PI3K、p-AKT和P27在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義

姜艷艷 張連民

1.東莞市厚街醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東東莞 523960；2.東莞市沙田醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東東莞 523000

PI3K、p-AKT和P27在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義

姜艷艷1張連民2

1.東莞市厚街醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東東莞 523960；2.東莞市沙田醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東東莞 523000

目的研究子宮內(nèi)膜癌中PI3K、p-AKT、P27的表達(dá)規(guī)律,探討三者與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。 方法應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥、子宮內(nèi)膜癌中PI3K、p-AKT、P27的表達(dá)，分析它們與各項(xiàng)臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系及三者之間的關(guān)系。 結(jié)果PI3K、p-AKT、P27的表達(dá)在3組間比較均有顯著差異（P＜0.05），PI3K、p-AKT的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期和組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P＜0.05），P27的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P＜0.05）。P27與PI3K、P27與p-AKT均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論P(yáng)I3K、p-AKT、P27的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，三者的表達(dá)異常參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。

子宮內(nèi)膜癌；PI3K；p-AKT；P27；免疫組化

子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma)，是指原發(fā)于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，是一種常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，其發(fā)生率約占女性總癌瘤的7%，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%。其確切病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚。研究表明PI3K/AKT信號(hào)通路異常與許多惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。該研究2009—2013年間通過(guò)測(cè)定子宮內(nèi)膜癌中PI3K、p-AKT、P27的表達(dá)規(guī)律、臨床意義及三者之間的關(guān)系,探討三者與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本取自東莞市厚街醫(yī)院婦產(chǎn)科和病理科2009—2013年手術(shù)切除的子宮內(nèi)膜樣腺癌標(biāo)本55例（術(shù)前均未接受化療及激素治療，且不合并其他惡性腫瘤），按FIGO進(jìn)行臨床分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期19例，Ⅲ期14例；組織學(xué)分級(jí)：G1級(jí)29例，G2級(jí)14例，G3級(jí)12例；無(wú)肌層浸潤(rùn)20例，淺肌層浸潤(rùn)(＜1/2)16例，深肌層浸潤(rùn)(＞1/2)19例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例：患者年齡38～70歲，平均54.3歲。選取同期因功能失調(diào)性子宮出血行子宮切除術(shù)或診刮術(shù)病人的異常子宮內(nèi)膜30例：標(biāo)本用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，有完整的臨床和病理資料。選取同期因?qū)m頸CIN行子宮全切術(shù)的20例患者的正常子宮內(nèi)膜組織作為正常對(duì)照。

1.2 試劑

兔抗人PI3K、p-AKT、P27單克隆抗體，免疫組化SP試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 結(jié)果判定

以細(xì)胞漿或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)明確的棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。采用乳腺癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：隨機(jī)觀察 5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù) 100個(gè)細(xì)胞，先根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占的百分?jǐn)?shù)計(jì)分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；再根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分：無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;然后根據(jù)兩者相加所得的總分進(jìn)行結(jié)果判定：0～l分為陰性(-)，2～3分為弱陽(yáng)性(+)，4～5分為中度陽(yáng)性(++)，6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。該研究在此劃分類型的基礎(chǔ)上將結(jié)果合并為陰性(0～1分)，陽(yáng)性(2～7分)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用等級(jí)資料的秩和檢驗(yàn)對(duì)相關(guān)組間進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)；采用Spearman相關(guān)分析法對(duì)PI3K、p-AKT和P27蛋白表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 PI3K、p-AKT、P27在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

表1 PI3K、p-AKT、P27蛋白在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

2.2 PI3K、p-AKT和P27在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PI3K、p-AKT的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期和組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肌層浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。P27的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與臨床分期、患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肌層浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 PI3K、p-AKT和P27在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

55例子宮內(nèi)膜癌病例中，PTEN、p-AKT表達(dá)同為陽(yáng)性者8例，同為陰性者3例，Spearman相關(guān)分析表明二者呈顯著負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=-0.480,P＜0.01）。P27、p-AKT表達(dá)同為陽(yáng)性者6例，同為陰性者4例，Spearman相關(guān)分析表明二者呈顯著負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=-0.403,P＜0.01）。

3 討論

PI3K／Akt與子宮內(nèi)膜癌PI3K／Akt通路廣泛存在細(xì)胞中，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化調(diào)節(jié)等各方面。磷脂酰肌醇-3羥基激酶（PI3K）是一個(gè)酯酶，當(dāng)細(xì)胞受生長(zhǎng)因子等刺激因子刺激后，細(xì)胞內(nèi)PI3K可被G蛋白偶聯(lián)受體、蛋白酪氨酸激酶受體或Ras蛋白激活，激活后的 PI3K對(duì)磷脂酰肌醇環(huán)上的3位羥基進(jìn)行磷酸化從而產(chǎn)生磷酸化的磷脂酰肌醇.AKT是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶又稱蛋白激酶B，對(duì)細(xì)胞存活有重要作用。AKT轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜以及AKT活化所需的308位蘇氨酸 (Thr308)和473位絲氨酸(Ser473)磷酸化是AKT活化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，都是依賴于 PI3K完成的[1-2]。PI3K突變促使惡性腫瘤的發(fā)生[3]，磷酸化的AKT通過(guò)作用于多種下游分子，影響細(xì)胞周期進(jìn)展，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，從而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生與發(fā)展。該研究結(jié)果顯示PI3K、p-AKT在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高表達(dá)，明顯高于正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜增生癥，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。因此推測(cè)PI3K過(guò)度激活，AKT磷酸化增加，活性增強(qiáng)可能促使子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，此外該研究顯示PI3K、p-AKT的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期和組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，但與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肌層浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)，表明PI3K、p-AKT的表達(dá)異常與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展有關(guān)。

