(jù)儀器設(shè)定的檢出限程序,連續(xù)測(cè)定空白溶液20次,選用3倍的空白樣品噪音的響應(yīng)值計(jì)算儀器的檢出限,計(jì)算出本方法的檢出限為0.02 μg/mL。
3 小結(jié)
本文優(yōu)化了緩沖液中丙酮、碳酸鈉和碳酸氫鈉的濃度配比,解決了當(dāng)有雜峰分離不清的問題,緩沖液成分為5%的丙酮和5.0 mmol/L的碳酸鈉時(shí),分離度和保留時(shí)間為最佳,分離度為5.36,保留時(shí)間為12.5 min左右,提高了檢測(cè)效率,回收率在94.51%~104.21%之間,RSD為1.95%,檢出限為0.02 μg/mL,其結(jié)果表明方法準(zhǔn)確可靠,適用于碳酸體系離子色譜檢測(cè)牛奶中的硫氰酸根。(編輯:何芳)
參考文獻(xiàn):
[1] GB/T 15550-1995 活化乳中乳過氧化物酶體系保存生鮮牛乳實(shí)施規(guī)范.
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