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    GC-MS分析驢皮、 牛皮、 馬皮的脂肪成分

    2014-04-12 02:51:11胡晶紅張永清
    中成藥 2014年12期
    關(guān)鍵詞:驢皮烯酸牛皮

    胡晶紅, 李 佳, 張永清

    (山東中醫(yī)藥大學(xué), 山東 濟(jì)南 250355)

    GC-MS分析驢皮、 牛皮、 馬皮的脂肪成分

    胡晶紅, 李 佳, 張永清*

    (山東中醫(yī)藥大學(xué), 山東 濟(jì)南 250355)

    目的 比較驢皮、牛皮、馬皮脂肪酸成分差異,為驢皮、牛皮、馬皮的鑒別和驢皮的質(zhì)量控制提供參考。方法采用石油醚回流提取脂肪酸, 氫氧化鉀-甲醇酯化法將提取的脂肪酸甲酯化, GC-MS 分析脂肪酸成分。 結(jié)果 3 種樣品中均含有飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、芳香羧酸、其他成分等,但是各類組分的具體成分和含有量存在差異。結(jié)論驢皮中主要以飽和脂肪酸為主, 主要由棕櫚酸、 (E) -9-十八碳烯酸、 硬脂酸和 8-十八碳烯酸構(gòu)成; 馬皮和牛皮主要是由飽和及不飽和脂肪酸構(gòu)成, 最大量不飽和脂肪酸均為 (E) -9-十八碳烯酸, 其余的大量成分馬皮主要含 ( Z) -9-十六碳烯酸、 硬脂酸和十六酸, 而牛皮中主要含 9-十六碳烯酸、 對苯二甲酸和棕櫚酸, 可作為區(qū)分驢皮與馬皮和牛皮的參考依據(jù)。

    驢皮; 脂肪酸;GC-MS

    阿膠屬于傳統(tǒng)中藥, 為馬科動物驢 Equus asinus的皮經(jīng)煎煮、 濃縮制成的固體膠[1], 其味甘, 性平, 歸肺、 肝、腎經(jīng),具有補(bǔ)血滋陰、潤燥、止血等功效,為滋補(bǔ)上品,在 《神農(nóng)本草經(jīng)》、 《本草綱目》 等歷代醫(yī)籍中均有記載?,F(xiàn)代藥理研究表明,阿膠因具有升高紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血紅蛋白的 作用而促進(jìn)造血功能[2-6]; 另 外 具 有 止 血、 抗疲勞、抗休克、滋陰補(bǔ)腎、強(qiáng)筋健骨、利尿消腫及抗腫瘤和增強(qiáng)免疫力等功效[7-11]。

    驢皮是加工生產(chǎn)阿膠的基本原料,驢皮的產(chǎn)量與質(zhì)量直接決定著阿膠的產(chǎn)量與質(zhì)量,而在阿膠企業(yè)的生產(chǎn)過程中,存在的普遍問題是驢皮沒有詳細(xì)、完整的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),因此本課題組致力于驢皮質(zhì)量控制的系列研究,為保證中藥阿膠的質(zhì)量提供原料的保障。在驢皮的質(zhì)量控制中一個重要的問題是如何區(qū)分混偽品,如馬皮、牛皮,甚至是一些混雜皮張。脂肪酸是動物組織的基本組成部分,本實驗主要對驢皮、馬皮及牛皮中的脂肪酸類進(jìn)行分析比較,既可為驢皮、馬皮及牛皮的鑒別提供參考,也可作為評價驢皮藥材質(zhì)量的重要指標(biāo),從而保證阿膠原料的來源純正。目前還未見有關(guān)驢皮脂肪酸鑒別的相關(guān)報道。

    1 材料和儀器

    1.1 實驗材料 驢、 馬、 牛皮由山東東阿阿膠有限公司提供,經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)張永清教授鑒定,確認(rèn)為馬科動物驢 Equusasinus、 馬 Equus caballus和 牛 科 動 物 牛 Bos taurus的干燥皮。其中驢皮來自德州無棣烏驢養(yǎng)殖基地,系德州烏驢品種。

