化濁解毒方對黃褐斑模型小鼠c－myc基因表達的影響

劉艷蘇，王麗麗

（1．河北省晉州市人民醫(yī)院，河北 晉州 052260； 2．河北省中醫(yī)藥研究院，河北 石家莊 050031）

黃褐斑，又稱“肝斑”“蝴蝶斑”[1]，是常見的產(chǎn)生于面部的色素沉著性皮膚病，以女性患者居多。黃褐斑的成因比較復(fù)雜，常因服用避孕藥物、精神壓力大、內(nèi)分泌失調(diào)或外用化妝品刺激引起[2]，是臨床上常見而又難以治愈的皮膚病。雖然針對該病的研究較多，但病理機制仍不清楚。本試驗采用紫外線造模法制作黃褐斑病理模型，研究化濁解毒方對試驗動物角朊細(xì)胞中c－myc基因表達的影響，以探討化濁解毒方治療黃褐斑的機制。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

SS－3型紫外線光療儀；半自動生化分析儀；BX41型研究用熒光顯微鏡（奧林巴斯公司）。c－myc單克隆抗體；生物素標(biāo)記馬抗鼠 IgG、SP試劑盒（Zymed公司）?；瘽峤舛痉接傻?60 g，柴胡30 g，茯苓 30 g，白術(shù) 20 g，薏苡仁 60 g，僵蠶 24 g，金銀花 30 g，連翹30 g，夏枯草30 g組方，加水1 000 mL，煎煮 2次，煎取200 mL。SD雌性小鼠90只，動物合格證號為804089，體重(20±5)g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。

1．2 方法

將試驗動物隨機分為模型組(A組)、治療組(B組)和正常對照組(C組)，各30只。將3組試驗小鼠背部脫毛，裸露面積約2 cm×2 cm，每周脫毛1次。參照文獻[3]復(fù)制黃褐斑模型。A組、B組小鼠以波長為320 nm的中波紫外線照射，每日1次，每次20 min，連續(xù)照射4周。復(fù)制模型過程中常規(guī)飼養(yǎng)動物。A組、C組小鼠給予生理鹽水1 mL，每日1次；B組小鼠在模型復(fù)制成功后給予化濁解毒方煎劑，按照小鼠體重?fù)Q算，濃縮至 1 mL，每日1次。均灌胃給藥，連續(xù)治療4周。治療結(jié)束后，3組小鼠背部人工脫毛，面積為2 cm×2 cm。全部斷頭處死后，立即取下背部脫毛處全層皮膚，冷凍于－70℃冰箱內(nèi)保存待測。

1．3 c－myc基因表達測定

將標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋及連續(xù)切片，切片厚度為4 μm。切片經(jīng)二甲苯脫蠟、蒸餾水沖洗、磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗后，加入生物素標(biāo)記馬抗鼠IgG，37℃溫育，辣根過氧化物標(biāo)記的鏈霉素卵白素37℃溫育，蘇木精復(fù)染。常規(guī)脫水，透明，封片，鏡下觀察。分別檢測A組、C組、B組治療后c－myc基因的表達。c－myc基因的判定以胞核內(nèi)出現(xiàn)黃色顆粒狀物質(zhì)為陽性，按著色強弱計分為4級：陰性（－）為核內(nèi)無陽性顆粒；弱陽性(＋)為核內(nèi)散在陽性顆粒，陽性細(xì)胞數(shù)在25%以下；陽性(＋＋)為核內(nèi)深黃色顆粒細(xì)胞數(shù)在25% ～50%之間；強陽性(＋＋＋)為核內(nèi)棕黃色顆粒細(xì)胞數(shù)在50%以上。

1．4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用 SPSS 11．0統(tǒng)計軟件，組間比較采用 χ2檢驗。P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1。

表1 3組c－myc基因表達情況比較(n＝30)

3 討論

黃褐斑是由于面部的組織細(xì)胞間微循環(huán)淤阻、細(xì)胞溶解死亡、黑素增多、色素沉著形成所造成的[4]。黑素細(xì)胞產(chǎn)生的黑素沉著狀況是決定皮膚顏色的主要因素[5]，角朊細(xì)胞不僅被動地接受由黑素細(xì)胞樹突運送來的黑素，而且對黑素細(xì)胞的生長和黑素的生成等有調(diào)節(jié)作用。Haake等[6]證明了胎兒角朊細(xì)胞和黑素細(xì)胞之間的關(guān)系處于變化中，角朊細(xì)胞誘導(dǎo)和促進黑素細(xì)胞增殖、遷移和分化。

c－myc基因是調(diào)控細(xì)胞增殖的主要基因，c－myc原癌基因產(chǎn)物是一種DNA結(jié)合蛋白，分布于核內(nèi)，可促進細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，對于細(xì)胞從G1期進入S期極為重要[7－9]。

本研究結(jié)果顯示，黃褐斑模型小鼠c－myc基因表達水平與正常對照組相比明顯升高（P＜0．05)；經(jīng)過化濁解毒方治療后，c－myc基因的表達降低（P＜0．05)。因此，化濁解毒方可能是通過降低黃褐斑皮損角朊細(xì)胞中c－myc基因的表達而產(chǎn)生治療效果的。

參考文獻：

[1]陳華英．中醫(yī)治療面部黃褐斑療效觀察[J]．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，15(4)：453．

[2]吳景東，顧 煒，尹 瑩，等．中醫(yī)辨證治療黃褐斑臨床體會[J]．中國美容醫(yī)學(xué)，2008，17(5)：741 － 742．

[3]苑光軍，姜 醒，劉 斌，等．當(dāng)歸芍藥散對黃褐斑模型SOD、MDA及病理形態(tài)學(xué)影響的研究[J]．中醫(yī)藥信息，2008，25（6）:81 －82．

[4]謝圣影，陳麗芳．自擬祛斑湯結(jié)合中藥面膜治療黃褐斑35例臨床觀察[J]．中國臨床醫(yī)藥雜志，2008，20（2）：160 －161．

[5]汪 涌，何清濂，林子豪．黑素細(xì)胞與影響皮膚色素沉著的因素[J]．實用美容整形外科雜志，1997，8（3）:152 －154．

[6]Haake A，Scott GA．Physiologic distribution and differention of melanocytes in human fetal and neonatal skin equivalentes[J]．J Invest Dermatol，1991，96：71．

[7]李新華．銀屑病患者T淋巴細(xì)胞對表皮c－myc、bcl－2及 p53蛋白表達影響的實驗研究[D]．太原：山西醫(yī)科大學(xué)，2002．

[8]馮 捷，徐漢卿，蘇寶山．復(fù)方青黛膠囊對銀屑病表皮角朊細(xì)胞中c－myc表達的影響[J]．中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996：16（3）：146 －148．

[9]Gordon FP，Mansur CP，Glichest BA．Regulation of human melanocyte growth，dendricity and melanization by keraticytederived factors[J]．J Invest Dermatol，1989，92（5）：565 － 572．