酶解法制備豬肩胛骨降血壓肽

陳昌琳，李 誠(chéng)，付 剛，張殊瑩，黃山珊，肖 嵐

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川雅安625014）

酶解法制備豬肩胛骨降血壓肽

陳昌琳，李 誠(chéng)*，付 剛，張殊瑩，黃山珊，肖 嵐

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川雅安625014）

以豬肩胛骨為原料，用蛋白酶將其水解用以制備降血壓肽。以酶解液的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）抑制率為主要指標(biāo)，篩選出風(fēng)味蛋白酶為最適的蛋白酶進(jìn)行酶解優(yōu)化實(shí)驗(yàn)?？疾烀附鈺r(shí)間、酶解溫度、pH、酶底比、底物濃度5個(gè)因素對(duì)酶解液的水解度和ACE抑制率的影響，并在此基礎(chǔ)上通過響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定最佳酶解條件為：酶底比6900U/g、酶解溫度53℃、酶解時(shí)間4.5h，此條件下進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)制備出ACE抑制率為65.31%的豬肩胛骨降血壓肽，ACE抑制率理論值為66.93%。

豬肩胛骨，酶解，降血壓肽，響應(yīng)面法

我國(guó)是畜禽骨資源大國(guó)，但由于技術(shù)水平的限制，畜禽骨的利用還處于落后的階段，存在被大量浪費(fèi)或僅被加工成附加值低的產(chǎn)品問題。因此，運(yùn)用酶解回收利用骨蛋白極具研究?jī)r(jià)值[1]。目前已有利用骨蛋白制備呈味肽及功能性肽的報(bào)道[2]。

高血壓是一種常見的慢性心血管疾病，常伴有器官及結(jié)構(gòu)的不良變化；易引起冠狀動(dòng)脈心臟病、外周動(dòng)脈疾病和中風(fēng)并且能夠引發(fā)各種并發(fā)癥。因此，高血壓具有一定的危險(xiǎn)性。降血壓藥物是通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性，而減少有升血壓作用的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶II的生成，同時(shí)降低對(duì)有降血壓作用的緩激肽被破壞而起到降血壓作用，如卡托普利、依那普利都是ACE抑制劑。然而，這些合成藥物具有不利的副作用，如咳嗽、味覺障礙、頭暈、頭痛、皮疹、血管神經(jīng)性水腫等[3-4]。而食源性的降血壓肽具有專一、持久、安全性高、降血壓效果溫和且對(duì)正常血壓無影響、無副作用的特點(diǎn)[5]，因而成為研究熱點(diǎn)。目前，已經(jīng)有研究者利用牛骨、鴨骨、羊骨、豬骨、雞骨等畜禽骨為原料制備了降血壓肽[6-10]，還有研究者以乳酸菌發(fā)酵豬骨骼肌制備了降血壓肽[11]。其中陳碩[12]、李娜等[13]的研究證明以豬股骨頭膠原蛋白為原料制備的降血壓肽在原發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)具有降血壓作用。而利用豬肩胛骨制備降血壓肽的研究還未見報(bào)道。豬肩胛骨的利用率更低、來源更廣泛、價(jià)格更低廉，且附著肉少，前處理更容易，是制備降血壓肽的理想原料。

本實(shí)驗(yàn)直接采用骨粉為酶解底物，避免了復(fù)雜的提取膠原蛋白的過程。通過比較6種酶對(duì)酶解液ACE抑制率及水解度的影響，篩選出最適蛋白酶，再通過單因素和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化出制備豬肩胛骨降血壓肽的最佳酶解條件，為豬肩胛骨降血壓肽的理論研究和進(jìn)一步的產(chǎn)品開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮豬肩胛骨 購(gòu)自雅安農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，剔凈非骨骼成分，清洗，高壓蒸煮4h，烘干，粉碎制成骨粉，制得的骨粉蛋白含量為19.96%，冷藏備用；酸性蛋白酶（酶活力為32.69U/mg）、中性蛋白酶（酶活力為34.00U/mg）、堿性蛋白酶（酶活力為114.17U/mg）、胃蛋白酶（酶活力為3050.25U/g）、胰蛋白酶（酶活力為262.13U/mg）、風(fēng)味蛋白酶（酶活力為23.43U/mg） 上海Kayon公司；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）、馬尿酰組氨酰亮氨酸（Hip-His-Leu，HHL） Sigma公司；其他化學(xué)試劑 為國(guó)產(chǎn)分析純。