    1.2 主要儀器 Agilent 7890A/5973N GC-MS 聯(lián)用儀 ( 美國 Agilent公 司) ; 色譜柱 Agilent 19091N-213 HP-INNOWax Polyethylene Glyco, 30 m×320 μm×0.5 μm ( 美 國 Agilent公司);SF-130 型高 速中藥 粉碎機(jī) ( 中 南制藥機(jī)械 廠); DGG-9000 恒溫干 燥 箱 ( 合肥 賽 帆 試驗設(shè)備有限公司); NH-4 數(shù)顯 4 孔恒溫水浴 ( 成都貝斯達(dá)公司);FA-1004 電子天平 (上海精科公司)。

    1.3 主要試劑 石油醚, 氫氧化鉀, 甲醇, 苯等有機(jī)溶劑均為國產(chǎn)分析純。

    2 實驗方法

    2.1 樣品處理 為保證試驗的可對照性, 分別取驢、 馬、牛皮的皮張背部正中相同部位 20 cm×20 cm大小, 剪除并刮凈表面的毛發(fā),用去離子水將表皮的污垢清洗干凈,于40℃恒溫干燥箱中烘干至恒定質(zhì)量。 剪碎皮張, 用粉碎機(jī)高速粉碎 5 min, 過 100 目篩。

    2.2 脂肪酸提取 精密稱取 “2.1” 項的皮張細(xì)粉 1 g左右, 石油醚 (60 ~90 ℃) 30 mL 60 ℃回流提取 2 h, 提取液揮干溶劑,備用。驢皮、牛皮和馬皮的脂肪的提取率分別為 11.23%、 12.15%和 11.56%。

    2.3 脂肪酸甲酯化 參照文獻(xiàn)中報道的脂肪酸甲酯化的方法[12], 采用氫氧化鉀-甲醇室溫酯化法。

    稱取 “2.2” 項中提取的脂肪 50 mg, 置于 10 mL量瓶內(nèi), 加入2 mL石油醚和苯的混合溶劑 (1 ∶1), 輕輕搖動使之溶解。 再加入 2 mL 0.4 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液, 混勻。 在室溫靜置 30 min, 加蒸餾水使全部有機(jī)相甲酯溶液升至瓶頸上部。澄清后吸取上清液,所得上清液用于氣相色譜分析。

    2.4 GC-MS 分析

    2.4.1 色譜條件 進(jìn)樣口溫度, 程序升溫, 100 ℃保持 3 min, 10 ℃ /m in 升到 240 ℃, 保持 20 min; 載氣 He氣體積流量 1.0 mL/min; 手動進(jìn)樣;10 μL注射器進(jìn)樣量 0.2 μL,分流比 5 ∶1, 分流體積流量 10 mL/min。

    2.4.2 質(zhì)譜條件 電子轟擊 (EI) 離子源; 電子能量70 eV; 傳輸線溫度 230 ℃; 離子源溫度 170 ℃; 離子阱溫度 150 ℃, 質(zhì)量掃描范圍 m/z30 ~800。

    2.5 數(shù)據(jù)處理 對總離子流圖中各峰經(jīng)過質(zhì)譜掃描后, 通過質(zhì)譜數(shù)據(jù)系統(tǒng) ( NIST和 Willey標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)庫) 進(jìn)行檢索,并結(jié)合人工解析,鑒定出驢皮、馬皮和牛皮脂肪成分,采用積分面積歸一化的方法確定各組分的相對百分含有量,匹配度在 70 (滿分是 100) 以上的組分才予以報道。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 脂肪酸種類及其含有量 提取驢皮、 牛皮和馬皮脂肪成分, 經(jīng)過 GC-MS 分析, 獲得各種脂肪酸種類及其含有量, GC-MS 離子流圖分別見圖 1 ~3, 含有量結(jié)果見表1~3。

