順鉑致腎損傷時血管緊張素Ⅱ的變化*

李淑貞，顧 宇，張?zhí)m蘭

（滄州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河北滄州061001）

順鉑（cisplatin，DDP）是治療實體腫瘤最有效和最常用的藥物之一，其療效與用藥劑量成正比，但DDP有嚴(yán)重腎毒性，且具有劑量依賴性［1］，這成為DDP臨床應(yīng)用劑量受限制的主要因素。DDP腎毒性的發(fā)病機(jī)制迄今為止尚未完全闡明。目前研究認(rèn)為，DDP所致的腎損害主要與氧化應(yīng)激機(jī)制有關(guān)［2］，而血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）在順鉑腎損傷中的作用至今未見報道。本研究采用放射免疫法測定順鉑腎毒性大鼠腎組織AngⅡ濃度，探討AngⅡ在順鉑腎損傷機(jī)制中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

順鉑針劑（濟(jì)南齊魯制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H37021358，批號：610044CF），AngⅡ放射免疫測定試劑盒購自北京生物技術(shù)研究所。

1.2 模型建立與分組

健康成年雄性SD大鼠24只，體重180～200 g（河南實驗動物基地提供，動物合格證號：SCXK（鄂）2004-0007），適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為2組（n＝12）：正常組、模型組。模型組大鼠參考文獻(xiàn)，并根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，采用DDP（用0.9%Na-Cl注射液配制成1 mg／ml溶液）尾靜脈注射，每次 5 mg／kg體重，每周1次，連續(xù)3周，復(fù)制DDP致大鼠腎損傷模型。正常組用等量生理鹽水替代順鉑尾靜脈注射。所有動物普通飼料，自由飲水繼續(xù)喂養(yǎng)6周。實驗結(jié)束后禁食不禁水12 h，稱重，10%水合氯醛4 ml／kg腹腔注射麻醉，迅速取出雙側(cè)腎臟，肉眼觀察大體情況，在冰板上除去包膜，用預(yù)冷的生理鹽水洗凈血液，濾紙拭干。稱量腎臟重量，以腎重量／體質(zhì)量為腎臟指數(shù)（renal index，RI）；將其中一只腎臟沿冠狀面切成兩半，放入10%多聚甲醛固定，另一只腎臟放入液氮中保存。

1.3 HE染色

10%多聚甲醛固定腎臟標(biāo)本，石蠟切片，行常規(guī)HE染色，光鏡下觀察腎臟病理損害并拍照。

1.4 Masson染色

常規(guī)石蠟切片脫蠟后，行Masson染色，光鏡下觀察腎組織細(xì)胞呈紅色，間質(zhì)膠原呈綠色，紅細(xì)胞呈橘黃色。

1.5 測定腎組織AngⅡ含量

取液氮保存腎臟100 mg，加預(yù)冷的生理鹽水2 ml，冰浴條件下勻漿，再將該勻漿液置于預(yù)冷的含3.0 mmol／L乙二胺四乙酸二鈉、3.4 mmol／L 8-羥基喹啉和 3.2 mmol／L二巰丙醇的試管中，煮沸 10 min，4℃ 3 000 r／min離心 10 min，吸取上清液，按照AngⅡ放免分析盒說明書測定AngⅡ的含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

統(tǒng)計分析用SPSS16.0軟件完成。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，兩組間比較用 t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況

在整個實驗過程中，正常組大鼠精神狀態(tài)良好，皮毛光滑潤澤，緊貼身體，大便正常，進(jìn)食無異常，體重增加；模型組大鼠注射DDP后當(dāng)日或次日開始出現(xiàn)少動閉眼，蜷臥拱背，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，攝食量明顯減少，糞便稀薄，皮毛凌亂，缺乏光澤，與正常組相比體重下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，表 1）。

2.2 腎臟指數(shù)與腎組織AngⅡ含量的比較

與正常組相比，模型組大鼠在實驗結(jié)束時腎臟指數(shù)增高（P＜0.01），腎組織 AngⅡ含量增加（P＜0.01，表 1）。

2.3 各組大鼠腎組織HE染色結(jié)果

光鏡下：正常組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)清晰，腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)正常，間質(zhì)甚少，無纖維組織增生；模型組大鼠部分腎小球輕度充血，近曲小管上皮明顯細(xì)胞水腫，部分小管上皮細(xì)胞不同程度壞死、脫落，管腔內(nèi)有大量蛋白管型，腎小管萎縮，間質(zhì)水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤、纖維母細(xì)胞增生。HE染色顯示順鉑導(dǎo)致大鼠腎臟結(jié)構(gòu)的損傷（圖1，見彩圖頁Ⅱ）。

