系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清B淋巴細(xì)胞刺激因子與BR3表達(dá)的相關(guān)性研究

[摘要] 目的 研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者血清B淋巴細(xì)胞刺激因子水平與BR3表達(dá)，以探討其發(fā)病機(jī)制，為臨床治療提供依據(jù)。 方法 將SLE患者40例作為病例，健康對(duì)照40例，檢測(cè)SLE患者和正常對(duì)照血清BLyS和IL-1、BR3水平，并與患者臨床活動(dòng)性評(píng)分（SLEDAI）比較。 結(jié)果 SLE組BLyS、IL-1、BR3水平（123.79±68.80、123.79±68.80、123.79±68.80）μg/L和對(duì)照組（64.25±13.76、64.25±13.76、64.25±13.76）μg/L比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；SLE患者SLE評(píng)分與BLyS、IL-1、BR3之間存在正性相關(guān)性關(guān)系（r = 0.783，P = 0.007；r = 0.654，P = 0.034；r = 0.875，P = 0.002）；BR3水平與BLyS之間存在正性相關(guān)性關(guān)系（r = 0.945，P = 0.000）；與IL-1之間不存在相關(guān)性關(guān)系（r = 0.324，P = 0.664）。 結(jié)論 BLyS、IL-1可以作為SLE病情診斷的客觀指標(biāo)；BlyS對(duì)B淋巴細(xì)胞的調(diào)控可能是通過(guò)BR3途徑實(shí)現(xiàn)的。

[關(guān)鍵詞] 系統(tǒng)性紅斑狼瘡；BLyS；BR3

[中圖分類號(hào)] R593.24+1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）14-0039-02

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）臨床表現(xiàn)多樣，主要以多組織、多系統(tǒng)、多器官損傷為主，發(fā)病以女性為主，大約為男性8倍以上。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，可涉及到抗原負(fù)荷增多、B淋巴細(xì)胞抑制缺陷、B淋巴細(xì)胞活化過(guò)度、B淋巴細(xì)胞抗體產(chǎn)生過(guò)多、免疫失耐受、T細(xì)胞功能亢進(jìn)等。B細(xì)胞被認(rèn)為主要參與到發(fā)病過(guò)程中，激活和分泌針對(duì)自身抗原的抗體。B淋巴細(xì)胞刺激因子（BLyS）又稱為B細(xì)胞活化因子（BAFF），多表達(dá)于單核細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及激活的中性粒細(xì)胞等，通過(guò)誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖、分化和分泌，增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答，其過(guò)表達(dá)可導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)SLE樣表現(xiàn)[1]。BLyS主要通過(guò)與受體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)作用，受體3（BLyS receptor 3）又稱為BAFF受體（BAFF receptor，BAFF-R），是BLyS最主要和特異性受體，是介導(dǎo)BLyS依賴性B細(xì)胞信號(hào)的主要受體，其表達(dá)直接影響B(tài)細(xì)胞的成熟和分泌，對(duì)SLE患者的癥狀有直接關(guān)系[2]。本研究通過(guò)對(duì)40例SLE患者血清BLyS水平和BR3受體水平進(jìn)行分析，研究二者直接關(guān)系，并探討其水平與癥狀直接的相關(guān)性，為SLE的發(fā)病尋找實(shí)驗(yàn)證據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對(duì)象共40例，均為2009年3月～2010年2月在本院風(fēng)濕免疫科就診的住院患者，其中男5例，女35例，男女比例1∶7，年齡15～67歲，平均（35.7±12.3）歲。所有患者均符合美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)（ARA）修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除嚴(yán)重感染、惡性高血壓和妊娠哺乳期患者。另取正常對(duì)照40例，均來(lái)自我院體檢科健康成年人，男5例，女35例，男女比例1∶7；年齡18～65歲，平均（34.9±11.9）歲。兩組在年齡、性別構(gòu)成上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

1.2 研究方法

以ELISA檢測(cè)SLE患者和正常對(duì)照血清BlyS和IL-1表達(dá)水平，RT-PCR檢測(cè)BR3水平，并與患者臨床活動(dòng)性評(píng)分（SLEDAI）比較，研究?jī)山M差異。

1.2.1 儀器與試劑 酶標(biāo)光度儀（美國(guó)Sigma公司）；全自動(dòng)生化分析儀（日本SANYO）；BLyS、IL-1試劑盒（德國(guó)TECAN公司）；檸檬酸鹽緩沖液、PBS緩沖液等（美國(guó)RD公司）；722分光光度計(jì)（武漢萬(wàn)達(dá)實(shí)驗(yàn)儀器公司）；RT-PCR儀（美國(guó)MJ公司）。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 清晨、空腹抽取SLE患者和對(duì)照肘靜脈血10 mL，5 mL按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，其余密度梯度離心，分離外周單個(gè)核細(xì)胞，進(jìn)行RT-PCR。引物長(zhǎng)度519 bp，上游5’-GGAAGACCCAGGAACCAC-3’，下游5’-AAGGCAAGCACACCAAA-3’，反應(yīng)產(chǎn)物以2%瓊脂糖凝膠分離，EB染色定量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所獲數(shù)據(jù)均錄入到SPSS19.0軟件中，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，方差齊時(shí)行t檢驗(yàn)，方差不齊進(jìn)行校正的t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料按實(shí)際發(fā)生數(shù)表示，SLEDAI評(píng)分與BLyS、IL-1水平關(guān)系比較采用Spearman相關(guān)性分析；BR3與BLyS、IL-1水平關(guān)系比較采用Pearson相關(guān)性分析。P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE組和對(duì)照組BLyS、IL-1、BR3比較