酸度計(jì) 方舟科技；UV-3200紫外分光光度計(jì)MAPADA 冷凍干燥機(jī)、高速冷凍離心機(jī)、移液槍Thermo；QT-2漩渦混合器 上海琪特分析儀器有限公司；超純水裝置 優(yōu)普公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 豬肩胛骨蛋白的酶解工藝 稱取一定量的豬肩胛骨粉，按一定比例加入蒸餾水，混勻，調(diào)pH后加入一定量的酶，在指定溫度下酶解指定時(shí)間。酶解完成后，沸水浴滅酶10m in，4℃10000r/m in離心10m in，得到上清液，測(cè)定其ACE抑制率及水解度。

1.2.2 蛋白酶的篩選 以酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶為篩選對(duì)象，選擇底物濃度為5%、酶底比6000U/g，酶解溫度和pH在最適條件（見表1）下進(jìn)行酶解反應(yīng)，酶解5h后，測(cè)定上清液水解度及ACE抑制率，篩選出水解度及ACE抑制率最高的酶。

表1 各種蛋白酶酶解條件Table 1 Kinds of proteases enzyme conditions

1.2.3 豬肩胛骨降血壓肽制備工藝優(yōu)化單因素實(shí)驗(yàn)

將自制豬肩胛骨粉樣品按照比例1%、2%、3%、4%、5%、6%加入一定量蒸餾水，分別在酶底比1000、3000、5000、7000、9000、11000U/g，酶解溫度為50、55、60、65、70、75℃，pH 5.5、6、6.5、7、7.5，酶解時(shí)間1、2、3、4、5、6h的不同條件下進(jìn)行酶解，以ACE抑制率為主要指標(biāo)，篩選出最適的條件。

1.2.4 豬肩胛骨酶解制備降血壓肽的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn) 在酶解單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以酶底比、酶解溫度、酶解時(shí)間為影響因素，以ACE抑制率作為指標(biāo)，進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，采用Box-Behnken進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果分析，得出制備降血壓肽的最佳工藝條件。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表2。

表2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素水平表Table 2 Factors and levels of RSM experiment

1.2.5 ACE抑制率的測(cè)定 在Cushman等[14]所用的方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)。方法如下：將酶解液稀釋5倍，將ACE酶配制成0.1U/m L溶液，將HHL溶解在0.1mol/L、pH8.3的硼酸緩沖液（含有0.3mol/L NaCl）中配制成5mmol/L的HHL溶液，在10m L試管中加入100μL 5.0mmol/L的HHL溶液和20μL樣品液，混勻后于37℃水浴中保溫5m in后，加入20μL的ACE酶液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)，混勻后于37℃水浴中保溫60min，從水浴鍋中取出，加入150μL 1mol/L的HCl終止反應(yīng)，再加入1.2m L冷凍后的乙酸乙酯，強(qiáng)烈振蕩混勻后，靜置5m in，然后以4000r/m in離心20m in，用移液管吸取1.0m L的乙酸乙酯層（上層），在110℃烘箱中經(jīng)1h烘干，最后加入4m L的蒸餾水充分溶解后于228nm處檢測(cè)吸光值。平行對(duì)照管除在反應(yīng)前先加入150μL 1mol/L的HCl以終止反應(yīng)外，其余成分、操作步驟同反應(yīng)管。

