• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    HBV突變與HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭相關(guān)性研究

    2014-01-28 08:26:46張愛民王慧芬李桂英段學(xué)章
    傳染病信息 2014年2期
    關(guān)鍵詞:突變率核苷酸基因突變

    張愛民,王慧芬,李桂英,李 玉,段學(xué)章

    HBV 相關(guān)慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)臨床病情危重、發(fā)展迅速、治療方法少,病死率高達50%~80%[1]。機體感染HBV 后可有不同的臨床結(jié)局,由病毒、肝細(xì)胞和宿主免疫系統(tǒng)相互作用決定。HBV 感染后的發(fā)病機制是免疫誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷[2],ACLF 則可能是這種免疫應(yīng)答的異常反應(yīng)[3]。因此,病毒及機體免疫反應(yīng)就成為乙型肝炎發(fā)病機制的兩個主要因素。截止目前,病毒或免疫因素如何作用導(dǎo)致肝衰竭的發(fā)生仍然沒有明確的定論,HBV 突變是當(dāng)下研究熱點[4-5]。本研究選取87例HBV 相關(guān)ACLF 患者為研究對象,以52例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)、51例肝硬化(liver cirrhosis,LC)為對照,對HBV 前C(pre-core,PC)區(qū)、C 區(qū)、基本核心啟動子(basal core promoter,BCP)區(qū)的13 個基因位點進行測序,對比不同患者之間PC 區(qū)、C 區(qū)和BCP 區(qū)核苷酸突變率的差異,探討其與ACLF 之間的相關(guān)性。

    1 對象與方法

    1.1 對象 選取2010年1月—2012年4月于我院住院診治的慢性HBV 感染者190例。所有患者均為血清HBV DNA 陽性,未曾進行干擾素和(或)核苷(酸)類似物抗病毒治療,經(jīng)病史及實驗室檢查明確為感染6 個月以上。排除甲、丙、丁、戊型肝炎病毒重疊感染;排除合并CMV、EB 病毒和HIV 感染;排除合并自身免疫性肝炎、脂肪肝及酒精性肝病。肝衰竭診斷符合2006年《肝衰竭診療指南》[6],慢性肝炎及肝硬化診斷符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》[7]。

    1.2 實驗室檢測

    1.2.1 生化及病毒學(xué)指標(biāo)檢測 患者肝功能(ALT、AST、TBIL 和ALB)、凝血功能(PT、PA 和國際標(biāo)準(zhǔn)化比值)、HBV M 及HBV DNA 定量檢測等為住院期間由我院臨床檢驗醫(yī)學(xué)中心完成。

    1.2.2 HBV 基因型、亞型和PC 區(qū)、C 區(qū)、BCP 區(qū)突變位點的檢測

    1.2.2.1 引物設(shè)計與合成 根據(jù)HBV 基因組文庫數(shù)據(jù),采用Primer 5.0 軟件,針對S 基因保守區(qū)共設(shè)計2 對巢式引物對HBV 進行分型。對B 和C 亞型采用半巢式,突變位點為巢式引物,引物均由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成(表1)。

    1.2.2.2 基因組DNA 提取和PCR 擴增

    表1 HBV 基因分型和突變位點的引物序列Table1 HBV genotype classification and gene mutation primers

    1.2.2.2.1 標(biāo)本采集和保存 上述標(biāo)本均取自患者外周靜脈血,干燥管靜置2 h,以3000 r/min 離心10 min,分離血清分裝于1.5 ml EP 管中,保存于-80 ℃冰箱,統(tǒng)一檢測。

    1.2.2.2.2 基因組DNA 提取和PCR 擴增 參照Tiangen 試劑盒說明,取先證者及其12 名家系成員外周靜脈血。提取全血白細(xì)胞基因組DNA,-20 ℃保存?;蚪MDNA 模板行PCR 擴增。反應(yīng)體系包括:基因組DNA 50 ng、上下游引物各0.5 μl(10 pmol)、dNTP(2.5 mmol)2 μl、rTaq 酶(TaKaRa 公司,日本)1 U、2×GC buffer Ⅰ緩沖液補充雙蒸水至20 μl。PCR 應(yīng)用ABI 9700 熱循環(huán)儀,條件:95 ℃預(yù)變性5 min,95 ℃變性30 s,55 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,循環(huán)35 次,72 ℃再延伸10 min。

    1.2.2.3 PCR 產(chǎn)物純化、測序及序列分析 PCR 產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳鑒定,純化后分別對擴增引物測序(北京華大基因研究中心),結(jié)果采用DNAStar 軟件子程序SeqMan 分析。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用Stata 11.0 軟件對數(shù)據(jù)進行分析。正態(tài)分布的連續(xù)性數(shù)據(jù)如年齡、HBV DNA 用±s 表示,非正態(tài)分布的連續(xù)性數(shù)據(jù)如血清膽紅素、ALT、PA 水平用中位數(shù)(最小值,最大值)表示。3 組間率的比較采用R×C χ2檢驗,兩兩多重比較用Scheffe 法。發(fā)生ACLF 影響因素用logistic 回歸分析。P <0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 一般資料 190例慢性HBV 感染者中包括52例CHB(CHB 組)、51例LC(LC 組)和87例ACLF(ACLF 組)?;颊吣挲g、性別、入組時肝功能和凝血功能等見表2。

    2.2 190例BCP 區(qū)、前C 區(qū)和C 區(qū)基因突變分布 檢測190例的BCP 區(qū)、前C 區(qū)和C 區(qū)基因突變位點為1753(T→C/G)、1754(T→C)、1758(T→C)、1762(A →T)、1764(G →A)、1766(C →T)、1768(T→A)、1846(A →T)、1858(T→C)、1862(G →T)、1896(G→A)、1899(G→A)和1913(C→A/G)。CHB組的全陰數(shù)為12例(23.1%),遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于LC 組和ACLF 組的0例(0%)和3例(3.5%)。CHB、LC、ACLF 3 組的13 個突變位點的總突變數(shù)分別為120、181、335 個,人均核苷酸突變檢出率分別為2.31、3.55、3.86 個。ACLF 組 中T1754G、T1758C、C1766T、T1768A、G1862T、T1858C 發(fā)生突變的病例數(shù)分別為7、5、7、4、1、4例,故未對這6 個位點的突變情況進一步分析統(tǒng)計。T1753C、A1762T、G1764A和G1899A 這4 個突變位點,LC 組核苷酸突變率高于CHB 組。A1762T、A1846T、G1899A 和C1913(A/G)4 個突變位點在ACLF 組和CHB 組之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,CHB 組核苷酸突變率低于ACLF組。G1764A、A1846T 和C1913(A/G)在ACLF 組和LC 組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義,G1764A 位點突變率在LC 組高于ACLF 組,A1846T 和C1913(A/G)位點突變率在LC 組低于ACLF 組(表3)。

    表2 CHB、LC 和ACLF 組臨床及病毒學(xué)特征Table2 Clinical and virological characteristics in patients with CHB,LC and ACLF

    按患者在慢性肝炎或肝硬化基礎(chǔ)上發(fā)生ACLF,分為ACLF-CHB 組和ACLF-LC 組,分別為29例和58例,比較CHB 組和ACLF-CHB 組、LC組和ACLF-LC 組基因突變差異。結(jié)果提示A1846T和C1913(A/G)位點突變率在CHB 組低于ACLFCHB 組,在LC 組低于ACLF-LC 組(表4)。

    表3 CHB、LC 和ACLF 組HBV 基因突變比較[例(%)]Table3 Comparison of HBV mutations among patients with CHB,LC and ACLF [cases (%)]