P27與子宮內(nèi)膜癌 P27是一種非特異的CDKIs，調(diào)節(jié)細(xì)胞由Gl-S期轉(zhuǎn)變，主要抑制cyclinE-CDK2和cyclinA-CDK2復(fù)合物。P27在G0和G1期表達(dá)并在細(xì)胞開(kāi)始進(jìn)入S期時(shí)降低，其在組織和腫瘤的非增殖部分呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，因此P27蛋白的穩(wěn)定對(duì)于維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)和穩(wěn)定性方面非常重要。P27蛋白的低表達(dá)在人類多種腫瘤中均有發(fā)現(xiàn)，包括乳腺癌、卵巢癌、胃癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌和宮頸癌，在許多惡性腫瘤中其降解增強(qiáng)提示腫瘤的預(yù)后不良[4]，P27基因缺陷小鼠表現(xiàn)軀體龐大、多個(gè)器官增生、垂體腫瘤發(fā)生率增高[5]。P27降解減少伴隨著子宮內(nèi)膜細(xì)胞增生減少[6]，表明其在人類惡性腫瘤發(fā)病機(jī)制中的重要性。該研究結(jié)果顯示 P27在正常子宮內(nèi)膜 （85.00%）、子宮內(nèi)膜增生癥（58.82%）、子宮內(nèi)膜癌（21.43%）中的陽(yáng)性表達(dá)率呈逐漸下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。P27的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P=0.02），與臨床分期、患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肌層浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)，證實(shí)了P27蛋白缺失在子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機(jī)制中的重要性。但有研究表明P27表達(dá)與肺癌的分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與該研究結(jié)果不同，可能是不同腫瘤之間的差異造成的[7]。

PKB是PI3K下游的重要靶點(diǎn)，它通過(guò)磷酸化細(xì)胞周期相關(guān)蛋白如P27、cyclin D、凋亡前蛋白等介導(dǎo)細(xì)胞事件。PI3K抑制者LY294002阻止細(xì)胞增殖，導(dǎo)致G1期細(xì)胞積累，P27表達(dá)增加，提示P27是PI3K/AKT通路的下游效應(yīng)點(diǎn)[8]。該實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌中P27蛋白表達(dá)明顯下降，而PI3K、p-AKT表達(dá)明顯增加，P27與PI3K、p-AKT蛋白表達(dá)存在明顯的負(fù)相關(guān)，提示PI3K激活導(dǎo)致p-AKT活化增加，活化的AKT可能通過(guò)下調(diào) P27的表達(dá)，使子宮內(nèi)膜細(xì)胞逃離凋亡，不斷增生，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，三者的共同作用促使了子宮內(nèi)膜的發(fā)生發(fā)展。已有研究表明PI3K抑制劑 LY294002、硫利達(dá)嗪通過(guò)PI3K/AKT通路抑制腫瘤的生長(zhǎng)，為惡性腫瘤的治療提供了新的思路[9]。

綜上，PI3K/PK通路在子宮內(nèi)膜癌中的研究剛剛起步,有關(guān)該通路及其上游刺激因子、下游信號(hào)因子與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系將成為未來(lái)研究的熱點(diǎn)，為子宮內(nèi)膜癌病因?qū)W研究及尋找新的治療靶點(diǎn)提供新思路。

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Expression and Significance of PI3K,p-AKT and P27 in Endometrial Carcinoma

JIANG Yanyan1ZHANG Lianmin2
1.Department of Obstetrics and Gynecology,Dongguan Houjie Hospital,Dongguan,Guangdong Province,523960,China; 2.Department of Obstetrics and Gynecology,Shatian Hospital of Dongguan City,Guangdong Province,523000,China

Objective To study the expression pattern of PI3K,p-AKT and P27 in endometrial carcinoma,and investigate the correlation of which with the occurrence and development of endometrial carcinoma.Methods Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of PI3K,p-AKT,P27 in the normal endometria,endometrial hyperplasia and endometrial carcinoma. And the relationship between the three,the correlation of them with the clinical pathological parameters were analyzed.Results There was a significant difference in the expression of PI3K,p-AKT and P27 between the three groups(P＜0.05).The expression of PI3K and p-AKT was related to the clinical stage and histological grade of endometrial carcinoma(P＜0.05).The expression of P27 was associated with the histological grade of endometrial carcinoma (P＜0.05).The expression of P27 was negatively correlated to the PI3K and p-AKT expression (P＜0.01).Conclusion The expressions of PI3K,p-AKT and P27 are correlated with the occurrence and development of endometrial carcinoma.Their abnormal expressions involve the occurrence of endometrial carcinoma.

Endometrial carcinoma;PI3K;p-AKT;P27;Immunohistochemistry

R4

A

1674-0742（2014）10（a）－0057-02

2014-06-20）

姜艷艷（1979.11-），女，廣東東莞人，碩士研究生，主治醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤。

張連民（1974.5-），男，廣東東莞人，碩士研究生，副主任醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤。