Survivin、MMP—9在慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌中的表達與臨床意義

[摘要] 目的 探討Survivin、MMP-9在慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌中的表達情況，并探討其臨床意義。 方法 運用免疫組化SP法，檢測10例慢性宮頸炎、20例宮頸上皮內(nèi)瘤變和50例宮頸鱗癌組織中Survivin、MMP-9的表達水平，并加于分析。 結(jié)果 Survivin在慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌的表達率分別是10%、35%、68%，MMP-9在上述各組中陽性表達率分別為10%、20%、78%。 結(jié)論 宮頸鱗癌中Survivin、MMP-9呈過度表達，Survivin、MMP-9參與了宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展，對預(yù)后判斷有一定的意義。

[關(guān)鍵詞] Survivin；MMP-9；宮頸鱗癌；免疫組織化學

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）14-0026-02

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，其在我國的患病率和死亡率均占世界的1/3。近年來發(fā)現(xiàn)發(fā)病有年輕化趨向[1]，且有報道證明[2]已發(fā)現(xiàn)有未成年病例，但由于不夠重視，易發(fā)生誤診、漏診造成嚴重后果。宮頸癌有一個間隔較長并可逆轉(zhuǎn)的癌前病變時間，從良性病變發(fā)展為上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasias，CIN），癌是一個多階段、多步驟的連續(xù)過程，與多種癌基因和抑癌基因的表達、調(diào)控、細胞凋亡及血管的生長有關(guān)。Survivin基因是調(diào)亡抑制因子（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族的新成員，具有細胞凋亡抑制和細胞周期調(diào)控的雙重功能，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用[3，4]。MMP-9作為基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）中分子量最大的蛋白酶參與破壞基底膜的完整性，導(dǎo)致癌細胞向其他部位轉(zhuǎn)移，在體內(nèi)參與炎癥、血管形成、腫瘤轉(zhuǎn)移等生物學行為，其表達增加與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)[5-8]。本實驗旨在探討Survivin和MMP-9在慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸鱗癌的表達特點，以期在今后對宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移研究中拓寬思路。

1資料與方法

1.1 臨床資料

收集2009年4月～2012年1月經(jīng)保山市人民醫(yī)院確診的患者，隨機選取慢性宮頸炎（n = 10）、宮頸上皮內(nèi)瘤變（n = 20）、宮頸鱗癌（n = 50）。其中上皮內(nèi)瘤變（CIN）均屬CINⅢ，宮頸鱗癌患者50例中年齡28～66歲，平均47歲，> 45歲31例，<45歲19例；病理分級：G1級30例，G2級12例，G3級8例；臨床分期：Ⅰa10例，Ⅰb 25例，Ⅱa 9例，Ⅱb 6例；淋巴轉(zhuǎn)移12例，無淋巴轉(zhuǎn)移38例。所有患者均未接受過放療、化療或激素治療。

1.2 免疫組織化學法

一抗Survivin為AR0270單克隆抗體，工作液；MMP-9為AP0341多克隆抗體，工作液；二抗為DD13；DAB溶液KS002加強型，陽性對照片均購自廣州深達生物制品技術(shù)有限公司。采用免疫組化SP法進行染色，標本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，每個蠟塊連續(xù)4 μm 切片3張，其中1張做HE染色，所有切片采用同批次試劑檢測。

1.3 評價標準

Survivin和MMP-9以細胞胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞，均設(shè)陰性和陽性對照片，用PBS代替一抗為陰性對照，陽性對照由公司提供。采用雙盲法，評分方法參考文獻[9]。第一項，按細胞顯色有無及深淺對強度評分：無色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；第二項，每張切片隨機觀察10個視野，按每高倍鏡視野（×200）陽性細胞數(shù)百分比計分：陰性0分，<10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩項評分相乘即為陽性強度，0分為（-），1～4分為（+），5～8分為（++），9～12分為（+++），以上結(jié)果均由至少兩位病理科醫(yī)生以盲法觀察確定。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計處理軟件進行數(shù)據(jù)處理，統(tǒng)計方法采用χ2檢驗（根據(jù)樣本量的大小采用χ2檢驗專用公式、校正公式和確切概率法進行計算）。

2 結(jié)果

2.1 Survivin和MMP-9在慢性宮頸炎、子宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌的表達

Survivin和MMP-9在慢性宮頸炎、子宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌的表達呈上升趨勢，見表1、2。將Survivin 在慢性宮頸炎、CIN和宮頸癌的陽性率進行兩兩χ2檢驗，結(jié)果如下：三者陽性率比較χ2=17.253，P = 0.000 < 0.05，差異有統(tǒng)計學意義。CIN表達率和慢性宮頸炎比較，χ2=1.044，P =0.307 > 0.05，統(tǒng)計學意義不明顯，綜合文獻考慮，不排除病例量較少的因素。宮頸癌和慢性宮頸炎比較χ2=11.055，P =0.001，差異有高度統(tǒng)計學意義。宮頸癌和CIN比較χ2=8.254，P = 0.004，差異有統(tǒng)計學意義。同時將MMP-9在慢性宮頸炎、CIN和宮頸癌的陽性率進行兩兩χ2檢驗，結(jié)果如下：三者陽性率比較χ2=30.894，P = 0.000 < 0.05，差異有統(tǒng)計學意義。CIN表達率和慢性宮頸炎比較，χ2=0.030，P =0.862 > 0.05，統(tǒng)計學意義不明顯，綜合文獻考慮，不排除病例量較少的因素。宮頸癌和慢性宮頸炎比較χ2=14.415，P =0.00，差異有明顯統(tǒng)計學意義。宮頸癌和CIN比較χ2=20.283，P = 0.000，差異有統(tǒng)計學意義。