    2.3 ACLF 發(fā)病影響因素的多因素分析 將HBeAg 是否陽性、HBV 基因分型是否為C 型及是否發(fā)生1753(T→C/G)、1762(A→T)、1764(G→A)、1846(A→T)、1899(G→A)和1913(C→A/G)位點突變設(shè)為自變量,是否發(fā)生ACLF 為因變量,進行l(wèi)ogistic 回歸分析。自變量賦值如下:X1(HBeAg 陽性=1、陰性=0),X2(HBV 基因C 型=1、B 型=0),X3[1753(C/G)=1、1753T=0)],X4(1762T=1、1762A=0),X5(1764A=1、1764G=0),X6(1846T=1、1846A=0),X7(1899A=1、1899G=0),X8(1913A/G=1、1913C=0),Y(發(fā)生ACLF=1、不發(fā)生ACLF=0)。結(jié)果表明1846(A→T)和1913(C→A/G)的OR 值分別為2.86 和5.93,均為發(fā)生ACLF 的危險因素(P<0.05)。見表5。

    表4 CHB 組與ACLF-CHB、LC 與ACLF-LC 組HBV 基因突變比較[例(%)]Table4 Comparison of HBV mutations between patients with CHB and ACLF-CHB,and between LC and ACLF- LC[cases (%)]

    表5 ACLF 發(fā)病相關(guān)多因素分析Table5 Multivariable analysis of the occurrence of HBV-related ACLF

    3 討 論

    HBV 基因突變是CHB 疾病進展過程中在宿主的免疫壓力下病毒的正向選擇結(jié)果,突變株一般可減少病毒蛋白的產(chǎn)生,是病毒逃避免疫監(jiān)視的一種方式[8]。由于這種機制,HBV 突變隨著疾病的進展逐步累積,以致不同疾病階段突變率明顯不同[9]。本研究顯示CHB 組野生型HBV 占23.1%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于LC 和ACLF 組的0%和3.5%。CHB、LC和ACLF 3 組的人均HBV 核苷酸突變檢出率分別為2.31、3.55 和3.86 個。

    關(guān)于HBV 的PC 區(qū)突變株感染與肝臟病變輕重的關(guān)系意見不一,大多數(shù)報道認(rèn)為突變與肝臟病變程度相關(guān),尤其與肝衰竭的發(fā)生密切相關(guān)[10-12]。本研究顯示PC 區(qū)G1899A 位點突變在LC 和ACLF組高于CHB 組,但3 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。BCP區(qū)突變影響病情的報道較多,本研究中A1762T 和G1764A 位點突變率LC 組高于CHB 組,G1764A 位點突變率LC 組高于ACLF 組,但CHB 組和ACLF組G1764A 位點突變率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,故考慮G1764A 位點突變與肝硬化相關(guān),并不影響ACLF 的發(fā)生。A1846T 和C1913(A/G)位點突變率在CHB 組和LC 組均低于ACLF 組,但在CHB 組和LC 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。按ACLF 發(fā)病基礎(chǔ)分為ACLF-CHB 和ACLF-LC 2 組,分別比較CHB組和ACLF-CHB 組、LC 組和ACLF-LC 組,結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)A1846T 和C1913(A/G)位點突變率在CHB組低于ACLF-CHB 組,LC 組低于ACLF-LC 組,故推測可能A1846T 和C1913(A/G)位點突變與ACLF有關(guān)。為進一步排除干擾因素,找出對ACLF 有意義的預(yù)測因素,我們對上述單因素分析有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)引入二項分類的logistic 回歸,應(yīng)變量為是否發(fā)生ACLF。引入分析的指標(biāo)有:HBeAg 狀態(tài)、HBV 基因分型、1753(T→C/G)、1762(A→T)、1764(G→A)、1846(A→T)、1899(G→A)和1913(C→A/G)。結(jié)果提示1846(A→T)和1913(C→A/G)位核苷酸突變是預(yù)測ACLF 的有效指標(biāo),OR 值分別為2.86 和5.93,提示1846(A→T)和1913(C→A/G)位點突變患者發(fā)生ACLF 的幾率分別是未發(fā)生突變患者的2.86 和5.93 倍。前期研究顯示A1846T 突變與肝臟炎癥及ACLF 發(fā)病有關(guān)[13-14],相關(guān)發(fā)病機制尚不清楚。nt1913 位于C 區(qū)起始部位,既往對此位點突變的相關(guān)文獻較少。由于該位點突變可引起HBcAg 第5 位氨基酸的突變(脯氨酸→蘇氨酸/丙氨酸),該氨基酸位于HBcAg 人類白細(xì)胞分類抗原Ⅱ限制性輔助性T 細(xì)胞抗原表位,故nt1913 突變可能會引起該表位的變化,從而影響病情的嚴(yán)重程度[15-17]。