    圖 1 德州無棣烏驢基地烏驢皮樣品脂肪的 GC-M S離子流圖

    圖 2 牛皮樣品脂肪的 GC-MS離子流圖

    圖 3 馬皮樣品脂肪的 GC-MS離子流圖

    表 1 ~3 結(jié)果顯示, 從驢、 牛、 馬皮中各獲得 27、 36和 37 種成分, 驢皮中共獲得 23 種脂肪酸類成分, 占全部檢出組分的 85.19%, 其中飽和脂肪酸 17 種, 不飽和脂肪酸2種, 芳香羧酸4種; 在牛皮中共獲得22種脂肪酸, 占全部檢出組分的 63.89%, 其中飽和脂肪酸 12 種, 不飽和脂肪酸6 種, 5 種芳香羧酸; 從馬皮中共獲得29種脂肪酸,占全部檢出組分的 78.38%, 其中飽和脂肪酸 18 種, 不飽和脂肪酸7種,4種芳香羧酸。另外驢、牛、馬皮張中還分別含有 4、 13、 8 種其它成分, 分別占檢出組分總數(shù)的14.81%、 36.11%和 21.62%, 這些組分主要是烷烴、 烯烴、酚、醛、酮及一些芳香類化合物。

    表 1 驢皮脂肪 GC-MS成分分析

    表 2 牛皮脂肪 GC-MS成分分析

    續(xù)表2

    表 3 馬皮脂肪 GC-MS成分分析

    續(xù)表3

    3.2 不同動物皮脂肪酸類成分的類別分布 驢、 牛、 馬皮中的成分在總脂肪酸中的種類百分?jǐn)?shù)及含有量質(zhì)量分?jǐn)?shù)見表4。

    表4 驢、 馬、 牛皮中的各類脂肪成分?jǐn)?shù)目和含有量

    3.3 不同動物皮脂肪中的主要成分與特有成分分析 驢、馬、 牛皮脂肪中占所有檢出組分百分含有量超過2%的成分按照含有量高低順序排列如下:①驢皮,棕櫚酸25.00%;8-十八碳烯酸 16.65%; 硬脂酸 12.64%; (E) -9-十八碳烯酸 7.64%; (Z) -9-十六碳烯酸 6.48%; 二十四酸 4.53%;18-十九碳烯酸 3.11%; 二十二酸 2.99%; 十四 酸 2.39%;9-cis-11-trans-十 八 酸 2.04%。 ② 馬 皮,(E) -9-十八碳烯酸 38.89%; 十六烷酸 22.09%; 硬脂酸9.34%; ( Z) -9-十 六 碳 烯 酸 7.61%; 十四酸 6.05%。③牛皮, ( E) -9-十八碳烯酸 28.88%; 棕櫚酸 23.85%;對苯 二 甲 酸 11.34%;9-十 六 碳 烯 酸 8.16%; 硬 脂 酸3.96%; 十四酸 3.62%。 驢皮脂肪主要以飽和脂肪酸為主,主要由棕櫚酸、 (E) -9-十八酸、 硬脂酸和 8-十八酸構(gòu)成;馬皮和牛皮最大量不飽和脂肪酸均為 (E) -9-十八碳烯酸,其余大量成分馬皮主要含 (Z) -9-十六碳烯酸、 硬脂酸和十六烷酸, 而牛皮主要含 9-十六碳烯酸、 對苯二甲酸和棕櫚酸,依此可將驢皮與馬皮、牛皮區(qū)分開。

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    R284.1

    :B

    1001-1528(2014)12-2648-05

    10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.050

    2013-12-23

    山東省科技發(fā)展計劃項目 (2008GG2NS02022)

    胡晶紅 (1974—), 女, 講師, 博士, 從事中藥資源及其質(zhì)量控制研究。 E-mail:hujinghong97@126.com

    *通信作者: 張永清 (1962 —) , 男, 教授, 博士生導(dǎo)師, 從事中藥資源及其質(zhì)量控制研究。 E-mail:zyq622003@126.com

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