ACE抑制率（%）=（Ab-Aa）/（Ab-Ac）×100

式中，Aa是樣a的吸光度，樣a加入了樣品液，與ACE、HHL共同反應(yīng)的測(cè)定值；Ab是樣b的吸光度，樣b為反應(yīng)中未加入樣品液，反應(yīng)結(jié)束后添加樣品液以維持整個(gè)反應(yīng)體系平衡，是ACE與HHL完全反應(yīng)的參照的測(cè)定值；Ac是樣c的吸光度，樣c在反應(yīng)前先使ACE失活，再加入樣品液，是ACE與HHL反應(yīng)的空白對(duì)照的測(cè)定值。

1.2.6 蛋白含量測(cè)定 考馬斯亮藍(lán)法[15]。

1.2.7 游離氨態(tài)氮含量的測(cè)定 采用中性甲醛滴定法[16]。分別吸取待測(cè)水解液10m L于250m L燒杯中，加蒸餾水60m L，用磁力攪拌器邊攪邊滴加0.05mol/L NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液至pH為8.20，立即加入甲醛10m L，再用磁力攪拌器邊攪邊滴加0.05mol/L NaOH至pH為9.20，記錄加入甲醛后消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（m L）。重復(fù)實(shí)驗(yàn)兩次，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。計(jì)算公式如下：

1.2.8 水解度的測(cè)定 計(jì)算公式如下：

式中，N2為酶解后游離氨基氮含量；N1為酶解前游離氨基氮含量；N0為總氮含量[17]。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶篩選實(shí)驗(yàn)

不同蛋白酶酶解液的水解度和ACE抑制率結(jié)果見圖1。

由圖1可見，堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶的酶解液ACE抑制率最高，分別為62.95%和63.42%，但是風(fēng)味蛋白酶酶解液的水解度為17.50%，較堿性蛋白酶酶解液水解度9.61%高。這可能是因?yàn)轱L(fēng)味酶是外肽酶和內(nèi)切酶的混合真菌源性酶，可以快速水解產(chǎn)生分子量較小的肽，堿性蛋白酶是特異性內(nèi)切酶，水解速率較風(fēng)味酶慢，可產(chǎn)生分子量中等的肽[18]。因此選用風(fēng)味蛋白酶作為酶解條件優(yōu)化的酶制劑。

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 酶解溫度對(duì)酶解液的水解度及ACE抑制率的影響 在酶底比3000U/g，底物濃度3%，酶解pH6.5的條件下酶解5h，考察酶解溫度對(duì)酶解液水解度及ACE抑制率的影響。結(jié)果如圖2所示，溫度從50℃開始上升，在55℃時(shí)，水解度和ACE抑制率均有最高值，水解度最大值是16.17%，ACE抑制率最大值為60.14%。隨著溫度的升高，水解度和ACE抑制率均減小，說明溫度對(duì)水解度及ACE抑制率影響較大。

圖1 不同蛋白酶對(duì)水解物的水解度及ACE抑制率的影響Fig.1 The effectof different protease on degree of hydrolysis and ACE inhibitory rate

圖2 酶解溫度對(duì)水解度及ACE抑制率的影響Fig.2 The effectof temperature on degree of hydrolysis and ACE inhibitory rate

2.2.2 酶解pH對(duì)酶解液的水解度及ACE抑制率的影響 在酶底比3000U/g，底物濃度3%，酶解溫度55℃的條件下酶解5h，考察酶解pH對(duì)酶解液水解度及ACE抑制率的影響。如圖3所示，pH由5.5變化到7.5，酶解液水解度變化不大，基本維持在11%左右，說明風(fēng)味蛋白酶最適pH范圍較廣，且pH對(duì)水解物水解度影響較小。ACE抑制率隨酶解液pH改變變化也不大，在酶解pH為7時(shí)，ACE抑制率有最大值55.02%。綜合考慮，酶解pH為7時(shí)的酶解效果最好。

圖3 酶解pH對(duì)水解度及ACE抑制率的影響Fig.3 The effectof pH on degree of hydrolysis and ACE inhibitory rate