    總之,ACLF 患者血清HBV 發(fā)生A1846T 和C1913(A/G)突變較CHB 和LC 患者更多,這一發(fā)現(xiàn)有助于了解不同肝病基礎(chǔ)上發(fā)生ACLF 的發(fā)病機制,并可能有助于預(yù)測慢性肝病是否發(fā)展為ACLF,但須進一步進行體外實驗來支持這一可能發(fā)病機制。

    [1] Chisari FV,Isogawa M,Wieland SF.Pathogenesis of hepatitis B virus infection[J].Pathol Biol(Paris),2010,58(4):258-266.

    [2] Dumas L,Vergani D,Mieli-Vergani G.Hepatitis B virus:something old,something new[J].J Pediatr Gastroenterol Nutr,2007,44(1):14-17.

    [3] Sarin SK,Kumar A,Almeida JA,et al.Acute-on-chronic liver failure:consensus recommendations of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver(APASL)[J].Hepatol Int,2009,3(1):269-282.

    [4] 侯金林.基因型和基因突變與乙型肝炎重癥化的關(guān)系[J].中華肝臟病雜志,2010,18(2):85-87.

    [5] 鄧國宏,王宇明.宿主遺傳背景與乙型肝炎重癥化[J].中華肝臟病雜志,2010,18(2):88-91.

    [6] 中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會肝衰竭與人工肝學(xué)組,中華醫(yī)學(xué)會肝病分會重型肝病與人工肝學(xué)組.肝衰竭診療指南[J].中華內(nèi)科雜志,2006,45(12):1053-1056.

    [7] 中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會,中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J].傳染病信息,2011,24(1):Ⅲ-ⅩⅤ.

    [8] Yuen MF,Sablon E,Yuan HJ,et a1.Significance of hepatitis B genotype in acute exacerbation,HBeAg seroconversion,cirrhosisrelated complications,and hepatocellular carcinoma[J].Hepatology,2003,3(3):562-567.

    [9] Lok AS,McMahon BJ.Chronic hepatitis B[J].Hepatology,2007,45(2):507-539.

    [10] Carman WF,Jacyna MR,Hadziyannis S,et al.Mutation preventing formation of hepatitis B e antigen in patients with chronic hepatitis B infection[J].Lancet,1989,2(8663):588-591.

    [11] Yuen MF,Tanaka Y,Mizokami M,et al.Role of hepatitis B virus genotypes Ba and C,core promoter and precore mutationsonhepatocellular carcinoma:acasecontrol study[J].Carcinogenesis,2004,25(9):1593-1598.

    [12] Yu MC,Yuan JM,Govindarajan S,et al.Epidemiology of hepatocellular carcinoma[J].JGastroenterol,2000,14(8):703-709.

    [13] Xu Z,Ren X,Liu Y,et al. Association of hepatitis B virus mutations in basal corepromoter and precore regionswith severity of liver disease:aninvestigationof 793 Chinesepatientswith mild and severe chronic hepatitis B and acute-on-chronic liver failure[J].JGastroenterol.2011,46(3):391-400.

    [14] Yan T,Li K,Li F,et al.T1846 and A/G1913 are associated with acute on chronic liver failure in patients infected with hepatitis B virus genotypes B and C[J].JMed Virol,2011,83(6):996-1004.