兩組比較BLyS（μg/L）、IL-1（ng/L）、BR3（μg/L）差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。見(jiàn)表1.

2.2 SLE評(píng)分與BLyS之間關(guān)聯(lián)性分析

SLE患者SLE評(píng)分與BLyS之間存在正性相關(guān)性關(guān)系（r = 0.783，P = 0.007）；與IL-1之間存在正性相關(guān)性關(guān)系（r = 0.654，P = 0.034）；與BR3之間存在正性相關(guān)性關(guān)系（r = 0.875，P = 0.002）。

2.3 BR3水平與BLyS之間關(guān)聯(lián)性分析

SLE患者BR3水平與BLyS之間存在正性相關(guān)性關(guān)系（r = 0.945，P = 0.000）；與IL-1之間不存在相關(guān)性關(guān)系（r = 0.324，P = 0.664）。

3 討論

SLE是一種自身免疫性疾病，主要臨床表現(xiàn)為貧血、WBC和血小板減少等。在抑制BLyS的小鼠中可以見(jiàn)到成熟B細(xì)胞減少，體內(nèi)免疫球蛋白水平降低；而在過(guò)度表達(dá)BLyS的小鼠中可以看到B細(xì)胞數(shù)量增加，免疫球蛋白升高，自身抗體效價(jià)升高、免疫復(fù)合物升高、免疫球蛋白沉積等，出現(xiàn)嚴(yán)重的紅斑狼瘡樣病變。使用BLyS拮抗劑治療有效[3]，因此，BLyS被認(rèn)為是SLE發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，在SLE的發(fā)病中占有重要地位。我們研究也發(fā)現(xiàn)，BLyS水平在患者中明顯高于對(duì)照，且與患者SLEDAI評(píng)分呈現(xiàn)一致性，這與其他學(xué)者研究結(jié)果基本一致[4]，說(shuō)明BLyS完全可以作為SLE病情診斷的客觀指標(biāo)，能夠反映患者病情的嚴(yán)重程度，采取針對(duì)BLyS的B細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病的拮抗阻斷治療可能有效。

細(xì)胞因子在免疫細(xì)胞的成熟、分化上起到重要作用[5，6]，本次研究發(fā)現(xiàn)IL-1水平在患者和非患者中差異明顯，說(shuō)明SLE患者炎性因子表達(dá)活躍，同時(shí)發(fā)現(xiàn)SLEDAI評(píng)分與IL-1呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，推測(cè)BLyS影響機(jī)體炎性因子分泌，炎性因子又導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)臨床癥狀。也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)IL-1可以增強(qiáng)BLyS的表達(dá)，且這種增強(qiáng)有時(shí)間依賴性[7]，二者之間呈現(xiàn)反饋性增強(qiáng)。因此可以IL水平作為病情和預(yù)后診斷的指標(biāo)之一。

在BLyS的三種受體中，BCMA主要對(duì)延長(zhǎng)抗體分泌和骨髓漿細(xì)胞存活起作用，又被稱為“孤兒受體”；TACI則調(diào)節(jié)B細(xì)胞功能，而B(niǎo)R3是BLyS的特異性受體，介導(dǎo)依賴性B細(xì)胞信號(hào)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)認(rèn)為BLyS對(duì)機(jī)體的調(diào)節(jié)可能是通過(guò)BR3途徑實(shí)現(xiàn)，當(dāng)給予BR3融合蛋白結(jié)合BLyS從而阻斷刺激因子與B細(xì)胞結(jié)合時(shí)，B細(xì)胞的增殖和分化也受到抑制。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)重組BR3蛋白可以協(xié)同抗CD3抗體，刺激T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子[8]，在B細(xì)胞發(fā)育成熟中起到主要作用。本研究發(fā)現(xiàn)SLE患者BR3遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照，且與BLyS水平呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，進(jìn)一步證實(shí)了BLyS對(duì)B淋巴細(xì)胞的調(diào)控可能是通過(guò)BR3途徑實(shí)現(xiàn)的，臨床可以嘗試通過(guò)給予某些BR3融合蛋白來(lái)阻斷BLyS的生物學(xué)作用以治療SLE。

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（收稿日期：2013-03-22）