2.2.3 酶解時(shí)間對(duì)酶解液的水解度及ACE抑制率的影響 在酶底比3000U/g，底物濃度3%，pH 6.5，酶解溫度55℃的條件下酶解，考察酶解時(shí)間對(duì)酶解液水解度及ACE抑制率的影響。如圖4所示，酶解液水解度隨水解時(shí)間加長(zhǎng)逐步緩慢上升，說明酶解時(shí)間對(duì)水解度影響較小。ACE抑制率在4h時(shí)達(dá)到最高值50.70%，之后時(shí)間再增加，ACE抑制率下降。

圖4 酶解時(shí)間對(duì)水解度及ACE抑制率的影響Fig.4 The effectof time on degree of hydrolysis and ACE inhibitory rate

2.2.4 酶底比對(duì)酶解液的水解度及ACE抑制率的影響 底物濃度3%，酶解pH6.5，酶解溫度55℃的條件下酶解5h，考察酶底比對(duì)酶解液水解度及ACE抑制率的影響。如圖5所示，酶解液水解度隨酶底比的增加一直呈上升趨勢(shì)，并逐漸趨于平緩。ACE抑制率在酶底比為5000U/g時(shí)達(dá)到最高值55.00%，之后再增加酶底比，ACE抑制率下降。

圖5 酶底比對(duì)水解度及ACE抑制率的影響Fig.5 The effectof enzyme/substrate ratio on degree of hydrolysis and ACE inhibitory rate

2.2.5 底物濃度對(duì)酶解液的水解度及ACE抑制率的影響 在酶底比3000U/g，酶解溫度55℃，酶解pH 6.5的條件下酶解5h，考察底物濃度對(duì)酶解液水解度及ACE抑制率的影響。如圖6所示，酶解液水解度隨酶底比的增加呈上升趨勢(shì)，在3%以后上升較緩。ACE抑制率在底物濃度5%時(shí)達(dá)到最高值57.20%，底物濃度再上升，ACE抑制率下降。綜合考慮，選取底物濃度為5%。

圖6 底物濃度對(duì)水解度及ACE抑制率的影響Fig.6 The effectof substrate concentration on degree of hydrolysis and ACE inhibitory rate

從以上分析結(jié)果可以看出，當(dāng)酶解液的ACE抑制率最大時(shí)，水解度并沒有達(dá)到最大值，而隨著水解度的加大，ACE抑制率反而下降，二者不呈線性關(guān)系，這與王茵等[19]研究結(jié)果一致。這可能是由于水解度提高時(shí)，將具有ACE抑制活性的肽進(jìn)一步水解，導(dǎo)致活性降低[20]。因此本實(shí)驗(yàn)在進(jìn)行酶解制備降血壓肽工藝條件優(yōu)化時(shí)，選用ACE抑制率為主要指標(biāo)。

2.3 響應(yīng)面法優(yōu)化豬肩胛骨降血壓肽制備工藝

2.3.1 模型建立與方差分析 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用三因素三水平對(duì)酶解液的ACE抑制率進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表3。

由表4可知，在該模型中，A、C、AC、B2、C2對(duì)ACE抑制率影響顯著，即酶底比、水解時(shí)間、酶底比與水解時(shí)間的交互作用對(duì)水解度的ACE抑制率有顯著影響，且影響順序?yàn)椋篈＞C＞B，即：酶底比＞酶解時(shí)間＞酶解溫度；失擬項(xiàng)不顯著，并且該模型的R2=0.9654，R2Adj=0.9030，說明該回歸方程對(duì)實(shí)際情況擬合較好，使用該回歸方程代替真實(shí)的實(shí)驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)行分析是可行的。

對(duì)表中數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸擬合之后，得到ACE抑制率對(duì)酶底比、水解時(shí)間、水解溫度的二次多項(xiàng)回歸方程為：Y=63.54+3.25A-0.27B+1.11C-0.20AB+2.00AC-0.89BC-0.9A2-2.11B2-2.24C2。

表3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及分析結(jié)果Table 3 Experimental design and results forresponse surface analysis