    [15] Torre F,Cramp M,Owsianka A,et al.Direct evidence that naturally occurring mutations within hepatitis B core epitope alter CD4+T-cell reactivity[J].JMed Virol,2004,72(3):370-376.

    [16] 寧琴,武澤光,韓梅芳.難治性慢性乙型肝炎[J].傳染病信息,2011,24(2):65-67.

    [17] 丁劍波,羅曉嵐,田一梅,等.慢性乙型重型肝炎預(yù)后影響因素Logistic回歸分析[J].傳染病信息,2012,25(3):161-163.

    猜你喜歡
    突變率核苷酸基因突變
    大狗,小狗——基因突變解釋體型大小
    英語世界(2023年6期)2023-06-30 06:29:10
    單核苷酸多態(tài)性與中醫(yī)證候相關(guān)性研究進展
    徐長風(fēng):核苷酸類似物的副作用
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:48:28
    基于有限突變模型和大規(guī)模數(shù)據(jù)的19個常染色體STR的實際突變率研究
    遺傳(2021年10期)2021-11-01 10:30:08
    管家基因突變導(dǎo)致面部特異性出生缺陷的原因
    南寧市1 027例新生兒耳聾基因篩查結(jié)果分析
    非小細(xì)胞肺癌E19-Del、L858R突變臨床特征分析
    端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子熱點突變的ARMS-LNA-qPCR檢測方法建立
    Acknowledgment to reviewers—November 2018 to September 2019
    基因突變的“新物種”
    亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 少妇高潮的动态图| 国产成人av激情在线播放| 日本在线视频免费播放| 午夜激情福利司机影院| 亚洲国产色片| 在线观看日韩欧美| 成年人黄色毛片网站| 国产亚洲精品久久久com| 99在线视频只有这里精品首页| 国产成人影院久久av| 91久久精品国产一区二区成人 | 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 极品教师在线免费播放| 最近视频中文字幕2019在线8| 黄色视频,在线免费观看| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美一区二区亚洲| а√天堂www在线а√下载| 久久久精品欧美日韩精品| 黄色视频,在线免费观看| 天美传媒精品一区二区| 狠狠狠狠99中文字幕| 一个人免费在线观看电影| 日本免费a在线| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 天堂√8在线中文| 国产精品爽爽va在线观看网站| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲av免费在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲av成人av| 久久久久久久午夜电影| 村上凉子中文字幕在线| 日韩精品中文字幕看吧| 国产免费男女视频| 一个人看的www免费观看视频| 欧美日韩精品网址| 日本成人三级电影网站| 全区人妻精品视频| 两个人的视频大全免费| 精品电影一区二区在线| 97碰自拍视频| 亚洲精品成人久久久久久| 国产精品av视频在线免费观看| 精品国产美女av久久久久小说| 国产精品久久久人人做人人爽| 他把我摸到了高潮在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美黑人欧美精品刺激| 一二三四社区在线视频社区8| 色综合站精品国产| 久久久久久大精品| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 日日干狠狠操夜夜爽| 日本a在线网址| 免费人成视频x8x8入口观看| 嫩草影院入口| 国产亚洲精品久久久com| 久久久久性生活片| 免费在线观看日本一区| 亚洲av二区三区四区| 我的老师免费观看完整版| 国产av在哪里看| 在线视频色国产色| 成人三级黄色视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 少妇丰满av| 国产精品,欧美在线| 日韩欧美免费精品| 亚洲av第一区精品v没综合| 18禁美女被吸乳视频| 男女之事视频高清在线观看| 69av精品久久久久久| 国产精品久久久久久人妻精品电影| a在线观看视频网站| 一边摸一边抽搐一进一小说| 男人和女人高潮做爰伦理| 午夜激情福利司机影院| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲不卡免费看| 欧美一级a爱片免费观看看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产伦在线观看视频一区| 国产精品乱码一区二三区的特点| 白带黄色成豆腐渣| 精品国产亚洲在线| 免费在线观看影片大全网站| 日韩欧美国产一区二区入口| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产高清激情床上av| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲国产欧美人成| av视频在线观看入口| 国产高清有码在线观看视频| 久久久久国内视频| 国产成人aa在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| av黄色大香蕉| 人人妻人人看人人澡| 国产免费男女视频| 亚洲专区国产一区二区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产三级在线视频| 久久精品国产清高在天天线| 有码 亚洲区| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲人与动物交配视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲av成人精品一区久久| 日日夜夜操网爽| 在线观看舔阴道视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 