Fig. 1 Nephridial tissue（HE ×400）A：Normal group；B：Model group

2.4 各組大鼠腎組織Masson染色結(jié)果

正常組大鼠腎小囊壁、腎小球基底膜和小管上皮細(xì)胞基底膜有微量纖維組織；模型組大鼠腎小球血管周圍有大量纖維組織增生，腎間質(zhì)膠原纖維呈條索狀、多灶或網(wǎng)狀成片，腎間質(zhì)發(fā)生纖維化（圖2，見彩圖頁Ⅱ）。

Fig. 2 Nephridial tissue（Masson ×400）A：Normal group；B：Model group

Tab.1 Results of before weight，end weight，RI and the contents of AngⅡ in different groups（ˉx±s，n＝12）

3 討論

腎間質(zhì)纖維化（renal interstitial fibrosis，RIF）幾乎是各種腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎衰竭的共同途徑和主要病理基礎(chǔ)。它是由于炎癥刺激，器官實質(zhì)細(xì)胞壞死，纖維結(jié)締組織包括細(xì)胞成分和細(xì)胞外基質(zhì)異常增多和過度沉積的病理過程。RIF發(fā)生有3個步驟：（1）損傷和炎癥；（2）致纖維化因子激活；（3）纖維化形成。高劑量或連續(xù)注射DDP導(dǎo)致的腎損傷，主要以小管間質(zhì)病變?yōu)橹鳎憩F(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞水腫、壞死、脫落，腎小管萎縮，間質(zhì)內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤，部分小管間質(zhì)內(nèi)可見纖維組織呈帶狀沉積，這些改變是RIF的基礎(chǔ)。

腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin system，RAS）是導(dǎo)致器官纖維化的主要因素，而AngⅡ是RAS中最具代表性的活性肽，也是RAS中最重要的效應(yīng)因子之一［3］。

腎臟是產(chǎn)生和分泌RAS物質(zhì)的主要部位，其局部AngⅡ濃度較血液循環(huán)中高達(dá)數(shù)十倍［4］。AngⅡ作為公認(rèn)的致腎臟損傷因素，能通過抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)人胚胎腎成纖維細(xì)胞增生及Ⅰ型膠原表達(dá)發(fā)揮致纖維化的作用。在腎間質(zhì)纖維化過程中，RAS被激活，細(xì)胞增殖和產(chǎn)生ECM的能力比正常成纖維細(xì)胞明顯提高，其中AngⅡ是刺激成纖維細(xì)胞增殖和產(chǎn)生ECM增加的重要物質(zhì)，它可能通過直接作用于腎間質(zhì)纖維化細(xì)胞或促進(jìn)TGF-β1等細(xì)胞因子和生長因子的產(chǎn)生，促進(jìn)細(xì)胞增生增殖，使ECM分泌增多降解減少，從而參與腎間質(zhì)纖維化的過程［5］。

在該實驗中，模型組大鼠的腎臟指數(shù)增高，腎間質(zhì)纖維化明顯，腎組織膠原含量增多，同時大鼠腎臟局部AngⅡ水平升高。因此初步認(rèn)為，在順鉑腎損傷中，隨著病程的發(fā)展，出現(xiàn)腎間質(zhì)纖維化，可能與腎臟局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)異常激活、AngⅡ水平升高有關(guān)。

［1］ 廖英俊，湯 浩，金亞平.抗癌藥物順鉑對小鼠的耳、腎和肝毒性及其機(jī)制的研究［J］.中國藥理學(xué)通報，2004，20（1）：82-85.

［2］ 王 黎，裴 瑞，楊紅梅，等.順鉑誘導(dǎo)腎損傷過程中腎皮質(zhì)脂質(zhì)過氧化的變化［J］.中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2004，20（4）：393-396.

［3］ 傅永錦，周 艷，潘競鏘，等.川芎嗪對鏈脲佐菌素誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠腎病的治療作用及機(jī)制［J］.中國藥學(xué)雜志，2012，47（22）：1807-1812.

［4］ 林書典，周巧玲，詹 鋒，等.福辛普利對血管緊張素II下調(diào)大鼠腎小管上皮細(xì)胞klotho基因表達(dá)的干預(yù)作用［J］.中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2010，26（3）：348-351.

［5］ 丁躍玲，趙玉庸，陳志強(qiáng)，等.腎絡(luò)通對腎小管間質(zhì)纖維化大鼠腎素-血管緊張素系統(tǒng)的影響［J］.中藥藥理與臨床，2004，20（1）：28-29.