由方程預(yù)測(cè)得到最佳水解度條件是酶底比6900U/g，水解溫度53.4℃，水解時(shí)間4.71h，此時(shí)ACE抑制率為66.93%。為方便驗(yàn)證，將參數(shù)修正為pH7.0，底物濃度5%，酶解溫度53℃，酶解時(shí)間4.5h，酶底比6900U/g，此條件下制備出豬肩胛骨降血壓肽的ACE抑制率為65.31%，接近于理論值。

通過ACE抑制率模型的二元多次回歸方程所作的響應(yīng)面曲面圖見圖7，是酶底比與水解時(shí)間（AC）交互作用對(duì)水解物ACE抑制率的影響。響應(yīng)曲面坡度較大，說明響應(yīng)值對(duì)于處理?xiàng)l件較敏感，與表4結(jié)果一致。

3 結(jié)論

3.1 對(duì)比酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶對(duì)酶解液ACE抑制率及水解度的影響，確定風(fēng)味蛋白酶為最適酶。

表4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析表Table 4 Analysis of varlance for the fitted regressionmodel

圖7 酶底比與水解時(shí)間交互影響水解物ACE抑制率的響應(yīng)曲面圖Flg.7 Response surface showing the effects of hydrolysis time and enzyme/substrate ratio on ACE inhibitory rate

3.2 通過單因素實(shí)驗(yàn)考察了酶解pH、酶解溫度、酶解時(shí)間、底物濃度、酶底比這5個(gè)因素對(duì)酶解液水解度和ACE抑制率的影響，并通過Box-Behnken模型響應(yīng)面法優(yōu)化豬肩胛骨降血壓肽制備工藝，得到制備降血壓肽最佳酶解條件為pH 7.0、底物濃度5%、酶解溫度53℃、酶解時(shí)間4.5h、酶底比6900U/g，此時(shí)ACE抑制率為65.31%。與理論值接近。

我國(guó)畜禽資源豐富，浪費(fèi)嚴(yán)重，豬肩胛骨的利用率更是極低，本實(shí)驗(yàn)確定的豬肩胛骨ACE抑制肽制備工藝可以為豬骨的綜合利用提供一定的參考數(shù)據(jù)。本實(shí)驗(yàn)將豬肩胛骨酶解后，只是ACE抑制活性進(jìn)行主要研究，而酶解液中的其他活性肽有待進(jìn)一步研究。酶解得到的ACE抑制肽還有待利用其他的分離純化技術(shù)對(duì)高活性的豬肩胛骨ACE抑制肽進(jìn)行進(jìn)一步分離。

[1]孫蓓，王龍剛.畜禽骨的綜合利用現(xiàn)狀及發(fā)展前景[J].中國(guó)調(diào)味品，2011，36（4）：1-13.

[2]楊巍，成曉瑜，陳文華，等.畜禽骨深加工技術(shù)與應(yīng)用現(xiàn)狀[J].肉類研究，2009，23（11）：75-79.

[3]V Kamath，SNiketh，A Chandrashekar，et al.Chymotryptic hydrolysates ofa-kafirin，the storage protein of sorghum（Sorghum bicolor） exhibited angiotensin converting enzyme inhibitory activity[J].Food Chemistry，2007，100：306-311.

[4]Blanca Hernández-Ledesma，María del Mar Contreras，Isidra Recio.Antihypertensive peptides：Production，bioavailability and incorporation into foods[J].Advances in Colloid and Interface Science，2011，165（1）：23-35.

[5]尹波歡，王燕.食源性降血壓肽研究進(jìn)展[J].農(nóng)產(chǎn)品加工·學(xué)刊，2011，7（7）：141-144.

[6]蔡麗華.牛骨酶解制備血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽的研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué).2010.

[7]李誠(chéng)，張小麗，付剛，等.酶解鴨骨制取ACE抑制肽工藝條件的優(yōu)化[J].中國(guó)釀造，2011，30（8）：61-65.