97碰自拍视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 一本一本综合久久| 在线看三级毛片| 亚洲avbb在线观看| 免费在线观看日本一区| 欧美日韩国产亚洲二区| 一个人看的www免费观看视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 精华霜和精华液先用哪个| 99热只有精品国产| 深爱激情五月婷婷| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产成人a区在线观看| 在线播放无遮挡| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲真实伦在线观看| 久久久久久久久大av| h日本视频在线播放| 岛国在线观看网站| 在线观看免费视频日本深夜| 五月伊人婷婷丁香| 欧美成人性av电影在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 99久国产av精品| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲精品在线观看二区| 99热只有精品国产| 免费看十八禁软件| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 变态另类丝袜制服| 久久久国产成人免费| 美女 人体艺术 gogo| 老司机午夜福利在线观看视频| 成人18禁在线播放| 亚洲在线观看片| 午夜视频国产福利| 少妇熟女aⅴ在线视频| 成年版毛片免费区| 在线天堂最新版资源| 在线观看av片永久免费下载| 美女大奶头视频| 亚洲激情在线av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲av第一区精品v没综合| 最后的刺客免费高清国语| 无人区码免费观看不卡| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产视频一区二区在线看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 91av网一区二区| 丰满人妻一区二区三区视频av | 久久6这里有精品| 18美女黄网站色大片免费观看| tocl精华| 99热6这里只有精品| 日韩欧美在线二视频| 制服人妻中文乱码| 久久久久精品国产欧美久久久| 热99re8久久精品国产| 亚洲av第一区精品v没综合| 午夜精品在线福利| 一本精品99久久精品77| 日韩精品中文字幕看吧| 国产野战对白在线观看| 88av欧美| 夜夜爽天天搞| 桃色一区二区三区在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| h日本视频在线播放| 精品久久久久久,| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 男人和女人高潮做爰伦理| 久久久国产成人精品二区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 免费看十八禁软件| 欧美一级a爱片免费观看看| 身体一侧抽搐| 免费av毛片视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 午夜激情欧美在线| 怎么达到女性高潮| 欧美三级亚洲精品| 日本 av在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产精华一区二区三区| 午夜福利成人在线免费观看| 中文字幕高清在线视频| 手机成人av网站| 亚洲精品一区av在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 九九热线精品视视频播放| 男人的好看免费观看在线视频| 美女高潮的动态| 日日夜夜操网爽| 欧美区成人在线视频| 日本五十路高清| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美激情在线99| 国产成人aa在线观看| 99久久成人亚洲精品观看| 9191精品国产免费久久| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 高清日韩中文字幕在线| 舔av片在线| 操出白浆在线播放| 国产精品永久免费网站| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产极品精品免费视频能看的| 欧美av亚洲av综合av国产av| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久6这里有精品| 亚洲最大成人手机在线| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 精品久久久久久久久久免费视频| 婷婷亚洲欧美| av国产免费在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 18+在线观看网站| 12—13女人毛片做爰片一| 九色成人免费人妻av| 欧美乱妇无乱码| 中出人妻视频一区二区| 免费在线观看日本一区| 国产毛片a区久久久久| 亚洲自拍偷在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 18美女黄网站色大片免费观看| 免费在线观看成人毛片| 亚洲片人在线观看| 欧美激情在线99| 国产97色在线日韩免费| 日本成人三级电影网站| 国产精品,欧美在线| bbb黄色大片| 中文资源天堂在线| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日韩欧美国产在线观看| 91久久精品电影网| 久久6这里有精品| 窝窝影院91人妻| avwww免费| 免费搜索国产男女视频| 99精品在免费线老司机午夜| 国产三级中文精品| 久久精品91无色码中文字幕| 国产色婷婷99| 91久久精品电影网| 亚洲国产欧美人成| 在线观看免费午夜福利视频| 脱女人内裤的视频| 久久久久久人人人人人| 国产精品一区二区三区四区久久| 老司机午夜十八禁免费视频| 91在线观看av| 嫩草影视91久久| 床上黄色一级片| 美女 人体艺术 gogo| 老司机在亚洲福利影院| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 国产一区二区三区视频了| 国产精品爽爽va在线观看网站| 色视频www国产| 亚洲中文字幕日韩| 99国产综合亚洲精品| svipshipincom国产片| 