2.2 Survivin、MMP-9表達與臨床病理特征的關(guān)系

由表3可見，Survivin的陽性表達與宮頸鱗癌的臨床分期、病理分級之間差異有統(tǒng)計學意義，而年齡和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較差異無統(tǒng)計學意義。MMP-9的陽性表達與臨床分期、病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面差異有統(tǒng)計學意義，與年齡無關(guān)。

3 討論

Survivin基因定位于17q25，相對分子量16 500，是目前發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制作用最強的基因。Survivin蛋白具有明顯的組織特異性，其主要分布于胚胎及分化未成熟的組織，在婦科腫瘤尤其是卵巢癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌的癌組織中高度表達，且與癌組織的浸潤、轉(zhuǎn)移、臨床分期及預(yù)后關(guān)系密切[10]，本實驗中Survivin在慢性宮頸炎、子宮頸上皮內(nèi)瘤變及子宮頸鱗癌組織中的陽性表達率依次上升，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），臨床分期、組織的分化程度與陽性率有關(guān)系，提示Survivin在宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中起作用，其表達程度可作為一項預(yù)后判斷的標志。

在腫瘤的發(fā)展過程中細胞外基質(zhì)是癌轉(zhuǎn)移必須突破的屏障，MMP是參與降解細胞外基質(zhì)的主要直接作用者，其中Ⅱ型膠原酶（包括MMP-2和MMP-9）與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系最為密切，可以用于對腫瘤侵襲性的監(jiān)測[11]。MMP-9高表達的腫瘤細胞在侵襲、轉(zhuǎn)移過程中突破各種屏障能力較高，此外具有轉(zhuǎn)移傾向的癌細胞可自身分泌或誘導(dǎo)其他細胞分泌大量的MMP-9，可以說MMP-9參與破壞基底膜的完整性，導(dǎo)致癌細胞向其他部位轉(zhuǎn)移，在體內(nèi)參與炎癥、血管形成、腫瘤轉(zhuǎn)移等生物學行為，其表達增加與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)[5]。本實驗表明與慢性宮頸炎和宮頸上皮內(nèi)瘤變相比，宮頸鱗癌的陽性率明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），而在慢性宮頸炎和宮頸上皮內(nèi)瘤變陽性差異不明顯，不排除案例較少的因素。實驗還提示MMP-9表達與宮頸鱗癌臨床分期、組織的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系。

本實驗表明Survivin和MMP-9在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展中有相互促進作用，可對預(yù)后進行一定的判斷，同時可以為今后的宮頸鱗癌的研究提供一個思路。

[參考文獻]

[1] 萬磊，萬建平，張燕玲，等. 子宮頸癌年輕化趨勢的臨床[J]. 中國腫瘤臨床，2004，31（10）：19-21.

[2] 張國蘭，蔡鴻寧. 青春期宮頸癌1例誤診分析[J]. 癌癥防治研究，2012，39（5）：611-612.

[3] Ambrosini G，Adida C，Sirugo G，et al. Induction of apoptosis and inhibition of cell proliferation by surviving gene targeting[J]. Biol Chem，1998，273（18）：11177-11182.

[4] Li F，Ambrosini G，Chu EY，et al. Control of apoptosis and mitotic spindle checkpoint by surviving[J]. Nature，1998，396（6711）：580-584.

[5] Sampieri CL，dela Pena S，Ochoa-Lara M，et al. Expression of matrix metalloproteinases 2 and 9 in human gastric cancer and superficialgastritis[J]. World J Gastroenterol，2010，16（12）： 1500-1505.

[6] Stanley RH，Lauri AA. World Health Organization classificationof tumors pathology and genetics of tumors of the digestive systems[M]. Lyon：IARC Press，2001：3.

[7] Yasumoto K，Koizumi K，Kawashima A，et al. Role of the CXCL12/CXCR4 axis in peritoneal carcinomatosis of gastric cancer[J]. Cancer Res，2006，66（4）：2181-2187.

[8] Lee HJ，Kim SW，Kim HY，et al. Chemokine receptor CXCR4 expression，function，and clinical implications in gastric cancer[J]. Int J Oncol，2009，34（2）：473-480.

[9] 許良中，楊文濤. 免疫組織化學反應(yīng)結(jié)果的判斷標準[J]. 中國癌癥雜志，1996，6（3）：229-231.

[10] 艾志宏，豐有吉. 存活蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達及其在細胞凋亡中的作用[J]. 腫瘤，2008，28（8）：685-688.

[11] Ylisimio S，Hoyhtya M，Turpeenniemi Hujanen T. Serum matrix meta lloproteinases-2，-9 and tissue inhibitors of metallopmte inases-i，-2 in lung cancer TIMP-1 asapmgnostiemarker[J]. Anficancer Res，2000，20：1311-1316.

（收稿日期：2013-03-13）