[8]王英超，李天俊，王敏華，等.羊骨酶解物中降血壓肽的分離純化工藝研究[J].食品研究與開發(fā)，2007，28（9）：7-10.

[9]劉小紅，李誠(chéng)，付剛，等.豬股骨頭膠原蛋白降血壓肽的分離純化[J].食品科學(xué)，2013：http：//www.cnki.net/kcms/detail/ 11.2206.TS.20130702.20131401.20130069.htm l.

[10]王玉霞.雞骨肽制備及其ACE抑制活性研究[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2011.

[11]Patricia Castellano，María-Concepción Aristoyb，Miguelángel Sentandreub，etal.Peptideswith angiotensin Iconverting enzyme（ACE）inhibitory activity generated from porcine skeletalmuscle proteins by the action ofmeat-borne Lactobacillus[J].Journal of Proteomics，2013，89：183-190.

[12]陳碩，李誠(chéng)，李娜，等.豬股骨頭膠原蛋白水解產(chǎn)物的降血壓作用[J].食品科學(xué)，2013，34（11）：285-287.

[13]李娜，李誠(chéng)，陳碩，等.豬股骨不同部位膠原蛋白水解產(chǎn)物降血壓作用[J].食品科學(xué)，2013，34（13）：289-292.

[14]Cushman DW，Cheung HS.Spectrophotometric assay and properties of the angiotensin-converting enzyme of rabbit lung[J]. Biochemical Pharmacology，1971，20（7）：1637-1648.

[15]劉小華，張美霞，于春梅.考馬斯亮蘭法測(cè)定殼聚糖中蛋白的含量[J].中國(guó)交通醫(yī)學(xué)雜志.2006，20（2）：159-160.

[16]郭藹光.基礎(chǔ)生物化學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2004：89-92.

[17]GB/T 5009.5-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定[S].

[18]Fatemeh Bamdad，Jianping Wu，Lingyun Chen.Effects of enzymatic hydrolysis on molecular structure and antioxidant activity of barley hordein[J].Journal of Cereal Science，2011，54（1）：20-28.

[19]王茵，劉淑集，吳成業(yè).紫菜降血壓肽酶法制備工藝的優(yōu)化[J].福建水產(chǎn)，2008，12（4）：64-68.

[20]Mar?a M Yust，Justo Pedroche，Julio Girón-Calle，et al. Production of ace inhibitory peptides by digestion of chickpea legumin with alcalase[J].Food Chemistry，2003，81（3）：363-369.

Preparation of antihypertensive peptides from pig scapula protein by enzyme method

CHEN Chang-lin，LICheng*，F(xiàn)U Gang，ZHANG Shu-ying，HUANG Shan-shan，XIAO Lan
（College of Food，Sichuan Agriculture University，Ya’an 625014，China）

Pig scapula p rotein was hyd rolyzed w ith p rotease to p repare antihypertensive pep tides.The sing lefac tor method was used to analyze the effect of the kind of enzyme，time，substrate concentration，enzyme/ substrate ratio，hyd rolysis pH and temperature on deg ree of hyd rolysis and Angiotensin-converting enzyme（ACE）inhibitory activity of pig scapula p rotein hyd rolysate.Operating parameters such as temperature，hyd rolysis time and enzyme/substrate ratio were op tim ized using response surface analysis based on ACE inhibitory rate.The op timal hyd rolysis cond itions of pig scapula pep tide were enzyme/substrate ratio of 6900U/g，hyd rolysis temperature of 53℃，hyd rolysis time of 4.5h.The theoretical value of ACE inhibitory ac tivity was 66.93%，which was c lose to the actual value of 65.31%.

p ig scapula；enzyme；antihypertensive pep tides；response surface

TS209

A

1002-0306（2014）18-0211-05

10.13386/j.issn1002-0306.2014.18.037

2013－12－19 *通訊聯(lián)系人

陳昌琳（1989-），女，在讀碩士研究生，研究方向：功能性食品。