久久精品91蜜桃| a级毛片a级免费在线| 亚洲欧美激情综合另类| 免费观看精品视频网站| 麻豆成人av在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 免费看十八禁软件| av专区在线播放| 少妇丰满av| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲欧美日韩东京热| 免费av毛片视频| 免费在线观看成人毛片| 在线a可以看的网站| 国产精品日韩av在线免费观看| 美女 人体艺术 gogo| 伊人久久精品亚洲午夜| 一区福利在线观看| 亚洲黑人精品在线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲av一区综合| 热99re8久久精品国产| netflix在线观看网站| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美日韩福利视频一区二区| 免费看光身美女| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲 国产 在线| 偷拍熟女少妇极品色| 一级毛片女人18水好多| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影 | 国产欧美日韩一区二区三| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 在线观看日韩欧美| 看片在线看免费视频| 久久精品人妻少妇| 午夜福利视频1000在线观看| 日韩国内少妇激情av| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 少妇高潮的动态图| 色综合站精品国产| 午夜激情欧美在线| 全区人妻精品视频| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美黄色淫秽网站| 久久精品91蜜桃| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲欧美精品综合久久99| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品,欧美在线| 女人被狂操c到高潮| 12—13女人毛片做爰片一| 中文字幕熟女人妻在线| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美日韩黄片免| 69av精品久久久久久| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲av美国av| 亚洲欧美精品综合久久99| 午夜福利高清视频| 成人无遮挡网站| 国产午夜精品论理片| 国产真实伦视频高清在线观看 | 最好的美女福利视频网| 免费观看的影片在线观看| 亚洲最大成人中文| 欧美性猛交黑人性爽| 日本一本二区三区精品| 在线视频色国产色| 国产麻豆成人av免费视频| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲18禁久久av| 99热这里只有精品一区| 国产乱人视频| 中国美女看黄片| 欧美日韩国产亚洲二区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 一区福利在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 99久久精品一区二区三区| 色吧在线观看| 国产日本99.免费观看| 少妇高潮的动态图| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲,欧美精品.| 在线看三级毛片| 国产精品国产高清国产av| 88av欧美| 欧美黄色淫秽网站| 哪里可以看免费的av片| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产一区二区激情短视频| 欧美极品一区二区三区四区| 三级国产精品欧美在线观看| 国产三级黄色录像| 欧美另类亚洲清纯唯美| 免费在线观看影片大全网站| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲在线自拍视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产精品 国内视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产精品久久视频播放| 啦啦啦韩国在线观看视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产色爽女视频免费观看| 国产乱人视频| 最近在线观看免费完整版| 日本熟妇午夜| 黄色视频,在线免费观看| 99久久精品一区二区三区| 亚洲18禁久久av| 精品久久久久久久久久久久久| 国内揄拍国产精品人妻在线| 黄色片一级片一级黄色片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲av成人精品一区久久| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产成人欧美在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲七黄色美女视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 婷婷六月久久综合丁香| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲午夜理论影院| 少妇丰满av| tocl精华| 黄色成人免费大全| 天美传媒精品一区二区| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产成年人精品一区二区| 日韩欧美在线二视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 午夜福利在线观看吧| 国产精品1区2区在线观看.