HPLC法同時(shí)測(cè)定抗癆膠囊中巖白菜素的含量

薛雅光　薛雅峰

摘要：目的：采用反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定抗癆膠囊中巖白菜素的含量。方法：采用AgiLentC18（4.6×250mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水（9：91），流速為0.8 mL·min-1，檢測(cè)波長275nm，柱溫為30℃。結(jié)果：巖白菜素進(jìn)樣量在0.1035～0.9315mg 范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好；平均回收率（n=6）分別為100.3% ，RSD分別為1.0%。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可為抗癆膠囊的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：抗癆膠囊 巖白菜素 高效液相色譜法

中圖分類號(hào)：R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2014）06-0025-03

Abstract：Objective： To develop an RP-HPLC method for the determination of bergenin in KangLao capsuLe. Methods ： The separation was performed on a Agilent C18 coLumn （4.6mm×250 mm，5μm） with a mobiLe phase of methylcyanide-water （9∶91） . The fLow rate was 0.8 mL·min-1， and the detecting wavelength was 275nm；coLumn temperature of 30℃.ResuLts ： The Linear ranges of bergenin was 0.1035 to 0.9315mg；the average recovery of was 100.3 % （RSD= 1. 0%）.ConcLusion ：The method is simpLe and accurate with good reproducibiLity . It can be used to controL the quaLity of KangLao capsuLe .

Key Words： KangLao capsule bergenin，HPLC

矮地茶為紫金?？浦参镒辖鹋rdisia japonica（Thunb.）BLume的干燥全草。全株含揮發(fā)油0.1%～0.2%，去油后的殘?jiān)蟹蛛x得巖白菜素、紫金牛酚、紫金牛素等。具有清熱解毒，止咳化痰。用于小兒哮喘，肺結(jié)核，肝炎。所含主要成分巖白菜素具有止咳，鎮(zhèn)痰祛痰[1]等藥理活性。有關(guān)巖白菜素含量的測(cè)定方法，2005年版《中國藥典》（一部）收載了矮地茶藥材中的含量測(cè)定方法[2]。經(jīng)過系統(tǒng)的研究，筆者建立了適用于抗癆膠囊測(cè)定矮地茶中的巖白菜素含量測(cè)定的反相高效液相法[3-5]，控制本制劑的內(nèi)在質(zhì)量，具有合理性，且方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試藥

巖白菜素對(duì)照品（由中國藥品生物制品檢驗(yàn)所提供）批號(hào)：111532-2000202，規(guī)格：供含量測(cè)定用。甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水。

1.1.2 主要儀器

日本島津LC-2010C高效相色譜儀。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：AgiLentC18（4.6×250 mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈-水（9：91），檢測(cè)波長：275 nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量10μL。

1.2.2 測(cè)定波長的選擇

取巖白菜素對(duì)照品的甲醇溶液，經(jīng)UV-2201紫外-可見分光光度計(jì)在200nm～350nm范圍內(nèi)掃描，巖白菜素在275nm波長處，有最大吸收（見圖1），參考中國藥典2005年版一部中矮地菜藥材含量測(cè)定項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定，選擇275nm為本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長。

1.2.3 對(duì)照品溶液制備

對(duì)照品溶液的制備 精密量取巖白菜素對(duì)照品適量，用甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。

1.2.4 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取細(xì)粉0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理（功率200W頻率40kHz）60min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，即得。

1.2.5 陰性樣品溶液的制備

按處方（不含矮地茶藥材）比例及生產(chǎn)工藝配制陰性，同1.2.4項(xiàng)下方法操作，制得陰性樣品溶液。

精密吸取巖白菜素對(duì)照品溶液，供試品溶液，陰性樣品10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對(duì)照色譜在與巖白菜素峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近無干擾峰，（見圖2）。

1.2.6 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液（0.1035 mg·mL-1）1、2、3、4、5、6、7、8、9μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，巖白菜素的回歸方程為Y=1755025.15X+9836.84，r=1.0000。結(jié)果表明：巖白菜素進(jìn)樣量在0.1035～0.9315mg，與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

1.2.7 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號(hào)：060407），重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果巖白菜素峰面積的RSD（n=6）分別為0.4%，表明精密度良好，理論板數(shù)不低于1500。

1.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號(hào)：060407），分別在0、4、16、28、46、96h測(cè)定，巖白菜素峰面積的 RSD（n=6）分別為1.5%。說明供試品溶液在96h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)（批號(hào)：060407）的樣品共6份，按前述制備供試品方法制備，依法測(cè)定。結(jié)果巖白菜素含量平均值（n=6）分別為2.542mg/粒，RSD為1.7%，表明該方法重復(fù)性良好。

1.2.10 回收率試驗(yàn)

精密稱取已測(cè)知含量（批號(hào)：060407，含量為2.542 mg/粒）的樣品約0.25g，置具塞錐形瓶中，每份精密加入巖白菜素對(duì)照品溶液（53.45μg·mL-1）25mL，再精密加入甲醇25mL，超聲處理（功率200W頻率40kHz）60min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，即得。共處理 6份，依正文方法獨(dú)立測(cè)定六次，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

如表1所示，測(cè)得巖白菜素的平均回收率為100.3%，RSD=1.0%。結(jié)果表明本法回收率較好，準(zhǔn)確度較高。

2 結(jié)果

測(cè)定 分別對(duì)不同批次的抗癆膠囊中巖白菜素的含量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長的選擇

對(duì)巖白菜素進(jìn)行光譜掃描，根據(jù)掃描結(jié)果，并參考2005年版中國藥典中矮地茶測(cè)定項(xiàng)下的檢測(cè)波長，故選擇275nm為測(cè)定波長。

3.2 供試品制備方法的選擇

分別采用樣品0.5g，精密加入甲醇50mL，分別超聲50、60、70min，制備供試品溶液依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，超聲60 min測(cè)定結(jié)果較高且時(shí)間較短，故選擇超聲60min提取樣品。

3.3 流動(dòng)相的選擇

曾經(jīng)試驗(yàn)流動(dòng)相為甲醇-水（20：80），此流動(dòng)相的分離效果沒有乙腈-水（9：91）流動(dòng)相分離效果好，故選擇乙腈-水（9：91）為流動(dòng)相。

參考文獻(xiàn)

[1] 王剛，麻兵繼.巖白菜素的研究概況[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，21（6）：59.

[2] 國家藥典委員會(huì).中國藥典[s].一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：251.

[3] 徐玲，馮海龍.薄層掃描測(cè)定垂陰茶顆粒中巖白菜素的含量[J].中藥材，2005，28（4）：343.

[4] 徐愚聰，劉仲義，王安穎.高效液相色譜法楓葉咳喘平口服液中巖白菜素的含量[J].華西藥學(xué)雜志，1994，9（1）：63-64.

[5] 陳彥，賈曉斌.清肺顆粒紫金牛提取工藝研究[J].中成藥，2002，24（7）：552.