法舒地爾對糖尿病腎病大鼠蛋白尿的影響

[摘要] 目的 探討Rho激酶抑制劑法舒地爾對糖尿病腎病大鼠蛋白尿的影響。 方法 把30只SD雄性大鼠隨機分為對照組（n = 10）、糖尿病腎病組（n = 10）、法舒地爾治療組（n = 10）。STZ腹腔注射造模成功后，法舒地爾治療組給予法舒地爾10 mg/（kg·d）腹腔注射，對照組及糖尿病腎病組給予等量的生理鹽水腹腔注射，每天2次，連續(xù)12周。檢測三組大鼠24 h尿蛋白定量，取大鼠心臟血測定尿素氮（BUN）、肌酐（ Scr）。 結(jié)果 糖尿病腎病組和法舒地爾治療組24 h尿蛋白水平明顯高于對照組（P均<0.01）。與糖尿病腎病組比較，法舒地爾治療組24 h尿蛋白定量、血BUN、Scr明顯下降（P < 0.01）。 結(jié)論 法舒地爾能在一定程度上減少糖尿病腎病大鼠的蛋白尿、減輕腎功能的損害。

[關(guān)鍵詞] 法舒地爾；糖尿病腎??；蛋白尿

[中圖分類號] R285.5 [文獻標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）13-0155-02

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病的主要并發(fā)癥之一，是以微血管病變?yōu)橹鞯哪I實質(zhì)病變，是糖尿病患者重要的死亡原因。臨床上，DN早期表現(xiàn)為腎小球濾過率（glomerular filtration rate，GFR）升高，隨后出現(xiàn)微量白蛋白尿，一旦出現(xiàn)顯性蛋白尿，病情則不斷進展，最后進入腎衰竭期，即尿毒癥期。蛋白尿是糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展中的重要因素[1]。因此，減輕蛋白尿可延緩或阻止DN的發(fā)生和進展。近年來，研究發(fā)現(xiàn)Rho激酶抑制劑可作用于多種細胞，通過抑制Rho/ROCK信號通路，改善腎臟血流動力學(xué)，抑制氧化應(yīng)激、細胞因子及炎癥因子，減輕蛋白尿，從而延緩糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展[2]。本研究旨在觀察Rho激酶抑制劑法舒地爾對糖尿病腎病大鼠蛋白尿的影響，了解其在糖尿病腎病中的有益作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

選取Sprague-Dawely雄性大鼠30只（SPF級，湖北省實驗動物中心提供），體重約200～250 g。鹽酸法舒地爾注射液 （商品名：川威，天津紅日藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)）。

1.2 建立動物模型

將30只大鼠常規(guī)喂養(yǎng)1周，測定血糖正常后隨機分為三組：Ⅰ組：對照組10只；Ⅱ組：糖尿病腎病組10只，Ⅲ組：法舒地爾治療組10只。糖尿病腎病組和法舒地爾治療組腹腔注射STZ 60 mg/kg，72 h后連續(xù)3 d測定尾血隨機血糖≥16.7 mmol/L為成功模型。建模成功后，對照組及糖尿病腎病組每天給予等量的生理鹽水腹腔注射，法舒地爾治療組給予法舒地爾10 mg/（kg·d）腹腔注射，連續(xù)12周。對于建模成功的糖尿病腎病組和法舒地爾組大鼠不予胰島素處理，三組動物飼養(yǎng)條件相同。均無動物意外死亡。

1.3 標(biāo)本的收集

實驗結(jié)束前1天，將大鼠置入代謝籠，收集24 h尿液，測定24 h尿蛋白水平；腹腔注射10%水合氯醛0.3 mL/100 g麻醉大鼠，心尖部取血，離心分離血清后測定尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

實驗所得數(shù)據(jù)均用SPSS13.0軟件包處理，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準差（x±s）表示；采用方差分析進行多組資料的比較。以P < 0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 24 h尿蛋白結(jié)果

24 h尿蛋白水平糖尿病腎病組和法舒地爾治療組均明顯高于對照組（P < 0.01），表明糖尿病腎病組和法舒地爾治療組的糖尿病腎病建模成功。見表1。

2.2 法舒地爾對糖尿病腎病大鼠24 h尿蛋白、血BUN、Scr的影響

與糖尿病腎病組比較，法舒地爾治療組24 h尿蛋白、血Scr、BUN水平明顯下降（P < 0.01）。

3 討論

DN尿蛋白的發(fā)生機制很復(fù)雜，可能是腎臟血流動力學(xué)異常、腎小球濾過屏障受損、腎小管重吸收異常、多種生長因子如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）、血小板源性生長因子（PDGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）及晚期糖基化終末產(chǎn)物（advanced glycation end products，AGE）等多個因素綜合作用的結(jié)果[3]。糖代謝紊亂可引起血管緊張素Ⅱ（angiotension-Ⅱ，Ang-Ⅱ）、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（angiotension converting enzyme，ACE）、內(nèi)皮素（endothelin，ET）、一氧化氮（nitric oxide，NO）、血管內(nèi)皮細胞生長因子（vascular endotheliar growth factor，VEGF）等一系列血管活性因子活性增強，這些因素可使腎小球入球動脈擴張程度明顯強于出球動脈，從而使腎小球出現(xiàn)高灌注、高濾過，促使血漿蛋白從腎小球濾過增加。另外，VEGF還能通過作用于內(nèi)皮細胞上的受體，使其通透性增加，導(dǎo)致血漿蛋白濾過增加[4]。

Rho/Rho激酶（Rho/ROCK）是具有信息傳導(dǎo)和分子開關(guān)功能的信號多肽[5]。它可以通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)蛋白骨架的聚合狀態(tài)對細胞形態(tài)、細胞粘附與遷移、細胞增殖與凋亡、平滑肌收縮等多種細胞功能進行調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，激活的Rho/ROCK能上調(diào)激活蛋白（AP）-1、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）等，下調(diào)內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS），從而增強Ca2+依賴的血管平滑肌收縮，促進平滑肌細胞的增殖，促進腎臟纖維化，從而導(dǎo)致腎臟血流動力學(xué)異常、腎小球濾過屏障受損、腎小管重吸收異常等，促進糖尿病腎病的發(fā)展[2]。法舒地爾（fasudil）是Rho/ROCK信號通路選擇性抑制劑。Ishikawa等[6]研究表明，長期的法舒地爾治療能夠減少細胞外基質(zhì)的產(chǎn)生，抑制單核-巨噬細胞的浸潤和氧化應(yīng)激，上調(diào)eNOS的表達，從而達到保護腎臟的作用。馬東蔚等[7]研究發(fā)現(xiàn)法舒地爾通過抑制高糖培養(yǎng)的人腎小球系膜細胞的Rho/ROCK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而降低下游的炎癥因子和細胞因子的分泌，減少炎癥反應(yīng)及纖維化，延緩糖尿病腎病的進展。

本研究結(jié)果顯示，給予法舒地爾治療12周后，法舒地爾治療組24 h尿蛋白水平、血BUN、Scr水平明顯均低于糖尿病腎病組，具有顯著性差異（P < 0.01），提示法舒地爾能減少糖尿病腎病大鼠蛋白尿，改善腎臟功能，具有腎臟保護作用。其機制與法舒地爾通過抑制Rho/ROCK信號通路，改善腎臟血流動力學(xué)，抑制氧化應(yīng)激、細胞因子及炎癥因子，抑制腎纖維化，減輕蛋白尿有關(guān)。

總之，Rho/ROCK在糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展中有著重要的作用。本研究顯示法舒地爾對糖尿病腎病具有保護作用，抑制Rho/ROCK可能為治療糖尿病腎病提供一種新的治療策略。但是，此過程亦決定于包括上述因素在內(nèi)、還有其他多種因素之間的共同作用和平衡，法舒地爾對糖尿病腎病保護作用的具體機制，還應(yīng)進一步研究。

[參考文獻]

[1] Dronavalli S，Duka I，Bakris GL. The pathogenesis of diabetic nephropa thy[J]. J Nat Clin Pract Endocrinol Metab，2008，4（8）：444-452.

[2] Hayashi K，Wakino S，Kanda T，et al. Molecular mechanisms and therapeutic strategies of chronic renal injury：role of rho-kinase in the development of renal injury[J]. J Pharmacol Sci，2006，100（1）：29-33.

[3] Wolf G，Ziyadeh FN. Cellular and molecular mechanisms of proteinuria in diabetic nephropathy[J]. Nephron Physiol，2007，106（2）：26-31.

[4] Doi K，Eoiri E，F(xiàn)ujita T. Role of vascular endothelial growth factor in kidney disease[J]. Curr Vasc Pharmacol，2010，8（1）：122-129.

[5] Liao JK，Seto M，Noma K. Rho kinase （ROCK） inhibitors[J]. J Cardiovasc Pharmacol，2007，50（1）：17-24.

[6] Ishikawa Y，Nishikimi T，Akimoto K，et al. Long-term administration of Rho-kinase inhibitor ameliorates renal damage in malignant hyper tensive rats[J]. Hypertension，2006，47：1075-1083.

[7] 馬東蔚，王秋月，馬小羽，等. 法舒地爾通過Rho-ROCK信號通路對高糖培養(yǎng)人腎小球系膜細胞炎癥反應(yīng)及纖維化影響[J]. 中華內(nèi)科雜志，2011，7（50）：580-584.

（收稿日期：2013-02-21）