| 男女床上黄色一级片免费看| 制服人妻中文乱码| 啦啦啦免费观看视频1| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 两个人的视频大全免费| 成人av一区二区三区在线看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 欧美zozozo另类| 可以在线观看毛片的网站| avwww免费| 欧美色视频一区免费| 国产老妇女一区| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 少妇高潮的动态图| 亚洲内射少妇av| 免费看日本二区| 国产精品综合久久久久久久免费| 深爱激情五月婷婷| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久国产乱子伦精品免费另类| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲成av人片在线播放无| 免费av毛片视频| 日本黄色片子视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 深爱激情五月婷婷| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品欧美国产一区二区三| 岛国在线观看网站| 99在线人妻在线中文字幕| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日韩精品青青久久久久久| 免费看十八禁软件| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲av免费在线观看| 精品日产1卡2卡| 日韩人妻高清精品专区| 免费看十八禁软件| 国产伦在线观看视频一区| 97超视频在线观看视频| 精品无人区乱码1区二区| 女同久久另类99精品国产91| av在线天堂中文字幕| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 男女午夜视频在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲 国产 在线| 欧美乱妇无乱码| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 夜夜爽天天搞| 又紧又爽又黄一区二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产黄a三级三级三级人| 午夜久久久久精精品| 搡老岳熟女国产| 在线免费观看不下载黄p国产 | 最新美女视频免费是黄的| 深夜精品福利| 国产成人av激情在线播放| 九色成人免费人妻av| av专区在线播放| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美+日韩+精品| 欧美性感艳星| 久久久久久久久中文| a级毛片a级免费在线| 午夜视频国产福利| 舔av片在线| 国产成+人综合+亚洲专区| 男女之事视频高清在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲av二区三区四区| 日韩高清综合在线| 三级国产精品欧美在线观看| 国产美女午夜福利| 神马国产精品三级电影在线观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲精品在线观看二区| av片东京热男人的天堂| 欧美av亚洲av综合av国产av| 成熟少妇高潮喷水视频| 精品国产美女av久久久久小说| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 一个人免费在线观看电影| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产激情偷乱视频一区二区| 成人特级av手机在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 天堂网av新在线| 亚洲内射少妇av| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美在线黄色| 日韩欧美在线二视频| www.色视频.com| 午夜久久久久精精品| 88av欧美| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久国产精品麻豆| 香蕉久久夜色| 亚洲av熟女| 又黄又爽又免费观看的视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产午夜福利久久久久久| 精品欧美国产一区二区三| 精品电影一区二区在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 午夜影院日韩av| 少妇的丰满在线观看| 久久久久久久久大av| 国产激情欧美一区二区| 亚洲av电影在线进入| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产精品1区2区在线观看.| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 在线观看日韩欧美| 免费看a级黄色片| 国产精品久久电影中文字幕| www.色视频.com| 两个人看的免费小视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产一区二区激情短视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久久精品欧美日韩精品| 久久精品国产综合久久久| 舔av片在线| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 男女之事视频高清在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 91在线精品国自产拍蜜月 | 亚洲熟妇熟女久久| 久久久久久久久中文| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 久久九九热精品免费| 波多野结衣高清无吗| 久久草成人影院| 91av网一区二区| 99久久成人亚洲精品观看| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲成av人片在线播放无| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品亚洲一级av第二区| 美女 人体艺术 gogo| 草草在线视频免费看| 免费人成在线观看视频色| 国产伦人伦偷精品视频| 99视频精品全部免费 在线| 久99久视频精品免费| 国产成人系列免费观看| 观看免费一级毛片| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 少妇熟女aⅴ在线视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 成人av一区二区三区在线看| 国产亚洲欧美98| 草草在线视频免费看| 成人一区二区视频在线观看|